6種常用水產(chǎn)藥物對(duì)北方須鰍幼魚的急性毒性試驗(yàn)

李文康，駱小年，葉仕根，段友健

(大連海洋大學(xué) 水產(chǎn)與生命學(xué)院，遼寧 大連 116023)

北方須鰍Barbatulabarbatulanuda隸屬于鯉形目Cypriniformes、鰍科Cobitida、條鰍亞科Nemachilinae、須鰍屬Barbatula，屬亞冷水性魚類，環(huán)境適應(yīng)能力較強(qiáng)，主要生活在山區(qū)沙石底的河流和山溪中，在中國灤河、海河上游、新疆北部額爾齊斯河、烏倫古河、東北鴨綠江、黑龍江、烏蘇里江、松花江、嫩江及一些附屬水域均有分布[1-3]。因其肉質(zhì)細(xì)膩，味道鮮美，深受消費(fèi)者歡迎。近年來，為了補(bǔ)充其自然資源，滿足市場(chǎng)需求，項(xiàng)目組進(jìn)行了北方須鰍規(guī)?；斯し敝?，并獲得初步成功。有關(guān)北方須鰍性腺發(fā)育[4]、飼料蛋白需求量[5]、耗氧節(jié)律[6]、室內(nèi)養(yǎng)殖[7]的研究已有報(bào)道，但對(duì)其安全用藥尚未有研究。因此，本試驗(yàn)選擇了聚維酮碘、阿維菌素等6種水產(chǎn)常用消毒或殺蟲類藥物對(duì)北方須鰍進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，以期為北方須鰍人工養(yǎng)殖提供基礎(chǔ)用藥參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)魚

試驗(yàn)魚來自遼寧省本溪市桓仁滿族自治縣木盂子鎮(zhèn)一漁場(chǎng)自繁的北方須鰍幼魚，健康且規(guī)格整齊，體長(5.5±0.4) cm，體質(zhì)量(1.20±0.05) g。試驗(yàn)前，將幼魚在試驗(yàn)環(huán)境下飼養(yǎng)7d，以適應(yīng)室內(nèi)環(huán)境，試驗(yàn)前48h停止投喂。

1.2 試驗(yàn)藥物

試驗(yàn)藥物來源及主要成分見表1，用蒸餾水將6種藥物先配置母液，現(xiàn)配現(xiàn)用，再根據(jù)所需質(zhì)量濃度稀釋。

表1 試驗(yàn)藥物

1.3 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)容器為食品級(jí)塑料箱，規(guī)格為53cm×36cm×28cm，水深15cm，每箱放試驗(yàn)魚10尾，試驗(yàn)用水為充分曝氣的自來水，水溫(17±2) ℃，pH7.0，每個(gè)試驗(yàn)容器溶氧保持在6mg/L以上。

1.4 試驗(yàn)方法

參考周永欣等魚類半靜水式毒性試驗(yàn)方法[8]。先進(jìn)行預(yù)備試驗(yàn)，確定北方須鰍幼魚96h無死亡的最高質(zhì)量濃度和24h 全部死亡的最低質(zhì)量濃度，得到試驗(yàn)所需的藥物濃度范圍，據(jù)此范圍通過等對(duì)數(shù)間距法設(shè)置5個(gè)濃度梯度，各種藥物試驗(yàn)質(zhì)量濃度詳見表2。每個(gè)梯度設(shè)3個(gè)平行組和1個(gè)空白對(duì)照組，每箱放魚10尾。試驗(yàn)開始后連續(xù)8h觀察，記錄24、48、72、96h幼魚的存活情況。試驗(yàn)期間不投飼，24h更換一次藥液，及時(shí)撈出死魚。當(dāng)試驗(yàn)魚停止呼吸，而且用玻璃棒輕輕刺激尾柄部位，5min內(nèi)仍無反應(yīng)時(shí)就可判定為死亡。

表2 6種藥物試驗(yàn)質(zhì)量濃度

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用改良的寇式法校正公式求出24、48、72、96h的半致死質(zhì)量濃度LC50，公式如下[9-10]：

logLC50=Xm-i[ ∑p-(3-pm-pn)/4]；

SX50=i[ ∑(pq/n) ]1/2；

LC50的95%置信區(qū)間=log-1(logLC50±1.96×SX50)；

安全質(zhì)量濃度SC：SC=LC50，24 h×0.3/(LC50，24 h/LC50，48 h)2。

式中：Xm為最大劑量的對(duì)數(shù)；i為組距，即相鄰組質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)差；∑p為各組死亡率總和；p為各劑量組的死亡率；pm為最大劑量組的死亡率;pn為最小劑量組的死亡率；SX50為logLC50的標(biāo)準(zhǔn)誤差；q為存活率，即1-p。

