青楷槭化學(xué)成分及抗氧化活性的研究

劉便強(qiáng),仲 乙,沈光海 (延邊大學(xué)藥學(xué)院，吉林 延吉 133002)

青楷槭AcertegmentosumMaxim.為槭樹(shù)科槭屬植物[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明青楷槭具有抗炎、護(hù)肝、抗癌、抗氧化、抗胃病、預(yù)防糖尿病和高血壓等諸多藥理作用[2]。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

Variance-unity300核磁共振儀為美國(guó)VarinomInc產(chǎn)品；薄層板、層析用硅膠(300～400目)為青島海洋化工廠產(chǎn)品；酶標(biāo)儀(SUNRISE)為上海金鴛醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品；維生素C為上海麥克林生化科技有限公司產(chǎn)品；試劑均為分析純。

青楷槭采集于吉林省延邊朝鮮族自治州安圖縣，由沈光海副教授鑒定為槭樹(shù)科槭屬A.tegmentosum的干燥莖，樣本保存在延邊大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 提取與分離鑒定

取2.0 kg青楷槭干燥莖，用95%乙醇回流提取3次，回收溶劑得到乙醇提取物165.7 g。乙醇提取物懸浮于水中，依次用CH2Cl2、EtOAc進(jìn)行萃取，回收溶劑，分別得到CH2Cl2層49.7 g、EtOAc層14.3 g、H2O層73.2 g。CH2Cl2層和EtOAc層經(jīng)正、反相硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱層析等方法分離得到compound 1～7和8～15。通過(guò)1H-NMR及13C-NMR等波譜方法對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。

1.3 抗氧化活性實(shí)驗(yàn)

利用DPPH法，以Vitamin C溶液做陽(yáng)性對(duì)照，以DPPH溶液作為標(biāo)準(zhǔn)空白對(duì)照，利用以下公式計(jì)算各樣品的清除率，每個(gè)樣品測(cè)定3次。用以下公式計(jì)算各樣品的清除率(%)：

清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100%

式中：Ai為加試樣反應(yīng)后DPPH溶液吸光度(10 μL樣品和90 μL DPPH)；Aj為樣品溶液吸光度(10 μL樣品和90 μL無(wú)水乙醇)；Ac為只加DPPH的溶液的吸光度(10 μL無(wú)水乙醇和90 μL DPPH)。

2 結(jié) 果

2.1 化合物的NMR數(shù)據(jù)及結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無(wú)色液狀物；FAB-MS(positive mode)m/z:413[M+Na]+,390[M]+。1H-NMR(300 MHz,CDCl3)δH(ppm):8.07(4H,s,H-2,3,5,6),4.38-4.15(4H,m,H-1′,1″),1.73(2H,dt,J=12.1,6.0 Hz,H-2′,2″),0.90-0.84(6H,m,H-6′,6″),0.95(6H,t,J=7.4 Hz,H-8′,8″)。13C-NMR(75 MHz,CDCl3)δH(ppm):134.4(C-1,4),129.6(C-2,3,5,6),67.9(C-1′,1″),39.1(C-2′,2″),30.7(C-3′,3″),29.1(C-4′,4″),23.1(C-5′,5″),14.2(C-6′,6″),24.1(C-7′,7″),11.2(C-8′,8″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]對(duì)照確定該化合物為對(duì)苯二甲酸二(2-乙基)己酯。

化合物2：無(wú)色針狀結(jié)晶；FAB-MS(positive mode)m/z:449[M+Na]+,426[M]+。1H-NMR(300 MHz,CDCl3)δH(ppm):3.73(1H,br s,H-3),1.00(3H,s,CH3-23),0.99(3H,s,CH3-24),0.96(3H,s,CH3-25),1.19(3H,s,CH3-26),1.25(3H,s,CH3-27),0.86(3H,s,CH3-28),0.92(6H,s,CH3-29,30)。13C-NMR(75 MHz,CDCl3)δH(ppm):11.9(C-1),36.2(C-2),72.9(C-3)，49.3(C-4),38.0(C-5),41.9(C-6),17.7(C-7),53.4(C-8),37.3(C-9),61.5(C-10),35.5(C-11),30.8(C-12),38.5(C-13),39.8(C-14),32.5(C-15),35.7(C-16),30.2(C-17),43.0(C-18),35.3(C-19),28.3(C-20),33.0(C-21),39.4(C-22)，11.8(C-23),16.5(C-24),18.4(C-25),20.3(C-26),18.8(C-27),32.2(C-28),35.2(C-29),31.9(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]對(duì)照確定該化合物為3-羥基齊墩果烷。

