腦梗死急性期患者血清let-7f表達(dá)與病情和神經(jīng)功能缺損程度的相關(guān)性研究

劉新寧

（遼寧省阜新市第二人民醫(yī)院（阜新市婦產(chǎn)醫(yī)院），遼寧 阜新 123000）

急性腦梗死是一種最常見(jiàn)的自發(fā)性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，是由單一或多種大腦供血中斷引起的，通常由動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄、血栓性栓塞引起[1-2]。根據(jù)梗死灶的位置、數(shù)目和大小可能出現(xiàn)不同癥狀和結(jié)果。約有1/3 的急性腦梗死患者會(huì)出現(xiàn)不同程度神經(jīng)功能缺損，影響患者預(yù)后[3]。早期恢復(fù)缺血部位腦組織血液供應(yīng)對(duì)急性腦梗死患者的治療具有重要意義。目前腦梗死3 h后，通過(guò)頭部CT或MRI能排除急性神經(jīng)功能障礙的其他原因，但診斷相對(duì)滯后[4]。尋找一種早期診斷急性腦梗死的生物標(biāo)志物成為目前腦梗死研究的熱點(diǎn)?；诖?，本研究以157例腦梗死急性期患者及50名健康體檢者作為研究對(duì)象，旨在探討腦梗死急性期患者血清let-7f表達(dá)水平與病情和神經(jīng)功能缺損程度的相關(guān)性研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年5月至2019年5月本院神經(jīng)內(nèi)科收治的157 例腦梗死急性期患者作為病例組，其中男81例，女76 例；年齡45～82 歲，平均年齡（63.24±9.48）歲；發(fā)病時(shí)間1～62 h，平均發(fā)病時(shí)間（25.57±3.29）h。另選取本院健康體檢者50名作為正常組，其中男27名，女23名，年齡46～82歲，平均年齡（64.08±9.16）歲；發(fā)病時(shí)間1～62 h，平均發(fā)病時(shí)間（26.23±3.49）h。兩組臨床資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①首次發(fā)病，在發(fā)病24 h內(nèi)到本院就診；②年齡＞45歲；③頭部CT或MRI證實(shí)為急性腦梗死[5]；④患者及家屬對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近期（3個(gè)月內(nèi)）無(wú)抗炎和免疫抑制劑藥物服用史；②腦出血、血液病或腫瘤引起的出血；③患有嚴(yán)重肝、腎、心疾病及近期做過(guò)大手術(shù)患者；④昏迷患者。

1.2 方法[6]病例組入院后立即抽取靜脈血3 mL，正常組抽取清晨靜脈血3 mL，2 000 r/min 離心10 min 分離血清后-80 ℃保存?zhèn)溆?；取出加有TRIzol的全血，根據(jù)RNA提取試劑盒（美國(guó)Life Technologies公司）操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行總RNA提取，反轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國(guó)ABI 公司）說(shuō)明在37 ℃60 min，95 ℃5 min 的逆轉(zhuǎn)錄條件下合成cDNA。根據(jù)SYBR Premix Ex Taq TM II熒光定量PCR試劑盒（上海生工生物工程有限公司）說(shuō)明進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為95 ℃預(yù)加熱15 min，1個(gè)循環(huán)；94 ℃ 15 s，65 ℃ 30 s，72 ℃ 34 s，40 個(gè)循環(huán)。miR-let-7f 引物序列：上游引物為5'-UAGCAGCACAUAAUGGUUUGUG-3'，下游引物為：5'-UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG-3'；GAPDH引物序列：上游引物為5'-TCCCATCACCATCTTCCAG-3，下游引物為：5'- GGTATCCATCGCCATGCTC -3’。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)對(duì)其表達(dá)量進(jìn)行結(jié)果分析，以GADPH作為內(nèi)參，采用 2-△△Ct法計(jì)算mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 觀察指標(biāo) 探討各組血清let-7f與病情惡化、神經(jīng)功能缺損程度及病梗死灶面積的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以“”表示，多組間比較采用方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清let-7f 與病情惡化的關(guān)系 根據(jù)病例組病情惡化情況分為好轉(zhuǎn)組（n=49）、穩(wěn)定組（n=50）以及惡化組（n=58）；病例組血清let-7f 表達(dá)水平較正常組明顯升高，且隨著病情不斷的惡化其水平也不斷升高（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 各組血清let-7f與病情惡化的關(guān)系（，μg/L）Table 1 Relationship between serum let-7f and disease deterioration in each group(,μg/L)

表1 各組血清let-7f與病情惡化的關(guān)系（，μg/L）Table 1 Relationship between serum let-7f and disease deterioration in each group(,μg/L)

