注射用骨肽（I）的抗炎療效研究

李建英，邢 慶，陳 敏

（黑龍江江世藥業(yè)有限公司，黑龍江 哈爾濱 150069）

炎癥（inflammation）是生物組織受到外傷、感染等損傷因子的刺激下所發(fā)生的一種以防御反應(yīng)為主的基本病理過(guò)程，表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和功能障礙。釋放炎性細(xì)胞因子如IL6、TNF等。炎癥引發(fā)的疼痛是多因素相互作用的結(jié)果。常見的炎癥包括皮炎、腦炎、心肌炎、鼻炎、關(guān)節(jié)炎等。其中關(guān)節(jié)炎是一種常見的慢性炎癥疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前全世界關(guān)節(jié)炎患者有3.55億人。截至2015年中國(guó)大陸地區(qū)患關(guān)節(jié)炎的病人達(dá)1億人以上，且人數(shù)還在不斷增加。關(guān)節(jié)炎共有100多種類型。根據(jù)是否為細(xì)菌感染引起，可將關(guān)節(jié)炎分為化膿性關(guān)節(jié)炎、非化膿性關(guān)節(jié)炎。其中，非化膿性關(guān)節(jié)炎包括骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、大骨節(jié)病、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎等。炎性創(chuàng)傷可使機(jī)體炎癥因子水平顯著升高，炎癥因子的釋放在疼痛的機(jī)制研究中占有舉足輕重的地位，因而炎癥因子的改善是評(píng)價(jià)藥物抗炎效果的重要指標(biāo)[1]。目前，治療關(guān)節(jié)炎采用藥物治療、輔助治療和手術(shù)治療等三種方式。對(duì)于晚期患者，手術(shù)治療不失為一種好的治療手段；對(duì)于早中期的患者，一般采取藥物治療并配合其他方法輔助治療。其中藥物治療主要采用非甾體類抗炎藥以及腎上腺皮質(zhì)激素類藥物。

隨著生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展，多種類型的多肽類藥物上市并進(jìn)入臨床研究階段，并逐漸成為治療關(guān)節(jié)疾病的首選藥物[2]。注射用骨肽（I）屬于生化藥物，是從胎牛的四肢骨中提取的骨肽（I）溶液加適量輔料制成的無(wú)菌凍干品。成分中主要含有多肽類骨代謝因子，有拮抗炎性細(xì)胞因子，緩解炎性反應(yīng)，調(diào)節(jié)鈣磷代謝，促進(jìn)新骨形成、同時(shí)增加骨鈣沉積的作用。本文詣在對(duì)注射用骨肽（I）的抗炎效果進(jìn)行研究，觀察評(píng)價(jià)注射用骨肽（I）的抗炎作用，為臨床合理用藥奠定基礎(chǔ)提供有效的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雄性大鼠20只，體重120～160g，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（遼）2015-0001，編號(hào)：211002300022971

1.1.2 主要藥品及試劑

注射用骨肽（I）（黑龍江江世藥業(yè)有限公司，批號(hào)170818）；角叉菜膠（Sigma 公司生產(chǎn)，批號(hào)080M0192V）；滅菌注射用水（山東華魯制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào) 1601282）；氯化鈉注射液（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司，批號(hào) 170110D10）。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

電子天平（型號(hào)JJ2000，編號(hào)DWS-YQ-084）；超凈工作臺(tái)（型號(hào)CJ-2F，編號(hào)DWS-YQ-085）；手提式壓力蒸汽滅菌器（型號(hào)SYQ-DSX-280B，編號(hào)DWS-YQ-021）；足跖容積測(cè)量?jī)x（型號(hào)YLS-7C，編號(hào)DWS-YQ-083）

1.2 方法

1.2.1 大鼠足腫脹度測(cè)定

取20只大鼠，稱重，隨機(jī)分為 2組。即空白對(duì)照組，注射用骨肽（I）組。分組后用足跖容積測(cè)量?jī)x一次測(cè)量所有大鼠的右后足足容積作為基礎(chǔ)容積，測(cè)量完畢之后在其右后足足跖部位皮下注射1%角叉菜膠0.1 ml/只，空白對(duì)照組注射等容積的生理鹽水。注射完角叉菜膠或生理鹽水后，分別再用足跖容積測(cè)量?jī)x測(cè)量致炎后1h、2 h、3 h、4 h、5 h大鼠的右后足足容積，記錄數(shù)據(jù)，計(jì)算腫脹抑制率[3]。通過(guò)比較兩組足腫脹程度及腫脹抑制率，評(píng)價(jià)注射用骨肽（I）的抗炎作用。

腫脹抑制率=(對(duì)照組足跖腫脹度－給藥組足跖腫脹度)/對(duì)照組足跖腫脹度×100%。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

各組計(jì)量數(shù)據(jù)均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，應(yīng)用Excel 2003和 SPSS 11.5 Graphpad 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，P＜0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 注射用骨肽（I）對(duì)大鼠足腫脹度的影響

