桑胡護(hù)肝顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

付 強(qiáng)，雷鈞濤，王 巖，姜英子*，孔 力* (.延邊大學(xué)藥學(xué)院，延吉 吉林 00；.吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，吉林 吉林 0；.吉林市中醫(yī)院，吉林 吉林 0)

近年來(lái)，隨著人們生活水平逐漸提高，傳統(tǒng)的飲食習(xí)慣亦發(fā)生了變化。長(zhǎng)期不良的生活習(xí)慣會(huì)導(dǎo)致肝臟等器官發(fā)生損傷，損害人們的健康。柴胡護(hù)肝顆?？梢詫?duì)肝臟等器官進(jìn)行預(yù)防性保護(hù)，降低發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[1]。柴胡護(hù)肝顆粒組成包括桑黃、柴胡、葛根、五味子、茵陳、綠豆粉，含有多種有效成分。為保證產(chǎn)品安全穩(wěn)定有效，對(duì)柴胡護(hù)肝顆粒進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，主要為含量測(cè)定、定性鑒別及藥典項(xiàng)下檢查[2]。對(duì)柴胡、葛根、五味子、茵陳進(jìn)行薄層色譜鑒別，以總黃酮及總多糖含量為評(píng)測(cè)指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定，初步建立本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為產(chǎn)品質(zhì)量提供有力保障[3-6]。

1 儀器與試劑

電子天平(FA2004，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)；超聲波清洗器(KQ5200E，昆山市超聲儀器有限公司)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(DH-101，天津市中環(huán)實(shí)驗(yàn)電爐有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(DK-98-11A，天津市泰斯特儀器有限公司)。

桑胡護(hù)肝顆粒：吉林醫(yī)藥學(xué)院自制，批號(hào)：20081201、20081202、20081203，主要由桑黃、柴胡、葛根、五味子、茵陳、綠豆粉等成分組成，所用藥材均經(jīng)吉林醫(yī)藥學(xué)院雷均濤教授按藥典要求鑒定為正品。所用藥材除桑黃外均購(gòu)買(mǎi)于河北安國(guó)飲片有限公司。柴胡皂苷a對(duì)照品(批號(hào)：110777-201912)、柴胡皂苷d對(duì)照品(批號(hào)：110778-200506)、五味子甲素對(duì)照品(批號(hào)：110764-200107)、葛根素對(duì)照品(批號(hào)：110752-201816)、綠原酸對(duì)照品(批號(hào)：110753-201716)均購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所；硅膠G薄層層析板(青島海洋化工有限公司)。其余試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 柴 胡

制備供試品溶液：取三批樣品(20081201、20081202、20081203)各2.0 g，研細(xì)，加CH3OH溶液40.0 mL，超聲10 min，過(guò)濾后濾液濃縮至2.5 mL備用，即為供試品溶液。

制備對(duì)照品溶液：取2.5 mg柴胡皂苷a加入5.0 mL容量瓶中，使用溶劑定容至刻度線處，制備為0.5 g/L的溶液即為柴胡皂苷a溶液；取5.0 mg柴胡皂苷d加入10 mL容量瓶中，使用CH3OH定容至刻度線，制備為0.5 g/L的溶液即為柴胡皂苷d溶液。

陰性溶液制備：取2.0 g按處方制備的樣品(去除柴胡)，按2.1.1項(xiàng)下方法進(jìn)行陰性溶液制備，備用。

制備對(duì)照藥材溶液：取柴胡飲片1.0 g，同上述方法進(jìn)行操作，即為對(duì)照藥材溶液。

柴胡的薄層鑒別：嚴(yán)格按照《中國(guó)藥典》2020年第四版制劑通則0502部分操作。使用移液槍吸取上述制備液各5.0 μL分別點(diǎn)于自制GF254薄層板，展開(kāi)劑種類及比例為：C4H8O2∶C2H6O∶H2O=4∶1∶0.5，展開(kāi)后取出陰涼處晾干，按PDAB顯色方法進(jìn)行顯色(其中PDAB濃度為2.0%，硫酸的濃度為40%)，加熱至60 ℃直到顏色清晰且有明顯斑點(diǎn)為止，可以在日下對(duì)其進(jìn)行觀察。柴胡薄層色譜圖見(jiàn)圖1。從圖1可以看出，所制備的供試產(chǎn)品和對(duì)照藥材位置相同，且斑點(diǎn)清晰。在相同條件下，陰性溶液中的該位置沒(méi)有斑點(diǎn)出現(xiàn)。

