早期檢測Phe篩查苯丙酮尿癥研究

駱福裕，陳俊坤，劉傳榮，黃俊高，甘錦繪，賴貴華，涂相文

（贛州市婦幼保健院新生兒疾病篩查中心，江西 贛州 341000）

苯丙酮尿癥（phenylketonuria，PKU）是因患兒體內PAH活性降低、喪失或其輔酶四氫生物喋呤缺乏導致苯丙氨酸在肝臟中代謝失償，不能正常轉化成酪氨酸，導致旁路代謝增強，使體內Phe濃度增高，大量苯丙酮酸、苯乙酸和苯乳酸從尿中排出，屬常染色體隱形遺傳，是常見的遺傳代謝病[1]。根據(jù)發(fā)病機制苯丙酮尿癥分為PAH 缺乏癥和四氫生物蝶呤缺乏癥（tetrahydrobiopterin，BH4D）。因此，早期Phe 新生兒疾病篩查（newborn screening，NBS）是發(fā)現(xiàn)PKU患兒并及時給予低苯丙氨酸飲食治療的關鍵，也是目前預防PKU患兒最有效的方法。贛州市婦幼保健院新生兒疾病篩查中心負責贛南18 個縣市的新生兒疾病篩查工作，現(xiàn)將2014 年至2019年共篩查655 179名新生兒PKU篩查結果情況進行回顧性分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取贛南18 個縣市100 多家助產(chǎn)機構2014 年 1 月至 2019 年 12 月出 生 的 655 179 名活產(chǎn)新生 兒 。充分哺乳，采集出生后3～7 d 的新生兒濾紙干血斑（dried blood spot，DBS），接產(chǎn)醫(yī)院根據(jù)《新生兒疾病篩查血片采集技術規(guī)范》[2]中要求采足跟血制成DBS。采血時間原則上一般不超過出生后20 d。血片懸置晾干后由EMS快遞和冷鏈專人工作人員負責將篩查標本遞送至贛州市新生兒疾病篩查中心進行Phe 檢測。所有樣本的采集和實驗檢測均經(jīng)贛州市婦幼保健院醫(yī)學倫理委員會批準并在新生兒家屬簽署知情告知后的情況下完成所有工作。

1.2 方法 標本用Puncher 9全自動打孔儀進行打孔，采用芬蘭全自動新生兒疾病篩查系統(tǒng)（genetic screening processor，GSP）時間分辨熒光免疫分析儀進行熒光定量法檢測DBS 中Phe 含量，配套苯丙氨酸試劑盒標準品及質控品。實驗操作嚴格按照試劑盒提供的說明書流程進行，本實驗室Phe 值≥2.0 mg/dL 判斷為高風險指標，工作人員對原DBS 進行原血復查，Phe≥2.0 mg/dL，則立即通知召回復查，召回標本若仍≥2.0 mg/dL，則通知患兒家屬盡早做進一步的氨基酸譜分析；若Phe≥2.0 mg/dL（≥120 μmol/L），血Phe 與酪氨酸（Tyr）比值（Phe/Tyr）＞2.0 則診斷為高苯丙氨酸血癥（HPA），應立即外送標本轉上級醫(yī)院進行PAH基因檢測、尿蝶呤譜分析、紅細胞二氫蝶呤還原酶活性檢測，進行四氫生物蝶呤缺乏癥（BH4D）鑒別。血Phe≥120 μmol/L，并排除BH4D后，診斷為經(jīng)典型PKU、輕度PKU或輕度HPA。

1.3 質量控制 贛州市新生兒疾病篩查中心自開展以來每年參加3 次衛(wèi)生部臨床檢驗中心標準的濾紙干血斑苯丙氨酸檢測室間質量評價，均合格。實驗室室內質量控制每一批實驗均按照要求進行做雙孔定標校準，每塊實驗板均做低、高值室內質控，確保實驗結果的準確性。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進行描述性統(tǒng)計分析，計數(shù)資料用率（%）表示。

2 結果

2.1 篩查結果分析 2014 年至2019 年總共分娩活產(chǎn)新生兒724 154 名，進行新生兒疾病篩查Phe 檢測共計655 179名，篩查率逐年上升，分別為79.2%、85.8%、92.2%、95.8%、95.5%、96.3%，初篩陽性數(shù)為859例，已召回841例，總召回率為 97.9%，確診數(shù) 27 例，其中經(jīng)典型 PKU 3 例、輕度 PKU 6 例、BH4D 9 例、輕度HPA 為 9 例，發(fā)病率為4.1/萬（27/655 179）。見表1。

表1 Phe篩查結果分析

2.2 確診陽性患者治療情況 本研究發(fā)現(xiàn)27 例確診陽性患者，其中9 例為輕度HPA，不需治療，但需定期進行隨訪復查血Phe 結果，如果Phe 結果超出一定范圍，應進行干預治療，9例PKU需飲食治療，治療依從性高，9例為BH4D患兒（非經(jīng)典型PKU），需進行美多巴以及5-羥色氨酸聯(lián)合BH4藥物治療，27例患兒體格和智力發(fā)育均較好且繼續(xù)接受長期、定期隨訪。

