復(fù)方麝香注射液質(zhì)量控制研究進(jìn)展

丁艷譜，宋娜娜，李響明，張睿智，孫勝斌，姜國志

復(fù)方麝香注射液現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[3]中檢測(cè)項(xiàng)目包括性狀、鑒別(冰片、薄荷腦、石菖蒲、廣藿香的鑒別)、檢查(pH值、熾灼殘?jiān)?、總固體、熱原、其他)、麝香酮含量測(cè)定。該標(biāo)準(zhǔn)不僅缺少對(duì)制劑溶血、凝聚、異常毒性、過敏試驗(yàn)等安全性指標(biāo)的檢查，還缺少對(duì)制劑指紋圖譜或特征圖譜的全面質(zhì)量控制方法，且含量測(cè)定控制成分相對(duì)單一。此外，本品屬芳香水溶液，在蒸干后，采用105 ℃干燥3 h的方法測(cè)定總固體，該方法有待商榷。本文對(duì)比分析了復(fù)方麝香注射液近二十年來關(guān)于質(zhì)量控制研究的文獻(xiàn)，為提高產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 含量測(cè)定

復(fù)方麝香注射液生產(chǎn)時(shí)將麝香、廣藿香、郁金、石菖蒲水蒸氣蒸餾后收集蒸餾液，冰片、薄荷腦共研，加入輔料聚山梨酯80，用蒸餾液分次溶解后，加水定容，灌裝滅菌后即得。復(fù)方麝香注射液一種無色的澄明的芳香性無菌制劑，目前文獻(xiàn)中報(bào)道的含量測(cè)定方法絕大多數(shù)使用氣相色譜儀，也有氣相與質(zhì)譜技術(shù)聯(lián)用的，選定的指標(biāo)性成分包括薄荷腦、龍腦、異龍腦、百秋李醇、麝香酮及細(xì)辛醚等。

麝香主要含麝香酮等成分，石菖蒲、郁金、廣藿香主要含揮發(fā)油，冰片、薄荷腦也是揮發(fā)性成分，因此該產(chǎn)品的含量測(cè)定也主要圍繞揮發(fā)性成分展開。白新濤等[4]采用氣相—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析了復(fù)方麝香注射液中的揮發(fā)油類成分，使用毛細(xì)管柱程序升溫的方法定量測(cè)定了薄荷腦、龍腦、百秋李醇、麝香酮、細(xì)辛醚5種成分的含量，分析方法專屬性高，受干擾少。劉明穎等[5]建立了氣相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方麝香注射液中異龍腦、龍腦、L-薄荷腦、α-細(xì)辛腦、白秋李醇、麝香酮6種揮發(fā)性成分的方法，使用正己烷萃取法制備供試品，以水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)，程序升溫，方法精密度、重復(fù)性良好。彭敏等[6]選取麝香酮、β-細(xì)辛醚、百秋李醇、龍腦和薄荷腦作為指標(biāo)成分，建立了氣質(zhì)聯(lián)用同時(shí)測(cè)定上述5種成分的方法，分離效果較好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。徐國兵[7]建立了以正十八烷為內(nèi)標(biāo)物，氫火焰離子化檢測(cè)器，程序升溫同時(shí)測(cè)定復(fù)方麝香注射液中薄荷腦等4種揮發(fā)性成分的方法。汪秀月[8]、徐國兵[9]分別建立了氣相色譜法測(cè)定薄荷腦和龍腦含量的方法。

復(fù)方麝香注射液中含石菖蒲，石菖蒲藥材的主要成分細(xì)辛醚既是有效成分又是毒性成分，因此對(duì)其的控制有重要意義。目前文獻(xiàn)報(bào)道的細(xì)辛醚含量測(cè)定方法有氣相色譜法[4-6]、液相色譜法[10-12]及其他方法[13]。湯佳佳等[14]建立了高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方麝香注射液中細(xì)辛醚含量的方法，以乙腈-0.05%磷酸溶液(40∶60)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長251 nm，供試品溶液制備方法簡單，測(cè)定方法專屬性高，色譜峰分離良好，并使用該方法測(cè)定了來自5家生產(chǎn)企業(yè)提供的12批復(fù)方麝香注射液，測(cè)得α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚含量分別在2.410～56.130 μg/ml、111.577～500.753 μg/ml，批間含量差異相對(duì)較大。

2 指紋圖譜

指紋圖譜技術(shù)可全面地反映所含的化學(xué)成分，圖譜的差別不僅能反映主要成分的差異，還能反映一些含量較低甚至微量成分的差異，是全面評(píng)價(jià)產(chǎn)品質(zhì)量的一種手段。復(fù)方麝香注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[3]無指紋圖譜的質(zhì)量控制方法。

