閩東地區(qū)兒童地中海貧血的基因表型及分析

李春芳 左娟 何思俊 陳東亮 鐘健 林泉

（1 福建省寧德市閩東醫(yī)院小兒內(nèi)科 寧德355000；2 福建省寧德市閩東醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心 寧德355000）

地中海貧血是一種單基因遺傳病，又稱海洋性貧血或珠蛋白生成障礙性貧血，具有高發(fā)病率、高危害性，發(fā)病機(jī)制為血紅蛋白中1 種及以上珠蛋白在遺傳基因缺陷的情況下缺乏合成或缺乏充足的合成，從而促進(jìn)病理或貧血狀態(tài)的出現(xiàn)[1]。命名、分類(lèi)依據(jù)為缺乏的珠蛋白鏈程度及種類(lèi)，α 地中海貧血指α 珠蛋白鏈缺乏，β 地中海貧血指β 珠蛋白鏈缺乏[2]。本研究分析了閩東地區(qū)兒童地中海貧血的基因表型。現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2017 年10 月～2019年6 月疑似地中海貧血兒童125 例資料，其中男75例，女 50 例；年齡 5 個(gè)月 ～13 歲，平均（6.6±1.4）歲；年齡分布：5～6 個(gè)月 5 例，7 個(gè)月 ～4 歲 32 例，5～11 歲 45 例，12～13 歲 43 例。貧血標(biāo)準(zhǔn)：血紅蛋白（Hb）含量，新生兒期＜145 g/L、1～4 個(gè)月＜90 g/L、4～6 個(gè)月＜100 g/L、6～59 個(gè)月＜110 g/L、5～11 歲＜115 g/L 和 12～14 歲＜120 g/L。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：紅細(xì)胞平均血紅蛋白均在28pg 以下；紅細(xì)胞平均體積均在80fl 以下。排除標(biāo)準(zhǔn)：依從性較差；合并血液系統(tǒng)疾??；合并免疫系統(tǒng)疾病。

1.3 研究方法

1.3.1 主要儀器和試劑 使用杭州博日科技有限公司生產(chǎn)的TC-96/G/H（b）C LifeECO 基因擴(kuò)增儀，日本希森美康株式會(huì)社生產(chǎn)的XS-10 全自動(dòng)模塊式血液體液分析儀，潮州開(kāi)普生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的地中海貧血基因檢測(cè)試劑盒、血液基因組DNA提取試劑盒、HB-2012A 醫(yī)用核酸分子雜交儀等。

1.3.2 篩查方法 采用血細(xì)胞分析儀對(duì)外周血中平均血紅蛋白體積（MCV）、平均血紅蛋白（MCH）、Hb進(jìn)行測(cè)定，初步排除其他因素引發(fā)的貧血。

1.3.3 標(biāo)本采集和制備 抽取篩查陽(yáng)性、高度疑似地中海貧血兒童的2 ml 外周靜脈血，EDTA-2K 抗凝，應(yīng)用地中海貧血基因診斷試劑盒提取DNA。

1.3.4 基因診斷 運(yùn)用跨越斷點(diǎn) PCR 法（Gap-PCR）擴(kuò)增α 地中海貧血，運(yùn)用普通PCR 法擴(kuò)增β 地中海貧血，擴(kuò)增程序?yàn)?5℃、97℃、60℃、72℃溫度下分別預(yù)變性15 min、變性50 s、退火60 s、延伸2 min，35 個(gè)循環(huán)，最后在72℃的溫度下延伸10 min，在導(dǎo)流雜交儀上導(dǎo)流雜交擴(kuò)增產(chǎn)物及標(biāo)記有不同突變或缺失類(lèi)型探針的尼龍膜，依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)判定結(jié)果[3]。

2 結(jié)果

2.1 125 例兒童地中海貧血基因篩查結(jié)果分析125 例兒童中，正常 50 例，α 地中海貧血 32 例，β 地中海貧血38 例，α、β 復(fù)合地中海貧血5 例。見(jiàn)表1。

表1 125 例兒童地中海貧血基因篩查結(jié)果分析[例（%）]