化合物3：白色粉末；EI-MS(positive mode)m/z:138[M]+。1H-NMR(300 MHz,CD3OD)δH(ppm):7.02(2H,d,J=8.4 Hz,H-2,6),6.69(2H,d,J=8.4 Hz,H-3,5),2.71(2H,t,J=7.2 Hz,H-7),3.67(2H,t,J=7.2 Hz,H-8)。13C-NMR(75 MHz,CD3OD)δH(ppm):129.6(C-1),129.5(C-2,6),114.7(C-3,5),155.4(C-4),38.0(C-7),63.2(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]對(duì)照確定該化合物為酪醇。

化合物4：無(wú)色液狀物；EI-MS(positive mode)m/z:138[M]+。1H-NMR(300 MHz,CDCl3)δH(ppm):7.30(2H,dd,J=6.9,1.5 Hz,H-2,6),6.93(2H,dd,J=5.8,4.9 Hz,H-3,5),6.98(1H,d,J=7.3 Hz,H-4),3.99-3.92(2H,m,H-7),4.12-4.04(2H,m,H-8)。13C-NMR(75 MHz,CDCl3)δH(ppm):158.7(C-1),114.7(C-2,6),129.7(C-3,5),121.2(C-4),61.6(C-7),69.2(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]對(duì)照確定該化合物為苯氧乙醇。

化合物5：白色粉末；EI-MS(positive mode)m/z:576[M]+。1H-NMR(300 MHz,C5D5N)δH(ppm):5.37(1H,br s,H-6),0.70(3H,s,CH3-18),0.98(3H,s,CH3-19),1.00(3H,d,J=6.3 Hz,CH3-21),0.91(3H,d,J=3.2 Hz,CH3-26),0.89(3H,d,J=2.5 Hz,CH3-27),0.88(3H,d,J=6.9 Hz,CH3-29),5.07(1H,d,J=7.6 Hz,H-1′)。13C-NMR(75 MHz,C5D5N)δH(ppm):36.8(C-1),32.6(C-2),75.8(C-3),40.7(C-4),141.3(C-5),122.3(C-6),30.7(C-7),32.5(C-8),50.8(C-9),37.9(C-10),21.7(C-11),29.0(C-12),42.9(C-13),56.7(C-14),24.9(C-15),39.8(C-16),57.3(C-17),12.4(C-18),19.6(C-19),37.4(C-20),19.4(C-21),34.6(C-22),26.8(C-23),46.5(C-24),29.9(C-25),19.8(C-26),20.4(C-27),23.8(C-28),12.6(C-29),103.0(C-1′),78.5(C-2′),78.9(C-3′),72.1(C-4′),79.0(C-5′),63.3(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]對(duì)照確定該化合物為β-胡蘿卜苷。

化合物6：無(wú)色粉末；EI-MS(positive mode)m/z:347[M]+。1H-NMR(300 MHz,CD3OD)δH(ppm):7.06(2H,s,H-2,6),3.85(3H,s,H-2″),4.69(1H,d,J=7.6 Hz,H-1′)。13C-NMR(75 MHz,CD3OD)δH(ppm):128.4(C-1),110.1(C-2,6),151.6(C-3,5),138.5(C-4),107.3(C-1′),75.1(C-2′),78.5(C-3′),70.6(C-4′),77.6(C-5′),61.9(C-6′),168.2(C-1″),52.6(C-2″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]對(duì)照確定該化合物為沒(méi)食子甲酯4-O-β-吡喃葡萄糖苷。

化合物7：白色結(jié)晶性粉末；EI-MS(positive mode)m/z:300[M]+。1H-NMR(300 MHz,CD3OD)δH(ppm):7.07(2H,d,J=8.5 Hz,H-2,6),6.70(2H,d,J=8.5 Hz,H-3,5),2.84(2H,m,H-7),3.68(2H,m,H-8),4.29(1H,d,J=7.8 Hz,H-1′)。13C-NMR(75 MHz,CD3OD)δH(ppm):130.7(C-1),130.9(C-2,6),116.1(C-3,5),156.8(C-4),36.4(C-7),71.6(C-8),104.4(C-1′),75.1(C-2′),77.9(C-3′),72.1(C-4′),78.1(C-5′),62.7(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]對(duì)照確定該化合物為紅景天苷。