程世云等[15]建立了氣相色譜法測(cè)定復(fù)方麝香注射液指紋圖譜的方法，使用彈性石英毛細(xì)管柱，程序升溫(起始溫度120 ℃保持2 min，3 ℃/min升溫至140 ℃，保持2 min，5 ℃/min升溫至230 ℃，保持32 min)，氫火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度260 ℃，以氮?dú)鉃檩d氣，流速0.8 ml/min，進(jìn)樣量1.0 μl，分流比80∶1，標(biāo)定了指紋圖譜中薄荷腦、龍腦、異龍腦、甲基丁香酚、異丁香酚甲醚、α-細(xì)辛醚、麝香酮、β-細(xì)辛醚、百秋李醇、α-細(xì)辛醚空間異構(gòu)體共10個(gè)共有峰，并應(yīng)用此方法測(cè)定了來自5個(gè)生產(chǎn)廠家的16批復(fù)方麝香注射液指紋圖譜，相似度在0.85以上，為復(fù)方麝香注射液的質(zhì)量控制提供了參考。

劉永利等[16]采用氣相色譜法建立了復(fù)方麝香注射液的特征圖譜，共有6個(gè)特征峰，應(yīng)用該方法測(cè)得來自3家企業(yè)的10批樣品相似度在0.90以上，結(jié)合混合對(duì)照藥材為參比的模式對(duì)其進(jìn)行了定性研究，同時(shí)還對(duì)薄荷腦、冰片、百秋李醇、麝香酮、α-細(xì)辛腦5種主要成分進(jìn)行了含量測(cè)定，發(fā)現(xiàn)不同廠家的產(chǎn)品各含量均有所差異，其中白秋李醇、α-細(xì)辛腦含量差距相對(duì)較大。

3 安全性檢查試驗(yàn)

復(fù)方麝香注射液現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[3]中關(guān)于安全性的控制相對(duì)較少。近年來隨著臨床的廣泛應(yīng)用，有關(guān)復(fù)方麝香注射液不良反應(yīng)的報(bào)道時(shí)有發(fā)生。不良反應(yīng)的臨床表現(xiàn)主要為胸悶、憋氣、口唇發(fā)紺、劇烈咳嗽及呼吸困難等過敏反應(yīng)，其次為高熱、寒戰(zhàn)，再次為皮疹，偶有面部潮紅、出汗等[17]。不良反應(yīng)的發(fā)生以速發(fā)型為主[18]。因此開展復(fù)方麝香注射液非臨床安全性質(zhì)量控制研究具有積極的意義，為臨床用藥安全提供依據(jù)。

3.1 細(xì)菌內(nèi)毒素 目前復(fù)方麝香注射液沿用家兔法測(cè)定熱原，針對(duì)該方法存在操作繁瑣、費(fèi)時(shí)、成本高、靈敏度低的弊端，已有研究采用細(xì)菌內(nèi)毒測(cè)定法代替家兔法測(cè)熱原的文獻(xiàn)報(bào)道。陳君[19]將復(fù)方麝香注射液稀釋30倍后，使用膠凝法測(cè)定細(xì)菌內(nèi)毒素，結(jié)果與家兔法一致且無干擾。仇迅倬等[20]建立了動(dòng)態(tài)濁度法測(cè)定復(fù)方麝香注射液細(xì)菌內(nèi)毒素的方法，發(fā)現(xiàn)該產(chǎn)品對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)有抑制作用，通過稀釋方法可排除干擾。

3.2 溶血試驗(yàn) 復(fù)方麝香注射液為中藥制劑，所含成分多，且含有的表面活性劑具有乳化作用，可能使紅細(xì)胞破裂出現(xiàn)溶血。朱勤等[21]采用分光光度法測(cè)定復(fù)方麝香注射液對(duì)家兔的血紅細(xì)胞的溶血度，并與中國藥典中常規(guī)溶血試驗(yàn)(試管內(nèi)肉眼觀察)對(duì)照，發(fā)現(xiàn)來自5個(gè)生產(chǎn)廠家的13批產(chǎn)品按原液、1∶2倍、1∶4倍、1∶6倍、1∶8倍、1∶12.5倍逐步稀釋后，再分別使用上述兩種方法檢測(cè)，結(jié)果一致；各廠家的產(chǎn)品從1∶6倍濃度稀釋液(未超過最大使用量)起均無溶血與凝聚現(xiàn)象，但同一廠家不同批次的產(chǎn)品其溶血性有差異，可能與生產(chǎn)中雜質(zhì)類成分的去除程度有關(guān)，也可能與附加劑的加入量有關(guān)。武少馨等[22]在復(fù)方麝香注射液的溶血試驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)不同廠家產(chǎn)品的溶血性差異較明顯，但均未出現(xiàn)溶血與凝聚現(xiàn)象。這兩個(gè)研究均認(rèn)為分光光度法觀察溶血對(duì)結(jié)果的判斷最好。

3.3 異常毒性 異常毒性是有別于藥物本身所具有的毒性特征，是指由生產(chǎn)過程中引入或其他原因所致的毒性，給予動(dòng)物一定劑量的供試品溶液，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察動(dòng)物出現(xiàn)的異常反應(yīng)或死亡情況，檢查供試品中是否污染外源性毒性物質(zhì)及是否存在意外的不安全因素。武少馨等[22]在復(fù)方麝香注射液非臨床安全性研究中得出小鼠的最大耐受量為人臨床用量的100倍，異常毒性試驗(yàn)中小鼠無異常現(xiàn)象。