1～3.供試品，4.柴胡皂苷a，5.柴胡皂苷d，6.陰性溶液，7.對(duì)照藥材

2.1.2 五味子

制備供試品溶液：取三批樣品(20081201、20081202、20081203)各1.0 g，研細(xì)，使用CHCl3加熱回流0.5 h，CHCl3使用量為20.0 mL，殘?jiān)褂?.0 mL CHCl3進(jìn)行溶解后即為供試品溶液。

制備對(duì)照品溶液：取1.0 mg五味子甲素加入1.0 mL容量瓶中，使用溶劑定容至刻度線處，制備為1.0 g/L的溶液即為對(duì)照品溶液。

陰性溶液制備：取1.0 g按處方制備的樣品(去除五味子)，按上述方法制備陰性溶液后備用。

制備對(duì)照藥材溶液：取五味子飲片1.0 g，同上述方法進(jìn)行操作，即為對(duì)照藥材溶液。

五味子的薄層鑒別：嚴(yán)格按照《中國(guó)藥典》2020年第四版制劑通則0502部分操作，用移液槍吸取上述制備液各2.0 μL分別點(diǎn)于自制GF254薄層板，展開(kāi)劑種類及比例為C7H7BrMg(30～60 ℃)∶C3H6O2∶CHO=15∶5∶1，展開(kāi)后取出陰涼處晾干至顯色清晰，有明顯斑點(diǎn)即可，將供試品置于254 nm紫外線下。五味子薄層色譜圖見(jiàn)圖2。從圖2可以看出，所制備的測(cè)試產(chǎn)品和對(duì)照藥材在同一位置，有明顯斑點(diǎn)，陰性溶液在相同條件下，此位置無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)。

2.1.3 葛 根

制備供試品溶液：取三批樣品(20081201、20081202、20081203)各1.6 g，研細(xì)，加CH3OH 20.0 mL后放置室溫下120 min，溶液蒸干后的殘?jiān)褂肅H3OH進(jìn)行溶解，用量為1.0 mL，即為供試品溶液。

制備對(duì)照品溶液：取2.0 mg葛根素加入2.0 mL容量瓶中，使用溶劑定容至刻度線處，制備為1.0 g/L的溶液即為對(duì)照品溶液。

陰性溶液制備：除去葛根后，按處方制備的樣品1.6 g，按上述方法制備陰性溶液，備用。

制備對(duì)照藥材溶液：取葛根飲片1.6 g，同上述方法進(jìn)行操作，即為對(duì)照藥材溶液。

葛根的薄層鑒別：嚴(yán)格按照《中國(guó)藥典》2020年第四版制劑通則0502部分操作，使用移液槍吸取上述制備液各10.0 μL分別點(diǎn)于自制GF254薄層板，展開(kāi)劑種類及比例為CHCl3∶CH3OH∶H2O=14∶5.0∶0.5，展開(kāi)后取出陰涼處晾干后使用氨氣熏蒸至顯色清晰，有明顯斑點(diǎn)即可，將供試品置于254和365 nm紫外線下。葛根薄層色譜圖見(jiàn)圖3。從圖3可以看出，所制備的樣品和對(duì)照藥材在同一位置，斑點(diǎn)清晰，陰性溶液在相同條件下，此位置無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)。

紫外燈254 nm 紫外燈365 nm

2.1.4 茵 陳

制備供試品溶液：取三批樣品(20081201、20081202、20081203)各1.0 g，研細(xì)，加試液(CH3OH∶H2O=1∶1)20.0 mL后進(jìn)行超聲0.5 h，使用離心機(jī)離心，上清液即為供試品溶液。