2.2 32 例α 地中海貧血患兒的基因型分布情況分析 32 例 α 地中海貧血患兒中，α 雜合子 29 例，占總數(shù)的 23.2%，其中 - -SEA/αα 26 例，-α3.7/αα 2 例，-α4.2/αα 1 例；α 點(diǎn)突變 2 例，占總數(shù)的 1.6%，其中ααQS/αα 1 例，ααWS/αα 1 例；α 雙重雜合子 1 例，為--SEA/ααCS，占總數(shù)的0.8%。見(jiàn)表2。

表2 32 例α 地中海貧血患兒的基因型分布情況分析[例（%）]

2.3 38 例β 地中海貧血患兒的基因型分布情況分析 38 例β 地中海貧血患兒中，IVS-II-654/N 19例，CD41-42/N 12 例，CD17/N 4 例，CD27-28/N 1例，βE/N 1 例，CD41-42/CD27-28 1 例。見(jiàn)表 3。

表3 38 例β 地中海貧血患兒的基因型分布情況分析[例（%）]

2.4 5 例α、β 復(fù)合地中海貧血患兒的基因型分布情況分析 5 例 α、β 復(fù)合地中海貧血患兒中，--SEA/αα，CD41-42/N 1 例 ；-α3.7/αα，CD17/N 1 例 ；ααCS/αα，IVS-II-654/N1 例；--SEA/αα，IVS-II-654/N1 例；-α3.7/αα，IVS-II-654/N 1 例。見(jiàn)表 4。

表4 5例α、β 復(fù)合地中海貧血患兒的基因型分布情況分析[例（%）]

3 討論

地中海貧血是遺傳性貧血病的一種，由于高發(fā)于地中海地區(qū)，所以命名為地中海貧血。除地中海地區(qū)以外，其他地區(qū)包括我國(guó)南方地區(qū)和少數(shù)民族也有發(fā)病[4～5]。紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白是由兩條α 鏈和兩條β 鏈所組成，因此地中海貧血分為兩種，一種叫α-地中海貧血，一種叫β-地中海貧血，α-地中海貧血是因?yàn)棣?鏈基因發(fā)生問(wèn)題，合成不足而引起；β- 地中海貧血是因?yàn)楹铣搔?鏈的基因發(fā)生問(wèn)題，合成β 鏈不足而引起的貧血[6～7]。地中海貧血臨床較易診斷，最簡(jiǎn)單的方法為行血紅蛋白電泳檢查，可以看到異常表現(xiàn)，進(jìn)一步還可行基因篩查，明確地中海貧血具體基因異常表現(xiàn)，達(dá)到分子水平的診斷[8]。

本研究結(jié)果顯示，125 例兒童中，正常50 例，α地中海貧血 32 例，β 地中海貧血 38 例，α、β 復(fù)合地中海貧血5 例，分別占總數(shù)的40.0%、25.6%、30.4%、4.0%。32 例 α 地中海貧血患兒中，α 雜合子 29 例，占總數(shù)的23.2%，其中- -SEA/αα 26 例，占總數(shù)的20.8%。38 例β 地中海貧血患兒中，IVS-II-654/N 19例，占總數(shù)的15.2%。5 例α、β 復(fù)合地中海貧血患兒中，--SEA/αα，CD41-42/N 1 例，-α3.7/αα，CD17/N 1 例，ααCS/αα，IVS-II-654/N 1 例，- -SEA/αα，IVS-II-654/N 1 例，-α3.7/αα，IVS-II-654/N1 例，均占總數(shù)的 0.8%，說(shuō)明閩東地區(qū)兒童地中海貧血的發(fā)病率高，其中α地中海貧血基因表型主要為α 雜合子- -SEA/αα，β地中海貧血基因表型主要為IVS-II-654/N。因此，閩東地區(qū)應(yīng)該對(duì)篩查兒童人群的力度進(jìn)行強(qiáng)化，進(jìn)而有效診斷其基因，篩查出地中海貧血基因攜帶者，并及時(shí)采取有效措施。同時(shí)，充分重視產(chǎn)前篩查與診斷婚育年齡婦女地中海貧血，避免地中海貧血基因蔓延，切實(shí)有效實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育的目標(biāo)。綜上所述，閩東地區(qū)兒童地中海貧血的發(fā)病率高，其中α 地中海貧血基因表型主要為 α 雜合子 - -SEA/αα，β 地中海貧血基因表型主要為IVS-II-654/N。