藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液的研制及抗疲勞活性評價(jià)

吳元宏，毛迪銳，武玉瑩，韓趙東，馬文婕，楊舒婷

（北華大學(xué)林學(xué)院，吉林吉林132013）

藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液的研制及抗疲勞活性評價(jià)

吳元宏，毛迪銳*，武玉瑩，韓趙東，馬文婕，楊舒婷

（北華大學(xué)林學(xué)院，吉林吉林132013）

以藍(lán)莓、紅景天為主要原料，經(jīng)過提取、過濾、濃縮、調(diào)配、澄清、殺菌等工藝，研制一款藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液。采用正交試驗(yàn)，利用感官評定，確定藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液的最佳配方為：每100 mL口服液中藍(lán)莓濃縮汁45 mL，紅景天濃縮汁20 mL，β-環(huán)糊精添加量為0.25 g，白砂糖8 g。通過小鼠的耐力試驗(yàn)和生化指標(biāo)測定，口服液能夠提高小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，提高小鼠體內(nèi)肝糖原和肌糖原的含量，降低血尿素氮和血乳酸的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液具有抗疲勞作用。

藍(lán)莓；紅景天；口服液；抗疲勞

藍(lán)莓（Blueberry）為越橘屬（Vacciuium spp.）多年生灌木小漿果果樹。藍(lán)莓果實(shí)中含有豐富的花青素、多糖、黃酮、尼克酸以及多種維生素、不飽和脂肪酸、超氧化物歧化酶、礦物質(zhì)等成分，具有抗氧化、降血脂、抗衰老、保護(hù)視力及減少心腦血管疾病[1-5]等功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，紅景天植物中含有紅景天苷、黃酮、生物堿、多糖等多種生物活性物質(zhì)，具有抗衰老、抗疲勞、抗缺氧、抗衰老[6-9]等功效。疲勞是一個(gè)復(fù)雜的生理狀態(tài)，指機(jī)體生理過程不能持續(xù)其機(jī)能某一特定的水平和（或）不能維持預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度[10]?？蛊谑悄壳斑\(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)和保健研究的一個(gè)熱點(diǎn)問題。通常依靠營養(yǎng)物質(zhì)的補(bǔ)充和中醫(yī)藥療法來延緩疲勞癥狀的發(fā)生，達(dá)到抗疲勞的目的?？诜阂蚓哂蟹奖阋讛y帶、日常服用計(jì)量小，液態(tài)易吸收等優(yōu)點(diǎn)，近年來發(fā)展很快，尤其是保健口服液日益增多。本文以藍(lán)莓和紅景天為原料，研究一款藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液，并通過小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)和體內(nèi)生化指標(biāo)的測定，研究其抗疲勞活性。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

藍(lán)莓：采于吉林省白山市靖宇縣；紅景天：購于吉林市江城大藥房；纖維素酶：酶活性50 000 U/g，深圳恒生生物科技有限公司；20 g～22 g清潔級健康昆明種雄性小白鼠：購于吉林大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，生產(chǎn)和使用許可證號(hào)：SCXK（吉）2013-0001；血尿素氮（BUN）測定試劑盒、血乳酸（BLA）測定試劑盒、肝糖原（LG）測定試劑盒、肌糖原（MG）測定試劑盒：南京建成生物工程研究所；其他試劑均為分析純。

JY92-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)：寧波新芝生物科技股份有限公司；HWC-3型微波提取設(shè)備：天水華圓制藥設(shè)備科技有限公司；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋：江蘇省金壇市科技儀器有限公司；LG10-2.4A高速離心機(jī)：北京醫(yī)用離心機(jī)廠；SHZ-Ⅲ循環(huán)水真空泵：上海亞榮生化儀器廠；722N可見分光光度計(jì)：上海佑科儀器儀表有限公司；XSC型小鼠恒溫游泳池：淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司；DY89-II型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)：寧波新芝生物科技股份有限公司；2695高效液相色譜儀：大連依利特有限公司。

1.2 方法

1.2.1 藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液的制備

1.2.1.1 工藝流程

1.2.1.2 操作要點(diǎn)

藍(lán)莓清洗后冷凍，加入6倍的蒸餾水打漿，加入0.5%的纖維素酶，在40℃條件下酶解100 min，100℃滅酶，然后進(jìn)行超聲波提?。ㄌ崛r(shí)間40 min，提取溫度50℃，超聲功率80 W），將提取液以3 000 r/min離心10 min進(jìn)行分離，取上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至藍(lán)莓多糖含量為1 mg/mL，備用[11-12]。