3.4 過敏試驗(yàn) 過敏反應(yīng)是外來性抗原物質(zhì)與體內(nèi)抗體間所發(fā)生的一種非正常免疫反應(yīng)。對(duì)于一些過敏性體質(zhì)的患者來說，中藥注射液的成分越多，越易引起過敏反應(yīng)。過敏試驗(yàn)一般采用豚鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，為臨床用藥安全提供依據(jù)。武少馨等[22]在過敏實(shí)驗(yàn)中采用1.5 ml/kg(約相當(dāng)于人臨床用量的4.5倍)的劑量給豚鼠體內(nèi)注射了4個(gè)不同廠家的7批復(fù)方麝香注射液，結(jié)果豚鼠均出現(xiàn)類似過敏癥狀。

4 其 他

4.1 總固體 經(jīng)水蒸氣蒸餾收集蒸餾液，添加助溶劑后制成了復(fù)方麝香注射液。現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[3]中將本品10 ml置于已恒重的蒸發(fā)皿中，蒸干后105 ℃干燥3 h，要求“遺留殘?jiān)坏蒙儆?.5%”，而蒸干和干燥過程中揮發(fā)性成分勢(shì)必會(huì)損失，干燥后遺留的殘?jiān)饕禽o料類物質(zhì)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)【制法】中已經(jīng)明確的產(chǎn)品輔料有助溶劑聚山梨酯80和pH值調(diào)節(jié)劑氫氧化鈉，聚山梨酯80用量為2%(ml/ml)，添加量較大。在中國藥典2000年版[23]、2005版[24]、2010年版[25]、2015年版[26]中聚山梨酯80均使用費(fèi)休氏法容量滴定法檢查水分。中藥注射液再評(píng)價(jià)工作方案(征求意見稿)中指出“揮發(fā)性成分制成的注射劑可以采用揮發(fā)性成分總量代替總固體的檢查”。因此筆者認(rèn)為，該產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中此項(xiàng)目有待進(jìn)一步研究。

4.2 輔料 注射劑是一種直接注射進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)的劑型，對(duì)其質(zhì)量、安全性要求更高。注射劑在生產(chǎn)中往往會(huì)根據(jù)藥物的性狀、理化特性適當(dāng)添加一定輔料，調(diào)節(jié)主藥的溶解度、穩(wěn)定性、酸堿度等。輔料是注射劑的一個(gè)重要組成部分，直接影響制劑的質(zhì)量，因此有必要控制輔料的質(zhì)量。復(fù)方麝香注射液中添加了聚山梨酯80，有文獻(xiàn)報(bào)道表面活性劑聚山梨酯80有一定溶血現(xiàn)象，溶血率與聚山梨酯80的含量不呈絕對(duì)的線性關(guān)系[27]。聚山梨酯80的含量測(cè)定方法[28-30]有分光光度法(比色法)、氣相色譜法、液相色譜法等。程世云等[31]建立了高效液相色譜—蒸發(fā)光散射法測(cè)定復(fù)方麝香注射液中聚山梨酯80的方法，使用TSK GEL G2000SWxl色譜柱，以乙腈-0.01 mol/L乙酸銨溶液(8∶92)為流動(dòng)相，流速0.8 ml/min，柱溫30 ℃，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器漂移管溫度103 ℃，載氣為氮?dú)?，流量?.5 L/min，方法操作簡單、快速，可作為復(fù)方麝香注射液中聚山梨酯80的質(zhì)量控制方法。

5 結(jié) 語

復(fù)方麝香注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[3]中缺少安全性指標(biāo)、指紋圖譜或特征圖譜的全面質(zhì)量控制，且含量控制成分相對(duì)單一。近年來該產(chǎn)品的研究內(nèi)容包括對(duì)該產(chǎn)品中多種揮發(fā)性成分含量測(cè)定的研究；指紋圖譜的測(cè)定方法研究；溶血與凝聚、異常毒性、過敏試驗(yàn)等非臨床安全性試驗(yàn)的探索；還有對(duì)輔料聚山梨酯80的控制研究。這些研究為今后該產(chǎn)品質(zhì)量控制的深入研究或提高均有一定的參考意義。

臨床應(yīng)用復(fù)方麝香注射液治療疾病對(duì)大多數(shù)患者是有效、較安全的。復(fù)方麝香注射液對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有著小劑量興奮、大劑量抑制的雙向調(diào)節(jié)作用[32]，臨床使用時(shí)應(yīng)慎重選擇使用劑量，避免超劑量使用。同時(shí)，醫(yī)護(hù)人員還要關(guān)注配置時(shí)空間環(huán)境的潔凈度，注意藥物的用法、用量和配制濃度；避免因藥液濃度過高、輸注速度過快等引起不良事件[33]。生產(chǎn)企業(yè)也應(yīng)注重完善藥品說明書安全性信息，優(yōu)化生產(chǎn)工藝，提高產(chǎn)品質(zhì)量。