制備對(duì)照品溶液：取1.0 mg綠原酸加入10.0 mL容量瓶中，使用溶劑定容至刻度線，濃度：0.1 g/L，即為對(duì)照品溶液。

陰性溶液制備：除去茵陳后，按處方制備的樣品1.0 g，按上述方法制備陰性溶液，備用。

制備對(duì)照藥材溶液：取茵陳飲片1.0 g，同上述方法進(jìn)行操作，即為對(duì)照藥材溶液。

茵陳的薄層鑒別：嚴(yán)格按照《中國(guó)藥典》2020年第四版制劑通則0502部分操作，使用移液槍吸取上述制備液各2.0 μL分別點(diǎn)于自制GF254薄層板，展開(kāi)劑種類及比例為CH3COO(CH2)3CH3∶CHO∶H2O=14∶5.0∶0.5，展開(kāi)后取出陰涼處晾干至顯色清晰，有明顯斑點(diǎn)即可，將供試品置于254和365 nm紫外線下。茵陳薄層色譜圖見(jiàn)圖4。從圖4可以看出，所制備的樣品和對(duì)照藥材在同一位置，斑點(diǎn)清晰，陰性溶液在相同條件下，此位置無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)。

紫外燈254 nm 紫外燈365 nm

2.2 水分檢查

根據(jù)2020年版中國(guó)藥典的要求，采用烘干法進(jìn)行測(cè)定。三批樣品顆粒水分含量分別為：1.92%、2.03%、1.88%，平均為1.94%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于規(guī)定值8.0%，符合規(guī)定。

2.3 溶化性檢查

根據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版第四部要求，操作如下：取三批供試品各10.0 g，加70～80 ℃熱水200 mL，立即觀察現(xiàn)象。攪拌5 min后顆粒全部溶解，有個(gè)別輔料導(dǎo)致輕微渾濁，但均滿足藥典要求。

2.4 粒度檢查

按藥典粒度檢查要求，取三批自制柴胡護(hù)肝顆粒樣品(20081201、20081202、20081203)每份取10.0 g，稱量1號(hào)篩篩上物及5號(hào)篩篩下物的重量，計(jì)算總占比。三批自制樣品中未過(guò)1號(hào)篩及5號(hào)篩篩下物重量和的總占比平均值為13.60%，未超過(guò)藥典要求的15%，符合《中國(guó)藥典》2020年版的規(guī)定要求。

2.5 性狀鑒別

通過(guò)觀察自制樣品柴胡護(hù)肝顆粒，按照氣味、顏色、形狀等進(jìn)行性狀鑒別。性狀鑒別見(jiàn)圖5。由圖5可知，本品為棕褐色顆粒。品嘗后口感微甜，無(wú)不良?xì)馕?，滿足藥典要求。

圖 5 桑胡護(hù)肝顆粒成品

2.6 裝量差異

每批樣品取10袋，稱量每袋重量并與標(biāo)記量進(jìn)行比較。三批樣品裝量差異均小于2.0%，《中國(guó)藥典》關(guān)于裝量差異的限度為5.0%，完全滿足顆粒劑的裝量差異測(cè)定要求。

3 討 論

薄層色譜法是中藥定性鑒定的主要手段之一，常用于復(fù)方中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，在中藥分析中占據(jù)重要位置[7]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)薄層色譜法對(duì)桑胡護(hù)肝顆粒中所含的在6種中藥中鑒定出柴胡、五味子、銀杏和葛根這4種中藥。結(jié)果表明，4種中藥斑點(diǎn)清晰，分離效果好。陰性樣品無(wú)干擾，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)葛根樣品按藥典項(xiàng)下進(jìn)行鑒定時(shí)在防紫外燈下無(wú)任何斑點(diǎn)出現(xiàn)，后將薄層板放置氨水中熏蒸后出現(xiàn)斑點(diǎn)，放置紫外燈下進(jìn)行觀察[8]。

本試驗(yàn)還計(jì)劃對(duì)君藥桑黃進(jìn)行定性鑒別，對(duì)照品按文獻(xiàn)規(guī)定采用亮氨酸，后發(fā)現(xiàn)陰性樣品有明顯干擾，查閱文獻(xiàn)可知，綠豆粉中含有亮氨酸，無(wú)法對(duì)其鑒別，暫無(wú)最佳方案對(duì)其鑒定。今后對(duì)上述四味藥材進(jìn)行更深一步的研究，進(jìn)一步完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為日后研究桑胡護(hù)肝顆粒提供理論支撐，并為未來(lái)推廣提供強(qiáng)有力的理論依據(jù)。

綜上所述，建立的桑胡護(hù)肝顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性強(qiáng)，可用于該質(zhì)量控制。