紅景天粉碎過50目篩，加入10倍量的蒸餾水浸泡90 min，微波提取3次，每次90 s，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至紅景天苷含量為1 mg/mL，備用[13]。

將藍(lán)莓濃縮液、紅景天濃縮液、白砂糖、β-環(huán)糊精、純凈水等進(jìn)行混合調(diào)配，過濾，除去雜質(zhì)，將調(diào)配好的口服液灌裝在玻璃瓶內(nèi)，每瓶100 mL，在80℃下殺菌30 min。冷卻，成品。

1.2.1.3 藍(lán)莓多糖和紅景天苷含量的測定

藍(lán)莓多糖含量的測定：采用硫酸——苯酚法[12]測定藍(lán)莓提取液中多糖的含量。

紅景天苷含量的測定：采用高效液相色譜法[14]測定紅景天提取液中紅景天苷的含量。

1.2.2 藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液最佳配方試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇影響口服液感官評價(jià)結(jié)果較大的4個(gè)因素（藍(lán)莓濃縮液、紅景天濃縮液、白砂糖、β-環(huán)糊精），采用L9（34）正交試驗(yàn)，以感官評分為指標(biāo)，利用極差分析，確定口服液的最佳配方。

1.2.3 藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液感官評分標(biāo)準(zhǔn)

組織食品專業(yè)30名同學(xué)對藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液進(jìn)行感官評價(jià)，評價(jià)指標(biāo)包括：色澤、口感、滋味、組織狀態(tài)。采用模糊數(shù)學(xué)評價(jià)法，滿分100分，評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液感官評分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Sensory evaluation criteria of compound oral liquid of blueberry and rhodiolae

1.2.4 抗疲勞實(shí)驗(yàn)

1.2.4.1 動(dòng)物分組及給藥方法

將適應(yīng)7 d后的小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為對照組和低、中、高3個(gè)不同實(shí)驗(yàn)劑量組，每試驗(yàn)組各10只小鼠。分別將口服液濃縮10倍，20倍，40倍作為實(shí)驗(yàn)的低、中、高3個(gè)劑量組[15]；空白對照組給予相等體積的蒸餾水；灌胃量按0.1 mL/10 g，每日1次，連續(xù)15 d，灌胃期間自由取食和飲水。

1.2.4.2 小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)

末次給樣30 min后，將小鼠尾部負(fù)上小鼠自身重量5%的砝碼，放入恒溫游泳池中，水溫（25±0.5）℃，放入小鼠開始計(jì)時(shí)，至小鼠沉于水面下10 s后不能浮出水面的時(shí)間作為力竭游泳時(shí)間[16]。

1.2.4.3 生化指標(biāo)的測定

1.3 數(shù)據(jù)處理方法

2 結(jié)果與分析

2.1 藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液的單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 藍(lán)莓濃縮汁添加量的試驗(yàn)結(jié)果

藍(lán)莓多糖具有良好的抗疲勞作用[17]。分別在紅景天濃縮汁、白砂糖、β-環(huán)糊精添加量不變的情況下，每100 mL口服液添加不同體積的藍(lán)莓濃縮汁，根據(jù)感官評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價(jià)，選擇藍(lán)莓濃縮汁的添加量。結(jié)果見表2。

表2 藍(lán)莓濃縮汁添加量對感官品質(zhì)的影響Table 2 Effect of concentration of blueberry juice concentrate on sensory quality

由表2可知，在藍(lán)莓濃縮汁添加量為35 mL～40 mL時(shí)，口服液呈透明狀態(tài)，而隨著藍(lán)莓濃縮汁添加量的增加，口服液酸度增加，口感和透明度均下降，所以選擇35、40、45 mL作為正交試驗(yàn)的水平范圍。

2.1.2 紅景天濃縮汁添加量的試驗(yàn)結(jié)果

唐氏綜合征是由英國醫(yī)生Langdon Down首先詳細(xì)描述的，因此將這種病癥稱為Down綜合征，即唐氏綜合征，俗稱先天愚型。

紅景天具有多種活性成分，其中紅景天苷具有顯著的抗疲勞作用[18]。在保證具有抗疲勞功效的基礎(chǔ)上，每100 mL口服液添加不同體積的紅景天濃縮液，根據(jù)感官評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價(jià)，選擇紅景天濃縮汁的添加量。結(jié)果見表3。