化合物8：白色粉末；EI-MS(positive mode)m/z:290[M]+。1H-NMR(300 MHz,CD3OD)δH(ppm):4.57(1H,d,J=7.5 Hz,H-2),4.05-3.92(1H,m,H-3),2.86(1H,dd,J=16.1,5.4 Hz,H-4a),2.51(1H,dd,J=16.1,8.1 Hz,H-4b),5.86(1H,d,J=2.3 Hz,H-6),5.94(1H,d,J=2.3 Hz,H-8),6.85(1H,d,J=1.8 Hz,H-2′),6.77(1H,d,J=8.1 Hz,H-5′),6.72(1H,dd,J=8.1,1.8 Hz,H-6′)。13C-NMR(75 MHz,CD3OD)δH(ppm):82.9(C-2),68.8(C-3),28.5(C-4),157.6(C-5),96.3(C-6),157.8(C-7),95.5(C-8),156.9(C-9),100.8(C-10),132.2(C-1′),115.3(C-2′),146.2(C-3′),146.2(C-4′),116.1(C-5′),120.0(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]對(duì)照確定該化合物為(+)-兒茶素。

化合物9：白色粉末；EI-MS(positive mode)m/z:184[M]+。1H-NMR(300 MHz,CD3OD)δH(ppm):7.02(2H,s,H-2,6),3.79(3H,s,H-OCH3)。13C-NMR(75 MHz,CD3OD)δH(ppm):121.4(C-1),110.0(C-2,6),146.5(C-3,5),139.8(C-4),52.3(C-OCH3),169.0(C-COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]對(duì)照確定該化合物為3,5-二羥基-4-甲氧基苯甲酸。

化合物10：無(wú)色針狀結(jié)晶；EI-MS(positive mode)m/z:170[M]+。1H-NMR(300 MHz,CD3OD)δH(ppm):7.07(2H,s,H-2,6)。13C-NMR(75 MHz,CD3OD)δH(ppm):122.3(C-1),110.3(C-2,6),146.3(C-3,5),139.4(C-4),170.7(C-COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]對(duì)照確定該化合物為沒(méi)食子酸。

化合物11：黃色粉末；EI-MS(positive mode)m/z:434[M]+。1H-NMR(300 MHz,CD3OD)δH(ppm):6.16(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),6.35(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),7.72(1H,d,J=2.1 Hz,H-2′),6.84(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),7.55(1H,dd,J=8.5,2.1 Hz,H-6′),5.12(1H,d,J=6.6 Hz,H-1″)。13C-NMR(75 MHz,CD3OD)δH(ppm):58.5(C-2),135.6(C-3),179.4(C-4),163.0(C-5),100.2(C-6),167.0(C-7),94.9(C-8),158.6(C-9),105.4(C-10),122.9(C-1′),116.2(C-2′),146.0(C-3′),150.0(C-4′),117.4(C-5′),123.0(C-6′),104.4(C-1″),72.9(C-2″),74.2(C-3″),69.1(C-4″),67.0(C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]對(duì)照確定該化合物為槲皮素3-O-β-D-吡喃木糖苷。

化合物12：白色粉末；EI-MS(positive mode)m/z:324[M]+。1H-NMR(300 MHz,CD3OD)δH(ppm):4.52(1H,d,J=7.1 Hz,H-2),3.96(1H,td,J=7.5,5.5 Hz,H-3),2.81(1H,dd,J=16.1,5.3 Hz,H-4a),2.50(1H,dd,J=16.1,7.8 Hz,H-4b),5.86(1H,d,J=2.3 Hz,H-6),5.92(1H,d,J=2.3 Hz,H-8),6.40(2H,s,H-2′,6′)。13C-NMR(75 MHz,CD3OD)δH(ppm):82.9(C-2),68.8(C-3),28.11(C-4),157.6(C-5),96.3(C-6),157.9(C-7),95.5(C-8),156.9(C-9),100.7(C-10),131.6(C-1′),107.2(C-2′,6′),146.9(C-3′,5′),134.0(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]對(duì)照確定該化合物為沒(méi)食子兒茶素。

化合物13：白色粉末；EI-MS(positive mode)m/z:452[M]+。1H-NMR(300 MHz,CD3OD)δH(ppm):6.56(2H,d,J=8.4 Hz,H-2,6),6.88(2H,d,J=8.4 Hz,H-3,5),7.01(2H,s,H-2′,6′),4.23(1H,d,J=7.8 Hz,H-1″),4.39(2H,m,H-6″)。13C-NMR(75 MHz,CD3OD)δH(ppm):156.6(C-1),116.1(C-2,6),130.9(C-3,5),130.6(C-4),36.4(C-7),71.7(C-8),121.4(C-1′),110.2(C-2′,6′),146.5(C-3′,5′),139.8(C-4′),168.3(C-7′),104.4(C-1″),75.0(C-2″),77.9(C-3″),72.2(C-4″),75.4(C-5″),64.7(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]對(duì)照確定該化合物為6″-O-沒(méi)食子酸紅景天苷。

