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    當(dāng)歸芍藥散優(yōu)化方抗慢性盆腔炎的實(shí)驗(yàn)研究

    2021-03-08 03:25:36王小燕賈瑞琳任存霞
    關(guān)鍵詞:新方蒙藥金剛

    劉 敏 王小燕 賈瑞琳 任存霞

    內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院,內(nèi)蒙古呼和浩特 010059

    慢性盆腔炎(CPID)是女性上生殖道及其周圍結(jié)締組織的感染,包含子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、盆腔腹膜炎等,是一組炎癥性疾病。流行病學(xué)調(diào)查顯示,盆腔炎性疾病發(fā)生對(duì)象以20~35 歲年輕的育齡期女性為主,是影響現(xiàn)代女性生活質(zhì)量的一大棘手問(wèn)題。本病還與性文化、性教育、社會(huì)發(fā)展、婚姻道德觀等因素密切相關(guān)[1-2],若失治、誤治給個(gè)人、家庭以及社會(huì)帶來(lái)的影響是難以預(yù)估的。當(dāng)歸芍藥散方出自《金匱要略》,研究報(bào)道該方對(duì)女子經(jīng)、帶、胎、產(chǎn)在內(nèi)的諸多病癥均見療效[3-5],是中藥治療盆腔炎性疾病的經(jīng)典處方之一。本實(shí)驗(yàn)前期[6-8]結(jié)果提示,當(dāng)歸芍藥散可通過(guò)改善機(jī)體免疫來(lái)達(dá)到抗炎抗粘連作用;原方組成優(yōu)化取芍藥、川芎、澤瀉、茯苓、白術(shù)劑量比為10∶5∶5∶4∶4 時(shí)其抗CPID 效果較佳。赤瓟子善治血瘀胞宮、經(jīng)閉、胎衣不下等婦科病,對(duì)血脈病、瘡癰、筋骨疼痛等多病種有效[9-11],是蒙醫(yī)婦科疾病經(jīng)典用藥。赤瓟子還具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抑制腫瘤等多種藥理作用[12]。本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)方優(yōu)化藥味聯(lián)合經(jīng)典蒙藥的模式,探索新方對(duì)CPID大鼠的治療作用,以期為臨床抗CPID 藥物的研發(fā)提供思路。

    1 材料與方法

    1.1 主要儀器與試劑

    微量高速離心機(jī)(型號(hào):TG16W);酶標(biāo)儀:北京普朗新技術(shù)有限公司(型號(hào):DNM-9602);光學(xué)顯微鏡:日本尼康公司(型號(hào):Eclipse E200)。HE 染液試劑,北京博奧拓達(dá)科技有限公司(批號(hào):20170916)。ELISA試劑盒:北京博奧森生物技術(shù)有限公司[白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)貨號(hào):DRE20024;IL-10 貨號(hào):DRE20095;腫瘤壞死因子-α(TNF-α)貨號(hào):DRE20040]。金剛藤膠囊:湖北福人藥業(yè)公司產(chǎn),0.5 g/粒(批號(hào):20171016)?;旌霞?xì)菌溶液:內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)微生物室培育,將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌制成比例為2∶1∶1 濃度約為3×109個(gè)/mL 混懸液。

    1.2 方法

    1.2.1 動(dòng)物及分組 70 只SPF 清潔級(jí)SD 雌性大鼠,體重180~220 g,設(shè)置正常組,模型組,金剛藤膠囊組,蒙藥赤瓟子組,新方高、中、低劑量組,每組10 只,由內(nèi)蒙古大學(xué)動(dòng)物研究中心培育[許可證號(hào):SCXK(蒙)2001-0001]。

