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    甘肅省部分地區(qū)羔羊死亡病原調(diào)查

    2021-08-05 08:44:18高生智潘永紅史萬(wàn)貴李有全
    甘肅畜牧獸醫(yī) 2021年7期
    關(guān)鍵詞:華池縣永靖縣呂氏

    高生智,潘永紅*,梁 斌,詹 芳,史萬(wàn)貴,李有全

    (1.甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,甘肅 蘭州 730030;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蘭州獸醫(yī)研究所,甘肅 蘭州 730030)

    2019—2020年甘肅省部分地區(qū)的羊只出現(xiàn)了以貧血、高熱、消瘦、出血和體表淋巴結(jié)腫大為主要特征的臨床癥狀,呈點(diǎn)狀散發(fā),屬地方性動(dòng)物疫病,初步懷疑為羊泰勒蟲(chóng)病。為進(jìn)一步了解臨潭縣、永靖縣、華池縣、榆中縣等地區(qū)羊泰勒蟲(chóng)病病原感染情況,于2020年3—5月對(duì)以上4個(gè)縣患病羊只進(jìn)行了羊耳尖血涂片,并采集羊血液,一一對(duì)應(yīng)編號(hào),帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血液涂片染色鏡檢和羊泰勒蟲(chóng)PCR檢測(cè)。對(duì)鏡檢有典型蟲(chóng)體、有疑似蟲(chóng)體和部分鏡檢陰性血液涂片對(duì)應(yīng)的全血樣品進(jìn)行羊泰勒蟲(chóng)PCR檢測(cè),結(jié)果表明:永靖縣、榆中縣、臨潭縣的羊泰勒蟲(chóng)病是呂氏泰勒蟲(chóng)和尤氏泰勒蟲(chóng)的混合感染,而華池縣羊泰勒蟲(chóng)病是單一的尤氏泰勒蟲(chóng)感染,證實(shí)了臨床懷疑診斷?,F(xiàn)將試驗(yàn)總結(jié)如下。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 血片 來(lái)自臨潭縣、永靖縣、華池縣、榆中縣,每縣90張。于羊耳尖采血推制血片,自然風(fēng)干,甲醇固定,吉姆薩染色。

    1.1.2 全血 來(lái)自臨潭縣、永靖縣、華池縣、榆中縣,每縣90份。于羊頸靜脈采血,搖勻,帶回實(shí)驗(yàn)室凍存待檢。

    1.1.3 血液/細(xì)胞/組織基因組DNA提取試劑盒購(gòu)自天根公司,批號(hào)20200618。

    1.1.4 普通PCR試劑 引物兩對(duì),尤氏引物、呂氏引物;DNA聚合酶(premix Tap),DEPC水,dNTP,標(biāo)準(zhǔn)DNA(Marker),上樣緩沖液,1%瓊脂糖凝膠,常規(guī)電泳液。

    1.1.5 移液器和槍頭 2 μl、10 μl、50 μl、100 μl、200 μl、1 000 μl單道移液器,高壓滅菌配套槍頭。

    1.1.6 其他 顯微鏡、生物安全柜、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)。

    1.2 方法

    1.2.1 血片 常規(guī)顯微鏡鏡檢。鏡檢20高倍以上野,發(fā)現(xiàn)5個(gè)以上典型蟲(chóng)體為有典型蟲(chóng)體;發(fā)現(xiàn)1~2個(gè)疑似蟲(chóng)體為有疑似蟲(chóng)體;未發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)體為無(wú)蟲(chóng)。

    1.2.2 全血 按試劑盒說(shuō)明書(shū)提取DNA模板,普通PCR鑒定。

    試驗(yàn)成立:電泳結(jié)束后,陽(yáng)性對(duì)照樣品應(yīng)出現(xiàn)2條帶,分別為303 bp和530 bp。陰性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增條帶。否則,此次試驗(yàn)視為無(wú)效。

    陽(yáng)性判定:如果待檢樣品擴(kuò)增產(chǎn)物在303 bp和(或)530 bp處出現(xiàn)條帶,則為陽(yáng)性。如出現(xiàn)2條帶,則判定該待檢樣品為兩種泰勒蟲(chóng)陽(yáng)性;如出現(xiàn)1條帶,則判定該待檢樣品為相對(duì)應(yīng)的泰勒蟲(chóng)陽(yáng)性。

    陰性判定:如待檢樣品無(wú)擴(kuò)增條帶,判定為陰性。

    2 結(jié)果

    2.1 血片

    如表1所示,通過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)4個(gè)地區(qū)患病羊只的蟲(chóng)體檢出率不同,臨潭縣最高,為68.42%,華池縣最低,為36.67%。