化合物14：白色粉末；EI-MS(positive mode)m/z:442[M]+。1H-NMR(300 MHz,CD3OD)δH(ppm):5.03(1H,s,H-2),5.53(1H,br s,H-3),3.00(1H,dd,J=17.0,2.2 Hz,H-4a),2.82(1H,dd,J=17.0,4.4 Hz,H-4b),5.96(2H,s,H-6,8),6.93(1H,d,J=2.1 Hz,H-2′),6.72(1H,d,J=8.3 Hz,H-5′),6.81(1H,dd,J=8.3,2.1 Hz,H-6′),6.96(2H,d,J=4.2 Hz,H-2″,6″)。13C-NMR(75 MHz,CD3OD)δH(ppm):77.3(C-2),68.6(C-3),25.6(C-4),156.5(C-5),94.6(C-6),156.0(C-7),95.2(C-8),156.6(C-9),98.1(C-10),130.1(C-1′),113.8(C-2′),144.7(C-3′),144.6(C-4′),114.7(C-5′),118.1(C-6′),120.1(C-1″),108.9(C-2″,6″),145.0(C-3″,5″),138.5(C-4″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]對(duì)照確定該化合物為表兒茶素3-O-沒(méi)食子酸酯。

化合物15：白色粉末；EI-MS(positive mode)m/z:444[M]+。1H-NMR(300 MHz,CD3OD)δH(ppm):5.96(1H,d,J=8.4 Hz,H-1),7.13(2H,s,H-2′,6′),7.08(2H,s,H-2″,6″),7.04(2H,s,H-2′″,6″′)。13C-NMR(75 MHz,CD3OD)δH(ppm):94.1(C-1),74.2(C-2),76.5(C-3),71.3(C-4),75.9(C-5),64.2(C-6),121.2(C-1′),110.5(C-2′,6′),146.4(C-3′,5′),140.5(C-4′),168.2(C-7′),121.0(C-1″),110.3(C-2″,6″),146.4(C-3″,5″),140.0(C-4″),167.6(C-7″),1119.9(C-1′″),110.2(C-2″′,6′″),46.3(C-3″′,5′″),139.9(C-4′″),166.5(C-7′″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]對(duì)照確定該化合物為1,3,6-三-O-沒(méi)食子酰-β-D-葡萄糖苷。

2.2 抗氧化活性測(cè)試結(jié)果

青楷槭各粗提物及單體化合物對(duì)DPPH自由基清除率如下：

醇提物、CH2Cl2、EtOAc、H2O層和VC的IC50值分別為11.64、39.45、8.46、53.32和(7.21±0.25)mg/L。

化合物8～15和VC的IC50值分別為23.40、15.87、14.84、32.52、34.84、31.25、14.14、9.92和(37.21±1.39)μmol/L。

3 討 論

從青楷槭中分離得到15個(gè)化合物，鑒定為：對(duì)苯二甲酸二(2-乙基)己酯(1)、3-羥基齊墩果烷(2)、酪醇(3)、苯氧乙醇(4)、β-胡蘿卜苷(5)、沒(méi)食子酸甲酯-4-O-β-吡喃葡萄糖苷(6)及紅景天苷(7)、(+)-兒茶素(8)、3,5-二羥基-4-甲氧基苯甲酸(9)、沒(méi)食子酸(10)、槲皮素3-O-β-D-吡喃木糖苷(11)、沒(méi)食子兒茶素(12)、6″-O-沒(méi)食子酸紅景天苷(13)、表兒茶素3-O-沒(méi)食子酸酯(14)及1,3,6-三-O-沒(méi)食子酰-β-D-葡萄糖苷(15)，其中1,2,4和15首次從青楷槭植物中分離得到。

利用DPPH法對(duì)青楷槭的粗提物和化合物進(jìn)行體外抗氧化活性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示醇粗提物及乙酸乙酯層具有良好的抗氧化活性，乙酸乙酯層中分離得到的化合物8～15均顯示出較強(qiáng)的抗氧化活性。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)青楷槭化學(xué)成分及抗氧化活性的研究，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)青楷槭提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。