    1.2.2 CPID 模型復(fù)制 大鼠標(biāo)號(hào)、稱重,腹腔注射麻醉,取腹直線與恥骨聯(lián)合交點(diǎn)直上1 cm 處為切口,暴露出大鼠“Y”型子宮。配好的混合細(xì)菌分別注入兩側(cè)宮腔內(nèi),每側(cè)0.1 mL 量,同時(shí)用利器尖端劃傷子宮內(nèi)膜,完成操作后縫合腹腔。CPID 造模成功標(biāo)準(zhǔn):肉眼觀察宮腔與周圍結(jié)締組織粘連,可見宮腔積液;鏡下觀察子宮病理切片,內(nèi)膜缺損,可見脫落、壞死細(xì)胞,腺體萎縮、減少,間質(zhì)內(nèi)可見大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等。

    1.2.3 給藥 新方按3∶10∶5∶4∶4∶5 配比依次稱取赤瓟子10 g、芍藥30 g、川芎15 g、白術(shù)12 g、茯苓12 g、澤瀉15 g,臨床用量94 g/d,以成人體重(60 kg)為標(biāo)準(zhǔn),得出給藥量為1.57 g/kg,大鼠等效劑量換算約為成人6.3 倍[13],新方高、中、低劑量組分別以12.6、6.3、3.15 倍藥量換算,含生藥量分別為19.74、9.87、4.93 g/kg,按10 mL/kg 為給藥體積,得出高劑量組藥液為1.97 g/mL,按需配制其他劑量組。金剛藤膠組:臨床每天藥量為6 g,同法得出6.3 倍等效藥量即0.63 g/kg,大鼠灌胃給藥體積不變,得出金剛藤膠囊藥液為0.06 g/mL(即0.5 g 配液8 mL)。蒙藥赤瓟子組:常規(guī)量10 g/d,同法算出等效藥量為1.04 g/kg,配置藥液是0.10 g/mL。

    1.3 觀察指標(biāo)

    血清學(xué):大鼠腹主動(dòng)脈血3~5 mL,靜置30 min后離心(轉(zhuǎn)速3500 r/min),取上清液在室溫下酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)雙抗體夾心法測(cè)定血清IL-1β、IL-10、TNF-α。組織學(xué):雙側(cè)子宮標(biāo)本于15 mL 中性甲醛溶液固定。脫水硬化處理、石蠟包埋、切片(4~6 μm)、HE 染色。顯微鏡下觀察大鼠宮腔壁結(jié)構(gòu)、腺體排列、炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)情況,上述觀察指標(biāo)進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分,設(shè)置4 個(gè)病變程度為無(wú)(-)、輕(+)、中(++)、重(+++),依次計(jì)0、1、2、3 分[14]。見表1。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 22.0 軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,多組均數(shù)比較選方差分析,進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t 法或Dunnett T3法。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)表示。等級(jí)資料用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。以P <0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    表1 子宮結(jié)構(gòu)病變程度評(píng)價(jià)

    2 結(jié)果

    2.1 子宮組織病理學(xué)觀察

    光學(xué)顯微鏡下觀察,正常組子宮腔結(jié)構(gòu)完整,內(nèi)膜層組織形態(tài)正常,腺體排列有序,基底層致密、紋理清晰(圖1a);模型組子宮黏膜層變薄,內(nèi)膜變形缺損,可見有脫落、壞死細(xì)胞,腺體萎縮,子宮全層可見炎性浸潤(rùn)(圖1b);金剛藤膠囊組可見散在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1c);新方高劑量組見內(nèi)膜增生樣改變,基底層致密,腺體結(jié)構(gòu)完整,視野內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)少(圖1d);新方中劑量組可見腺體排列較完整,少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1e);新方低劑量與蒙藥赤瓟子組可見脫落、壞死細(xì)胞,腺體萎縮,黏膜層損壞,炎癥細(xì)胞大量浸潤(rùn)(圖1f、1g)。病理學(xué)評(píng)分顯示:與正常組比較,模型組子宮病理學(xué)積分顯著升高,差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.01)。金剛藤組、新方高、中劑量組病理積分較模型組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)。見表2。