表3 紅景天濃縮汁添加量對感官品質(zhì)的影響Table 3 Effect of concentration of rhodiolae juice concentrate on sensory quality

紅景天中含有大量的鞣質(zhì)，導(dǎo)致紅景天濃縮汁具有苦、澀味。由表3可知，當(dāng)紅景天濃縮汁添加量超過30 mL時(shí)，苦澀味道難以掩蓋，對口服液的口感影響較大。所以選擇20、25、30 mL作為正交試驗(yàn)的水平范圍。

2.1.3 白砂糖添加量的試驗(yàn)結(jié)果

藍(lán)莓濃縮汁口感偏酸，紅景天濃縮汁口感偏苦、澀，因此在藍(lán)莓濃縮汁、紅景天濃縮汁、β-環(huán)糊精添加量不變的情況下，每100 mL口服液添加不同質(zhì)量的白砂糖，通過感官評價(jià)，確定白砂糖的最佳添加量。結(jié)果見表4。

表4 白砂糖添加量對感官品質(zhì)的影響Table 4 Effect of concentration of sugar on sensory quality

由表4得出，在添加量為4 g～6 g之間甜味偏淡，藍(lán)莓濃縮汁偏酸，使得口服液整體口感偏酸，不潤滑，評分偏低，在添加量為10 g～12 g時(shí)偏甜。所以選擇7、8、9 g作為正交試驗(yàn)的水平范圍。

2.1.4 β-環(huán)糊精添加量的試驗(yàn)結(jié)果

在藍(lán)莓濃縮汁、紅景天濃縮汁、白砂糖添加量不變的情況下，每100 mL口服液添加不同質(zhì)量的β一環(huán)糊精，通過感官評價(jià)，確定β-環(huán)糊精最佳添加量。結(jié)果見表5。

表5 β-環(huán)糊精添加量對感官品質(zhì)的影響Table 5 Effect of concentration of β-cyclodextrin on sensory quality

β-環(huán)糊精具有包埋作用，可以適當(dāng)降低苦、澀味。由表5得出，β-環(huán)糊精的添加量0.15 g時(shí)口服液的苦澀味減弱，添加量達(dá)到0.20 g時(shí)，無明顯苦味和澀味，并且口服液具有藍(lán)莓和紅景天的香味。所以選擇0.15、0.20、0.25 g作為正交試驗(yàn)的水平范圍。

2.2 藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液的正交試驗(yàn)結(jié)果

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇藍(lán)莓濃縮汁、紅景天濃縮汁、白砂糖、β-環(huán)糊精為考察因素，進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)。以100 mL口服液為基準(zhǔn)，正交試驗(yàn)因素和水平和試驗(yàn)結(jié)果見表6。

表6L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果Table 6Results of the L9（34）orthogonal test

由表6可知，最佳配方為A3B1C3D2，即藍(lán)莓原濃縮汁添加量為45 mL，紅景天濃縮汁添加量20 mL，β-環(huán)糊精添加量為0.25 g，白砂糖添加量為8 g。極差分析結(jié)果與試驗(yàn)結(jié)果一致。極差分析顯示，各因素對混合飲料的影響主次順序?yàn)椋杭t景天濃縮汁添加量（B）＞藍(lán)莓濃縮汁添加量（A）＞白砂糖添加量（D）＞β-環(huán)糊精添加量（C），即紅景天濃縮汁添加量對飲料的影響最大。藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液色澤紫紅色，澄清透明，酸甜適口，具有藍(lán)莓果香和紅景天香氣。

2.3 藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

疲勞最直接的表現(xiàn)就是運(yùn)動(dòng)耐力的下降，小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)是測定小鼠疲勞狀況和運(yùn)動(dòng)耐力的常用實(shí)驗(yàn)方法。復(fù)合口服液對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響見表7。

表7 復(fù)合口服液對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響（n=10，±s）Table 7 Effect of the compound oral liquid on exhaustive swimming time of mice（n=10，±s）

表7 復(fù)合口服液對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響（n=10，±s）Table 7 Effect of the compound oral liquid on exhaustive swimming time of mice（n=10，±s）

注：*與對照組相比，有顯著性差異（P＜0.05）；**與對照組相比，有極顯著性差異（P＜0.01）。

組別 負(fù)重游泳時(shí)間/min 負(fù)重游泳時(shí)間延長率/%對照組 11.27±1.06低劑量組 13.89±1.14*23.25中劑量組 16.83±1.62*49.33高劑量組 18.94±1.54**68.06