大鼠足跖腫脹度隨致炎時(shí)間變化的結(jié)果如表1、圖1所示。應(yīng)用足跖容積測(cè)量?jī)x測(cè)定大鼠的足跖體積，比較兩組足腫脹度的變化趨勢(shì)以及同一組中不同時(shí)間點(diǎn)大鼠的致炎程度變化趨勢(shì)。由方差分析結(jié)果可知時(shí)間因素有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，說(shuō)明兩組大鼠致炎后的足腫脹度有隨時(shí)間變化的趨勢(shì)。從表中的結(jié)果可知，與空白對(duì)照組相比，注射用骨肽（I）組在致炎起始階段（1h時(shí)）大鼠的足跖腫脹度略低于空白對(duì)照組，說(shuō)明藥物起了作用。兩組大鼠的足跖腫脹度在致炎后2h時(shí)均達(dá)到高峰，此時(shí)兩組大鼠的腫脹度分別為37.93±7.26、32.36±1.33，注射用骨肽（I）組大鼠足跖腫脹度（32.36±1.33）明顯低于空白對(duì)照組（37.93±7.26）（P＜0.01）。注射用骨肽（I）組在致炎后 2 h 與同一時(shí)間點(diǎn)的空白對(duì)照組比較，均能顯著抑制大鼠足跖腫脹度(P＜0.01)，說(shuō)明注射用骨肽（I）組在 2 h 后能顯著抑制大鼠足跖腫脹。致炎后5h時(shí)空白對(duì)照組和注射用骨肽（I）組大鼠的足跖腫脹度分別下降到19.83±4.07、15.61±2.86。與空白對(duì)照組相比，注射用骨肽（I）組足腫脹度下降顯著(P＜0.05)。

大鼠足跖腫脹抑制率隨時(shí)間變化曲線如圖2所示。從圖中可以看出致炎后3h時(shí)抑制率呈明顯上升趨勢(shì)，4h時(shí)抑制率達(dá)到最高值，說(shuō)明此時(shí)注射用骨肽（I）對(duì)大鼠足跖腫脹起到明顯的抑制作用。

表1. 大鼠足跖腫脹度隨致炎時(shí)間變化的結(jié)果（n=10，±s）Table 1. The results of the changes of swelling degree of rat plantar with time of in flammation（n=10，±s）

表1. 大鼠足跖腫脹度隨致炎時(shí)間變化的結(jié)果（n=10，±s）Table 1. The results of the changes of swelling degree of rat plantar with time of in flammation（n=10，±s）

注: *與空白組比較 P＜0．05， **與空白組比較 P＜0．01

足跖腫脹度1h 2h 3h 4h 5h空白對(duì)照組 31.53±2.34 37.93±7.26 32.55±4.51 29.22±4.37 19.83±4.07注射用骨肽（I）組 29.67±2.21 32.36±1.33** 21.57±2.44** 18.86±3.15** 15.61±2.86*組別

圖1. 大鼠足跖腫脹度隨致炎時(shí)間變化的結(jié)果（n=10）Fig1. The results of the changes of swelling degree of rat plantar with time of in flammation（n=10）

圖2. 大鼠足跖腫脹抑制率隨時(shí)間變化曲線Fig2. Time-dependent curve of inhibition rate of rat plantar swelling

3 討 論

本文主要對(duì)注射用骨肽（I）的抗炎作用進(jìn)行研究，首先通過(guò)角叉菜膠誘發(fā)大鼠足跖腫脹建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，觀察注射用骨肽（I）對(duì)大鼠足跖腫脹度變化的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，注射用骨肽（I）能夠明顯抑制大鼠足跖腫脹，說(shuō)明其在大鼠患炎部位產(chǎn)生了明顯的抗炎消腫作用。并且從圖2可以看出，致炎4小時(shí)后，注射用骨肽（I）對(duì)大鼠足跖腫脹抑制率達(dá)到最高值，說(shuō)明此時(shí)藥物對(duì)大鼠足跖腫脹起到明顯的抑制作用。

關(guān)節(jié)炎是常見的炎癥反應(yīng)之一，是一種慢性炎癥疾病。常常表現(xiàn)為關(guān)節(jié)疼痛、關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)功能障礙等。嚴(yán)重者可導(dǎo)致關(guān)節(jié)殘疾，并且影響患者生活質(zhì)量，給家庭帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的因素復(fù)雜，主要與自身免疫反應(yīng)、感染、代謝紊亂、創(chuàng)傷、退行性病變等因素相關(guān)。目前臨床上通常采用非甾體類抗炎藥以及腎上腺皮質(zhì)激素類藥物治療關(guān)節(jié)炎。但不屬于特效方法 ,且長(zhǎng)期服藥毒性和不良作用較大[4]。

注射用骨肽（I）是應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)加工提取制成，其成份主要為胎牛四肢骨中的多肽類骨代謝因子。具有針對(duì)性強(qiáng)，副作用小，易于被人體吸收的特點(diǎn)。注射用骨肽（I）中含有的多肽類骨代謝因子能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生骨源性細(xì)胞及因子包括骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白( BMP)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β ( TGF-β) 、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子( FGF) 、血小板衍生生長(zhǎng)因子( PDGF) 、堿性磷酸酶(ALP)，故具有調(diào)節(jié)骨代謝、抗炎并促進(jìn)骨折愈合的作用。其中骨形態(tài)發(fā)生蛋白( BMP) 是骨組織形成過(guò)程中效用最強(qiáng)的骨生長(zhǎng)因子，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β ( TGF-β) 對(duì)骨形態(tài)發(fā)生蛋白( BMP)有協(xié)同作用，并具有抗炎活性，可抑制各種由于骨關(guān)節(jié)炎癥產(chǎn)生的炎性浸潤(rùn)和關(guān)節(jié)損傷，并有效促進(jìn)軟骨關(guān)節(jié)修復(fù)，增加骨鈣沉積的作用[5]。