3 討論

PKU 是一種導致新生兒體格發(fā)育落后及出現(xiàn)智力低下的遺傳代謝性疾病，苯丙酮尿癥患兒在早期時臨床癥狀尚不明顯，往往不太會引起家屬及醫(yī)生的注意，因而易延誤患兒的最佳治療時間，造成大腦不可逆的重大損傷，因此，新生兒疾病篩查是一項三級預防的高風險檢測工作，早期檢測Phe新生兒疾病篩查，是發(fā)現(xiàn)PKU患兒并及時給予低苯丙氨酸飲食治療的關鍵。越早發(fā)現(xiàn)，越早治療，其患兒預后情況也會越佳。本研究結果顯示，2014 年至2019 年總共分娩活產(chǎn)新生兒724 154名，進行新生兒疾病篩查Phe檢測共計655 179名，篩查率逐年上升，分別為79.2%、85.8%、92.2%、95.8%、95.5%、96.3%。主要原因：①在本省及市衛(wèi)生行政管理部門的大力支持下，已將新生兒疾病篩查工作納入年終考核項目之一，也逐力加強對各縣市醫(yī)療機構的督導和監(jiān)管；②從2014 年開始，到目前為止已有11 個縣被納入貧困地區(qū)新生兒疾病篩查，進行免費二病篩查（PKU、TSH）；③我市醫(yī)保政策的不斷完善；④加大宣傳力度，進行宣教告知，使家屬更主動的參與到新生兒疾病篩查工作中。從而促進本市新生兒早期檢測Phe苯丙酮尿癥篩查率的不斷提高。

本研究結果顯示，贛州市新篩查中心6年共篩查新生兒655 179 例 ，PKU 初 篩 陽 性 859 例 ，召 回 841 例 ，召 回 率 為97.9%；確診陽性數(shù)為27例，其中經(jīng)典型PKU 3例、輕度PKU 6例、BH4D（非經(jīng)典型 PKU）9 例、輕度 HPA 9 例，發(fā)病率為 4.1/萬。有研究顯示，PKU 的發(fā)病率也有地域性差異，呈現(xiàn)北方高而南方地區(qū)低的趨勢。王興等[3]研究顯示，甘肅省苯丙酮尿癥總體檢出率為1/3420，徐艷華等[4]報道顯示全國PKU發(fā)病率為8.6/10 萬（1∶11681）,李蓓等[5]報道廣州市苯丙酮尿癥發(fā)病率為1∶30 606，鄒團標等[6]報道云南省苯丙酮尿癥發(fā)病率為0.41/萬（1∶24 125），可見贛州市發(fā)病率低于全國水平，略高于廣州市，和云南省相接近，符合我國南低北高的特點。BH4D 又稱非經(jīng)典型PKU,是苯丙氨酸羥化酶的輔酶缺乏，從而導致酶的活性降低。約10%～15%的高苯丙氨酸血癥患者為BH4D，其中以6-丙酮酰四氫蝶呤合成酶（PTPS）缺乏型最常見[7]，本研究中檢出BH4D 9 例（均為PTPS缺乏型），占PKU 的50%，明顯高于全國的10%～15%，也高于福建省的20.00%[8]，本省九江市BH4 缺乏癥發(fā)病率為35.7%[9]，也略高于九江市，其原因仍待于進一步的探究。PKU是可治療的遺傳代謝病，通過早期檢測Phe 結果，經(jīng)篩查確診的新生兒通過及時控制Phe 的攝入可以達到滿意的治療效果，Phe 濃度是評價治療效果的金標準，控制患兒血Phe濃度在理想的范圍內，也是新生兒疾病篩查的最終目的[10]。

綜上所述，贛州市新生兒苯丙酮尿癥發(fā)病率明顯低于全國平均水平，在今后全面落實篩查質量管理措施中，實施層層質量把關，仍需政府部門的大力支持，加大政策支持力度，為提高PKU 患兒治療依從性，打下基礎，從2014 年開始篩查中心按照（贛衛(wèi)婦幼字[2014]3 號）文件精神，實施“誰篩查誰救助”的原則，將歷年累積的、符合政策的患兒一并納入救助范圍。2018 年苯丙酮尿癥治療性食品進入本院定點銷售，率先納入本市醫(yī)保報銷，在2018年上半年積極推進遺傳代謝病出生缺陷救助項目的實施。加強和完善新生兒疾病篩查信息化網(wǎng)絡建設和管理，開展專業(yè)技術人員培訓，加強健康促進，多渠道廣泛宣傳PKU 知識宣傳，有效提高贛州市新生兒PKU 篩查率和召回率，及時對確診患兒進行規(guī)范診療，從而減少或避免因PKU 致殘兒童發(fā)生。通過早期檢測Phe 不僅能提高患兒的康復和生存質量，同時，能為夫妻雙方的再生育及患兒將來的發(fā)育提供更好的遺傳咨詢，提高贛南出生人口素質。