由表7可知，與對照組相比，口服液低、中、高劑量組的小鼠負(fù)重游泳時(shí)間均有所延長，低劑量組和中劑量組具有顯著性（P＜0.05），高劑量組具有極顯著性（P＜0.01）；小鼠負(fù)重游泳時(shí)間與對照組相比，分別延長23.25%，49.33%和68.06%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液能延長小鼠運(yùn)動(dòng)時(shí)間，提高小鼠運(yùn)動(dòng)耐力，具有緩解疲勞的作用。

2.4 藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液對小鼠體內(nèi)生化指標(biāo)的影響

當(dāng)機(jī)體長時(shí)間緊張運(yùn)動(dòng)會(huì)使體內(nèi)能源物質(zhì)肌糖原、肝糖原含量減少；蛋白質(zhì)的分解代謝加劇及乳酸含量增加。肝糖原和肌糖原是機(jī)體運(yùn)動(dòng)的主要能量來源，機(jī)體內(nèi)肝糖原和肌糖原含量的增多，可以提供更多的能量。無氧條件下，當(dāng)體內(nèi)糖原被分解產(chǎn)生大量乳酸，釋放出能量的同時(shí)，也會(huì)加速蛋白質(zhì)與氨基酸的分解，使血中尿素氮含量增高。因此，血尿素氮和血乳酸的含量可以反映疲勞的程度。復(fù)合口服液對小鼠體內(nèi)生化指標(biāo)的影響見表8。

表8 復(fù)合口服液對小鼠體內(nèi)生化指標(biāo)的影響（n=10，±s）Table 8 Effect of the compound oral liquid on biochemical indexes in mice（n=10，±s）

表8 復(fù)合口服液對小鼠體內(nèi)生化指標(biāo)的影響（n=10，±s）Table 8 Effect of the compound oral liquid on biochemical indexes in mice（n=10，±s）

注：*與對照組相比，有顯著性差異（P＜0.05）；**與對照組相比，有極顯著性差異（P＜0.01）。

組別LG/（mg/g）MG/（mg/g）BUN/（mmol/L）BLA/（mmol/L）對照組 5.96±1.11 1.33±0.12 8.61±0.58 9.69±1.47低劑量組 7.63±1.67*1.46±0.34 8.12±0.63 8.34±0.96*中劑量組 8.82±1.60*1.60±0.23*8.09±0.59*7.28±0.87*高劑量組 10.68±1.82*1.69±0.09*7.62±0.57*6.32±0.77*

由表8可知，與對照組相比，低、中、高劑量組小鼠中的LG含量均有所增加，且均具有顯著性差異（P＜0.05）；MG含量低劑量組與對照組相比無顯著性差異（P＞0.05），中劑量組和高劑量組呈顯著性差異（P＜0.05）；BUN和BLA含量與對照組相比都有所下降，其中BUN的低劑量組無顯著性差異（P＞0.05），中劑量組和高劑量組呈顯著性差異；BLA低劑量組、中劑量組和高劑量組與對照組相比均呈顯著性差異（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液可以提高小鼠體內(nèi)肝糖原和肌糖原的儲(chǔ)備能力，提高小鼠體內(nèi)有氧代謝能力，減少血乳酸的生成；蛋白質(zhì)的分解代謝作用也會(huì)減慢，降低小鼠運(yùn)動(dòng)后產(chǎn)生的BUN含量，緩解疲勞感。

3 結(jié)論

藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液的最佳配方為：100 mL口服液含有藍(lán)莓原濃縮汁添加量為45 mL，紅景天濃縮汁20 mL，β-環(huán)糊精0.25 g，白砂糖8 g。口服液可以明顯延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，提高小鼠體內(nèi)肝糖原和肌糖原含量，降低血尿素氮和血乳酸含量。藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液對小鼠具有顯著的抗疲勞作用。

[1]田密霞,李亞東,胡文忠,等.60種藍(lán)莓花青素的含量及抗氧化性的比較研究[J].食品研究與開發(fā),2014,35(21)：1-6

[2]徐云,徐建,王婷婷,等.功能性保健食品藍(lán)驀的研究進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā),2013,34(6)：132-134