2 結(jié)果

對(duì)照組北方須鰍幼魚在96h內(nèi)無死亡，隨著每種藥物的質(zhì)量濃度增加和處理時(shí)間的延長，其對(duì)北方須鰍幼魚的毒害作用增強(qiáng)，幼魚死亡率逐漸升高(表3)。聚維酮碘、阿維菌素、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑(m(CuSO4·5H2O)∶m(FeSO4·7H2O)=5∶2)(以下簡(jiǎn)稱銅鐵合劑)、高錳酸鉀、福爾馬林、敵百蟲的LC50，96 h依次為34.87、0.020、0.31、1.92、22.34、2.63mg/L(表4)。參考《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)則》中農(nóng)藥對(duì)魚類毒性的分類標(biāo)準(zhǔn)[9]，其中LC50，96 h<0.1mg/L為劇毒，0.1～1.0mg/L為極高毒，1.0～10.0mg/L為中毒，LC50，96 h>10.0mg/L為低毒。按其毒性，阿維菌素>銅鐵合劑>高錳酸鉀>敵百蟲>福爾馬林>聚維酮碘,阿維菌素為劇毒藥物，銅鐵合劑為極高毒藥物，高錳酸鉀、敵百蟲為中毒藥物，聚維酮碘、福爾馬林為低毒藥物。

表3 北方須鰍幼魚在試驗(yàn)期間不同時(shí)間的死亡率

表4 6種常用藥物的LC50、置信區(qū)間及其安全質(zhì)量濃度

關(guān)于藥物的性質(zhì)用途，本文將其放在討論部分進(jìn)行討論。這里僅說明實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

聚維酮碘：試驗(yàn)初期，46.50、54.00mg/L試驗(yàn)組中幼魚呼吸急促，上下竄游，30min后開始出現(xiàn)大批死亡，1h死亡率分別為60%、100%，死亡后口張開，側(cè)躺在底部。

阿維菌素：2h后0.040mg/L試驗(yàn)組幼魚的活力減弱，對(duì)箱壁敲打聲反應(yīng)遲鈍，7h后，0.025、0.032、0.040mg/L試驗(yàn)組大部分幼魚出現(xiàn)痙攣或游動(dòng)緩慢，少部分側(cè)躺在塑料箱底部，0.040mg/L質(zhì)量濃度組伴隨少量死亡，10h后，存活魚大部分在塑料箱底部呈痙攣式游動(dòng)，對(duì)箱壁敲打聲反應(yīng)遲鈍，均伴有不同程度的死亡，0.040mg/L質(zhì)量濃度出現(xiàn)大量死亡。

銅鐵合劑：4h后1.00、1.80mg/L試驗(yàn)組中的幼魚對(duì)箱壁敲打聲反應(yīng)遲鈍，10h后較對(duì)照組游動(dòng)明顯遲緩。死亡幼魚體表存在大量絮狀物，黏液分泌增多。

高錳酸鉀：1h后，2.40、3.00、3.78mg/L試驗(yàn)組出現(xiàn)大批死亡，死亡幼魚口張開，全身粘液明顯增多，高質(zhì)量濃度組幼魚體表染成紅褐色，人工擦拭可清除，有些幼魚死后體表潰爛，內(nèi)臟翻出。3.78mg/L質(zhì)量濃度組塑料箱底部有褐色高錳酸鉀絮狀物，沾在皮膚上仍具強(qiáng)氧化性。

福爾馬林：試驗(yàn)開始時(shí)，各組幼魚均出現(xiàn)上下竄游，且分散，30.4mg/L試驗(yàn)組，7h出現(xiàn)大批死亡，存活幼魚活力明顯下降，部分死亡幼魚體表有砂紙感；22.20、24.60、27.40mg/L試驗(yàn)組，48h存活幼魚上下緩慢游動(dòng)或頭朝上尾朝下懸在水面。死亡幼魚鰭基部和鰓明顯出血，高質(zhì)量濃度組死亡幼魚體表存留粘液較低質(zhì)量濃度組少。

敵百蟲：試驗(yàn)開始時(shí)未見異常，3h后7.53、11.94、18.93mg/L質(zhì)量濃度組較對(duì)照組幼魚游動(dòng)明顯遲緩，并伴有少量死亡，18.93mg/L質(zhì)量濃度組12h后出現(xiàn)大批死亡，7.53mg/L質(zhì)量濃度組96h后全部死亡。死亡幼魚脊椎彎曲，體色發(fā)白，體表分泌大量粘液，并粘附絮狀物。