注：與正常組比較，aP＜0.05；與好轉(zhuǎn)組比較，bP＜0.05；與穩(wěn)定組比較，cP＜0.05

0.74±0.22a 0.35±0.11a 0.15±0.05abc 12.234＜0.001組別正常組病例組好轉(zhuǎn)組穩(wěn)定組惡化組F值P值例數(shù)50 157 49 50 58 let-7f 1.08±0.33

2.2 各組血清let-7f 與神經(jīng)功能缺損程度的關(guān)系 根據(jù)病例組神經(jīng)功能缺損程度分為輕度缺損組（n=66）、中度缺損組（n=53）及重度缺損組（n=38）；病例組血清let-7f 表達(dá)水平較正常組明顯升高，且隨著神經(jīng)功能缺損程度的加重其表達(dá)水平也不斷升高（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 各組血清let-7f與神經(jīng)功能缺損程度的關(guān)系（，μg/L）Table 2 Relationship between serum let-7f and neurological deficit in each group(,μg/L)

表2 各組血清let-7f與神經(jīng)功能缺損程度的關(guān)系（，μg/L）Table 2 Relationship between serum let-7f and neurological deficit in each group(,μg/L)

注：與正常組比較，aP＜0.05；與輕度缺損組比較，bP＜0.05；與中度缺損組比較，cP＜0.05

0.75±0.21a 0.38±0.12ab 0.16±0.05abc 15.245＜0.001正常組病例組輕度缺損組中度缺損組重度缺損組F值P值50 157 66 53 38 1.08±0.33組別 例數(shù)let-7f

2.3 各組血清let-7f 與病梗死灶面積的關(guān)系 根據(jù)病例組病梗死灶面積大小分為小面積梗死灶組（n=57）、中等面積梗死灶組（n=49）及大面積梗死灶組（n=51）；病例組血清let-7f 表達(dá)水平較正常組明顯升高，且隨著病梗死灶面積的不斷增加其表達(dá)水平也在不斷增加（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 各組血清let-7f與病梗死灶面積的關(guān)系（，μg/L）Table 3 Relationship between serum let-7f and infarct size in each group(,μg/L)

表3 各組血清let-7f與病梗死灶面積的關(guān)系（，μg/L）Table 3 Relationship between serum let-7f and infarct size in each group(,μg/L)

注：與正常組比較，aP＜0.05；與小面積梗死灶組比較，bP＜0.05；與中等面積梗死灶組比較，cP＜0.05

0.80±0.23a 0.39±0.13ab 0.10±0.03abc 18.742＜0.001組別正常組病例組小面積梗死灶組中等面積梗死灶組大面積梗死灶組F值P值例數(shù)50 157 57 49 51 let-7f 1.08±0.33

3 討論

急性腦梗死是影響人類(lèi)健康的最常見(jiàn)疾病之一，是導(dǎo)致死亡的第二大原因，也是中國(guó)第一大急性腦梗死原因[6-7]。急性腦梗死導(dǎo)致大腦缺氧，進(jìn)而導(dǎo)致缺血性中風(fēng)和腦組織破壞。急性腦梗死導(dǎo)致中國(guó)死亡率上升（每年超過(guò)100萬(wàn)人），大多數(shù)患者患有偏癱[8-9]。增加的膽固醇沉積和動(dòng)脈粥樣硬化是急性腦梗死的特征，目前可用的治療方法只能降低癥狀的強(qiáng)度。急性腦梗死引起神經(jīng)細(xì)胞壞死等損傷，目前的治療無(wú)法恢復(fù)。而生物標(biāo)記物是一種有助于評(píng)估疾病風(fēng)險(xiǎn)、疾病診斷甚至是治療方法和預(yù)后療效的臨床指標(biāo)，且急性腦梗死在臨床上應(yīng)用的生物標(biāo)記物并不完善[10]。

本研究結(jié)果顯示，病例組血清let-7f 表達(dá)水平較正常組明顯升高（P＜0.05），且隨著病情不斷惡化、神經(jīng)功能缺損程度加重或梗死灶面積不斷增加其表達(dá)水平也不斷升高（P＜0.05）。分析原因?yàn)椋琹et-7f 作為一種特異性的神經(jīng)元蛋白產(chǎn)物，其在神經(jīng)元中高度表達(dá)，有研究結(jié)果顯示，其在血-腦屏障及細(xì)胞膜損傷后可輕易通過(guò)，且神經(jīng)元損傷后也可釋放[11]；同時(shí)，可在血液中保持穩(wěn)定，方便檢測(cè)。除上述原因外，血清let-7f 也參與細(xì)胞凋亡等病理過(guò)程，且起不可或缺的重要作用，與各類(lèi)型神經(jīng)退行性疾病密切相關(guān)[12]。

綜上所述，血清let-7f 表達(dá)水平在腦梗死急性期患者體內(nèi)變化明顯，與病情和神經(jīng)功能缺損程度密切相關(guān)，是一種可用于輔助診斷和治療腦梗死急性期的指標(biāo)，值得臨床推廣應(yīng)用。