[3]孟憲軍,畢菀芩,張琦,等.藍(lán)莓花色苷對大鼠視網(wǎng)膜光損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制[J].食品科學(xué),2013,34(11)：242-245

[4]KRIKORIAN R,SHIDLER M D,NASH T A,et al.Blueberry supplementation improves memory in older adults[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2010,58(7)：3996-4000

[5]YUJI K,SAKAIDA H,KAI T,et al.Effect of dietary blueberry(Vucciuium ashei Reade)leaves on serum and hepatic lipid levels in rats[J].Journal of Oleo Science,2013,62(2)：89-96

[6]申佳佳,苑隆國,李電東,等.紅景天苷對自然衰老小鼠模型的抗衰老作用研究[J].中國醫(yī)藥生物技術(shù),2012,7(6)：412-417

[7]徐榮,葛華,王永新.復(fù)方紅景天制劑提高小鼠運(yùn)動(dòng)耐力的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥物應(yīng)用與檢測,2012,9(2)：78-80

[8]金鐵,楊詠潔,李銥軍,等.高山紅景天對小鼠抗疲勞及抗氧化作用的研究[J].食品研究與開發(fā),2013,34(19)：24-26

[9]MAO G,DENG H B,YUAN L G,et al.Protective role of salidroside against aging in a mouse model induced by D-galactose[J].Biomedical and Environmental Sciences,2010,23(2)：161-162

[10]劉源源,劉軍,鄒宇曉,等.抗疲勞功能食品檢測評價(jià)研究進(jìn)展及新思路[J].食品研究與開發(fā),2016,37(2)：209-213

[11]孟憲軍,朱金艷,孫希云,等.酶法優(yōu)化藍(lán)莓多糖的提取工藝[J].食品工業(yè)科技,2009,30(3)：185-187

[12]孫希云,劉寧,孟憲軍,等.藍(lán)莓多糖超聲波提取及脫蛋白方法[J].食品科學(xué),2010,31(22)：134-138

[13]閡建華,章振鵬,孟亞會(huì),等.紅景天苷大孔吸附樹脂純化工藝研究[J].中草藥,2013,44(11)：1426-1430

[14]趙子銘,付剛,李誠.響應(yīng)面法微波輔助乙醇提取紅景天苷工藝優(yōu)化[J].食品科學(xué),2013,34(14)：147-151

[15]李震,張海悅,張鑫,等.紅蘑飲料的研制及其抗疲勞活性研究[J].食品研究與開發(fā),2016,37(9)：105-109

[16]何來英,嚴(yán)衛(wèi)星,樓密密,等.保健食品抗疲勞作用試驗(yàn)方法研究[J].中國食品衛(wèi)生雜志,1997,9(4)：1-6,24

[17]鄭飛.藍(lán)莓多糖對衰老小鼠運(yùn)動(dòng)耐力及抗疲勞效果研究[J].食品科學(xué),2014,32(21)：249-252

[18]張慧云,馬朝陽,王洪新.玫瑰紅景天提取物rosavin抗疲勞作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].食品工業(yè)科技,2013,34(6)：357-359

Development of the Compound Oral Liquid of Blueberry and Rhodiola and Evaluation of Its Anti-fatigue Activity

WU Yuan-hong，MAO Di-rui*，WU Yu-ying，HAN Zhao-dong，MA Wen-jie，YANG Shu-ting
（Forestry College of Beihua University，Jilin 132013，Jilin，China）

Using blueberries and rhodiola as the main raw materials，the compound oral liquid of blueberry and rhodiola was developed through extraction，filtration，concentration，mixing，clarification and sterilization.Using the sensory evaluation，the best formula was determined by orthogonal experiment，it was blueberry juice concentrate 45 mL，rhodiola concentrate 20 mL，β-cyclodextrins 0.25 g，and granulated sugar 8 g in 100 mL compound oral liquid.Through measuring the endurance and biochemical indexes in mice，the compound oral liquid could improve the mice burden swimming time，improve the content of liver glycogen，and muscle glycogen in mice，reduce the content of blood urea nitrogen and serum lactic acid.The experimental results showed that the compound oral liquid of blueberry and rhodiola had the anti-fatigue function.

blueberry；rhodiola；oral liquid；anti-fatigue

2016-10-10

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.14.017

吉林市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2015431015）；北華大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目（201610201013）

吳元宏（1996—），女（漢），本科，研究方向：食品科學(xué)。

*通信作者：毛迪銳，女，副教授。