3 討論

3.1 北方須鰍幼魚對(duì)6種藥物的耐受力

6種常用藥物的分類、給藥方式及質(zhì)量濃度見表5。通過本試驗(yàn)和表5。相比較可知，銅鐵合劑的安全質(zhì)量濃度0.05mg/L遠(yuǎn)低于其常用質(zhì)量濃度0.7mg/L[13]，建議不宜作為北方須鰍幼魚階段的治療藥物；高錳酸鉀的安全質(zhì)量濃度為0.50mg/L，處于該藥的常用潑灑質(zhì)量濃度0.5～1.0mg/L范圍[14]，但有人指出高錳酸鉀常用潑灑質(zhì)量濃度范圍為1～3mg/L[16-17]，且安全質(zhì)量濃度與常用浸浴質(zhì)量濃度10～20mg/L[15]相差甚遠(yuǎn)，北方須鰍幼魚潑灑浸浴需謹(jǐn)慎使用；福爾馬林安全質(zhì)量濃度為6.24mg/L，是常用浸浴質(zhì)量濃度30～40mg/L[14]的0.16～0.21倍，應(yīng)合理把握浸浴質(zhì)量濃度、浸浴時(shí)間；敵百蟲安全質(zhì)量濃度0.82mg/L，高于常用質(zhì)量濃度0.3～0.7mg/L[14]，在生產(chǎn)中，項(xiàng)目組使用1mg/L敵百蟲對(duì)北方須鰍幼魚寄生蟲進(jìn)行防治有很好的效果，因此敵百蟲在該規(guī)格北方須鰍人工養(yǎng)殖中使用是安全的；聚維酮碘、阿維菌素安全質(zhì)量濃度為10.22mg/L和0.004mg/L，均大于常用質(zhì)量濃度0.2～0.5mg/L和1.44×10-3mg/L[11-12]，因此可在北方須鰍人工養(yǎng)殖魚病防控過程中安全使用。

表5 6種藥物安全質(zhì)量濃度與常用質(zhì)量濃度

3.2 北方須鰍與同科魚類耐受力的比較

毒性試驗(yàn)一般使用夏花或2寸左右的魚種，這樣的魚種對(duì)藥物的敏感性要比成年個(gè)體高[8]。北方須鰍與長薄鰍Leptobotiaelongata、泥鰍Misgurnusanguillicaudatus、大鱗副泥鰍Paramisgurnusdabryanus對(duì)6種常用水產(chǎn)藥物耐受力的比較如表6所示。北方須鰍對(duì)聚維酮碘的安全質(zhì)量濃度為10.22mg/L，略低于長薄鰍的10.67mg/L[18]，遠(yuǎn)低于泥鰍的90mg/L[9]及大鱗副泥鰍的101.23mg/L[11]；對(duì)阿維菌素安全質(zhì)量濃度為0.004mg/L，遠(yuǎn)低于長薄鰍的0.03mg/L[18]，略高于泥鰍的0.003mg/L[20]；銅鐵合劑中硫酸銅Cu2+可使蛋白質(zhì)變性，硫酸亞鐵為輔助用藥，有收斂作用，主要為硫酸銅殺滅寄生蟲掃除障礙[21]，在假設(shè)把單一硫酸銅藥物毒性試驗(yàn)安全質(zhì)量濃度換算成合劑質(zhì)量濃度基礎(chǔ)上，北方須鰍對(duì)銅鐵合劑的耐受力為0.05mg/L，與泥鰍水花0.05mg/L相同，小于泥鰍夏花0.13mg/L[12],略高于大鱗副泥鰍的0.042mg/L[11]，遠(yuǎn)高于長薄鰍的0.007mg/L[19]；對(duì)高錳酸鉀安全質(zhì)量濃度為0.50mg/L略高于長薄鰍的0.38mg/L[19]，略低于泥鰍的0.75mg/L[14]；對(duì)福爾馬林安全質(zhì)量濃度為6.24mg/L，低于大鱗副泥鰍的22.35mg/L[11]、泥鰍的25.30mg/L[14]；對(duì)敵百蟲安全質(zhì)量濃度為0.82mg/L，大于大鱗副泥鰍的0.54、0.40mg/L[11,24]，低于泥鰍的2.22mg/L[14],高于長薄鰍的0.17、0.35mg/L[18-19]。魚類在不同生長的階段及生長環(huán)境(溫度、pH等)都會(huì)影響其對(duì)藥物的耐受力[8,12,22]。

表6 北方須鰍與同科魚類耐受力的比較

因此，在北方須鰍人工養(yǎng)殖魚病防控過程中，要做到科學(xué)診斷，對(duì)癥下藥。選擇藥物時(shí)要注意其安全性和有效性。本次試驗(yàn)結(jié)果表明，聚維酮碘、阿維菌素、敵百蟲在北方須鰍疾病防治過程中可按常規(guī)質(zhì)量濃度安全使用。