    表1 4個(gè)地區(qū)蟲(chóng)體檢出結(jié)果

    2.2 全血

    如表2所示,4個(gè)地區(qū)患病羊只蟲(chóng)體感染率不同,除華池縣以外,其余3個(gè)縣的患病羊只都同時(shí)感染2種泰勒蟲(chóng)。

    表2 4個(gè)地區(qū)樣本泰勒蟲(chóng)PCR檢測(cè)結(jié)果

    2.3 血片對(duì)應(yīng)全血

    從表3中可以看出,鏡檢有蟲(chóng)、PCR確認(rèn)有泰勒蟲(chóng)的比例為45.90%(56/122),鏡檢有蟲(chóng)、PCR確認(rèn)無(wú)泰勒蟲(chóng)的比例為16.39%(20/122),鏡檢無(wú)蟲(chóng)、PCR確認(rèn)有泰勒蟲(chóng)的比例為27.87%(34/122),鏡檢無(wú)蟲(chóng)、PCR確認(rèn)無(wú)泰勒蟲(chóng)的比例為9.84%(12/122),鏡檢與PCR結(jié)果一致率為55.74%(68/122),鏡檢與PCR結(jié)果不一致率為44.26%(54/122)。

    表3 4個(gè)地區(qū)樣本泰勒蟲(chóng)鏡檢結(jié)果 單位:個(gè)

    3 分析與討論

    在華池縣檢測(cè)到尤氏泰勒蟲(chóng),在榆中縣、永靖縣、臨潭縣檢測(cè)到呂氏泰勒蟲(chóng)和尤氏泰勒蟲(chóng),確認(rèn)了榆中縣、永靖縣、臨潭縣羊泰勒蟲(chóng)病是呂氏泰勒蟲(chóng)和尤氏泰勒蟲(chóng)的混合感染;華池縣羊泰勒蟲(chóng)病是單一的尤氏泰勒蟲(chóng)感染。調(diào)查4縣平均陽(yáng)性率為44.95%,優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種為尤氏泰勒蟲(chóng),其次是呂氏泰勒蟲(chóng)。

    羊泰勒蟲(chóng)病在甘肅分布廣泛[1-4],各地感染率、發(fā)病率、死亡率存在明顯差異。此次鏡檢平均陽(yáng)性率為62.3%(76/122),PCR平均陽(yáng)性率為73.77%(90/122),鏡檢與PCR結(jié)果一致率為55.74%(68/122)。

    在羊泰勒蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查中,長(zhǎng)期沿用采血涂片染色鏡檢的方法是急性發(fā)病病例確診的經(jīng)典方法[1-4],但在大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查時(shí)稍顯不足,尤其是紅細(xì)胞染蟲(chóng)率偏低時(shí)易出現(xiàn)漏檢現(xiàn)象,血液涂片染色檢查要求操作人員熟練掌握制片技術(shù),熟悉羊泰勒蟲(chóng)、無(wú)漿體的蟲(chóng)體形態(tài)和大小,否則當(dāng)出現(xiàn)混合感染時(shí)易造成誤檢漏檢。此次4縣鏡檢誤差率為44.26%(54/122)。

    國(guó)外報(bào)道的羊泰勒蟲(chóng)有4個(gè)種,即萊氏泰勒蟲(chóng)、綿羊泰勒蟲(chóng)、分離泰勒蟲(chóng)和隱藏泰勒蟲(chóng),其中萊氏泰勒蟲(chóng)具有致病性,由其引起的泰勒蟲(chóng)病也稱(chēng)惡性泰勒蟲(chóng)病。自1958年我國(guó)四川甘孜藏族自治州報(bào)道該病以來(lái),甘肅、青海、寧夏、陜西、遼寧、內(nèi)蒙古陸續(xù)報(bào)道有該病發(fā)生[5-7]。殷宏等(2002)通過(guò)系統(tǒng)研究后發(fā)現(xiàn),我國(guó)羊泰勒蟲(chóng)病的病原并非萊氏泰勒蟲(chóng),而是呂氏泰勒蟲(chóng)和尤氏泰勒蟲(chóng)。同時(shí)證實(shí)甘肅省夏河縣、寧縣、天??h羊的泰勒蟲(chóng)是單一的呂氏泰勒蟲(chóng),在臨潭縣、張家川縣及青海省湟源縣的羊泰勒蟲(chóng)是呂氏泰勒蟲(chóng)和尤氏泰勒蟲(chóng)的混合[5]。筆者再次證實(shí)了永靖縣、榆中縣、臨潭縣羊泰勒蟲(chóng)是呂氏泰勒蟲(chóng)和尤氏泰勒蟲(chóng)的混合;華池縣羊泰勒蟲(chóng)是尤氏泰勒蟲(chóng),從而得知甘肅省羊泰勒蟲(chóng)病的病原是尤氏泰勒蟲(chóng)和呂氏泰勒蟲(chóng)。

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