    2.2 各組大鼠血清IL-1β、IL-10、TNF-α 比較

    圖1 各組子宮組織HE 染色(40×)

    表2 各組子宮病理學(xué)積分比較(例,n=10)

    與正常組比較,模型組IL-10 含量降低,IL-1β及TNF-α 含量升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05),提示CPID 造模成功。與模型組比較,新方高、中劑量組IL-10 含量升高,新方高中、中、低劑量組IL-1β 與TNF-α 含量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)。與金剛藤組比較,新方低劑量組IL-10 降低,IL-1β 升高,新方高、中劑量TNF-α 含量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)。與蒙藥赤瓟子組比較,新方高、中劑量IL-10 升高,IL-1β 降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)。見表3。

    表3 各組大鼠血清IL-1β、IL-10、TNF-α 比較(±s,n=10)

    表3 各組大鼠血清IL-1β、IL-10、TNF-α 比較(±s,n=10)

    注:與正常組比較,aP <0.05;與模型組比較,bP <0.05;與金剛藤組比較,cP <0.05;與蒙藥赤瓟子比較,dP <0.05。IL:白細(xì)胞介素;TNF-α:腫瘤壞死因子α

    3 討論

    CPID 屬中醫(yī)“帶下”“腹痛”病范疇,是由瘀與濕侵犯引起的“血水同病”,當(dāng)歸芍藥散藥物組成特點(diǎn)恰為“肝脾同調(diào),血水同治”,方隨證立,臨床報(bào)道證實(shí)該方治療CPID 取得顯著效果[15-17]。蒙醫(yī)學(xué)認(rèn)為赫依運(yùn)行紊亂,瘀血、黃水、黏熱或寒邪相互搏結(jié)可引發(fā)CPID,臨床上蒙藥聯(lián)合西藥能夠有效改善CPID 癥狀、降低經(jīng)濟(jì)成本、減少?gòu)?fù)發(fā)率[18-21]。近年來(lái),針對(duì)盆腔炎性疾病的防治是婦科領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)與難點(diǎn),單純采用西藥、中藥或蒙藥的治療模式已經(jīng)不能滿足臨床日益增長(zhǎng)的需求。因此,聯(lián)合用藥將會(huì)是防治CPID的更優(yōu)選擇[22-23]。

    CPID 的發(fā)生與炎癥因子的異常表達(dá)有關(guān),慢性病程階段的病理改變也是由異常的免疫應(yīng)答所致[24-25],本研究選取TNF-α、IL-1β 及IL-10 3 個(gè)相關(guān)細(xì)胞因子進(jìn)行研究。TNF-α 過(guò)度分泌會(huì)誘導(dǎo)其他炎癥介質(zhì)的異常表達(dá),促使炎癥持續(xù)反應(yīng)并引起組織受損。TNF-α 還可誘導(dǎo)細(xì)胞間黏附分子大量聚集,加速組織的增生與粘連。IL-1β 主要介導(dǎo)組織破壞與水腫,IL-1β高表達(dá)提示機(jī)體存在感染與損傷。IL-10 能發(fā)揮抑制炎癥作用,可抑制TNF-α、IL-1β 等促炎癥因子合成與釋放,緩解炎癥。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組血清IL-10含量減少,TNF-α、IL-1β 含量均升高,新方高、中劑量組與金剛藤組IL-1β 含量降低,IL-10 含量升高,提示以上用藥組可有效抑制促炎因子表達(dá)、升高抗炎因子表達(dá),對(duì)紊亂的炎癥因子具有一定調(diào)節(jié)作用,對(duì)CPID 起到積極治療作用。除金剛藤膠囊組外,各給藥組明顯降低TNF-α 含量,提示新方與蒙藥赤瓟子可改善CPID 局部組織粘連情況。新方對(duì)CPID 模型大鼠可發(fā)揮治療作用機(jī)制可能與上調(diào)IL-10 因子表達(dá),下調(diào)TNF-α、IL-1β 因子表達(dá)相關(guān)。

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