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    超聲輔助米脂小米中多糖的提取工藝*

    2021-01-12 07:17:44高晶晶劉麗娜陳錦中
    化工科技 2020年6期
    關(guān)鍵詞:米脂小米葡萄糖

    高晶晶,慕 苗,劉麗娜,陳錦中

    (榆林學(xué)院 化學(xué)與化工學(xué)院,陜西 榆林 71900)

    小米原名粟,是谷子脫殼后的產(chǎn)物,小米具有很高的營養(yǎng)價值,其中蛋白質(zhì)、脂肪和維生素含量很高[1]。由于陜北特殊的地理位置和得天獨厚的氣候環(huán)境,米脂小米相對于其他小米更加優(yōu)良[2-3]。據(jù)文獻報道,米脂小米含有更多的蛋白質(zhì)和脂肪,含有8種人體必需的氨基酸,營養(yǎng)比例更加合理[4-5]。

    多糖是廣泛存在于動植物當中的碳水化合物,多糖具有抑制腫瘤生長、調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老、抗菌抗病毒、保護肝臟等作用[6-10]。目前對小米的研究重點大多集中在小米淀粉、黃色素等方面[11-13],對小米中多糖的研究很少,因此,作者選取米脂小米中多糖為研究對象,對其提取工藝進行了優(yōu)化。

    常見的多糖提取方法有熱水提取法、有機溶劑提取法、超聲輔助提取法和微波輔助提取法等[14-15]。作者之前對傳統(tǒng)的熱水提取法進行了研究,該方法提取溫度為50 ℃,提取時間為4.3 h,攪拌速率為36 r/min,m(小米)∶V(提取液)(簡稱料液比)=1∶20 g/mL,平均提取率為1.046 7%,該提取方法耗時較長[16],因此,利用超聲輔助法對其進行改進研究。由于超聲具有空化作用,使得其中的成分更容易溶出,被廣泛應(yīng)用于提取研究。作者采用超聲輔助熱水提取法對米脂小米中的多糖進行了提取研究,進行了單因素實驗,在此基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法對提取條件進行了優(yōu)化,建立了該提取過程的數(shù)學(xué)模型,并得到了小米多糖提取的最優(yōu)工藝條件。

    1 實驗部分

    1.1 原料、試劑與儀器

    米脂小米:產(chǎn)地陜西省米脂縣。

    葡萄糖標準品:上海金穗生物科技有限公司;濃硫酸:四川西隴科學(xué)有限公司;無水乙醇:天津市致遠化學(xué)試劑有限公司;苯酚:天津市瑞金特化學(xué)品有限公司;以上試劑均為分析純。

    電子天平:FA-1004,上海精科天平廠;紫外分光光度計:UV-2450,日本島津公司;超聲波發(fā)生器:SN-2000直插式,廣州欣諾科超聲設(shè)備公司;數(shù)顯超級恒溫水?。篐H-501,鄭州科豐儀器設(shè)備有限公司;電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱:DHG-9140A,上海一恒科學(xué)儀器有限公司。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 葡萄糖標準曲線

    分別取ρ(葡萄糖)=0、20、30、40、50、60、70、80 μg/mL的標準品溶液2 mL,各加入w(苯酚)=5%溶液1 mL,然后立即加入5 mL濃硫酸,混均,靜置30 min,冷卻后在490 nm處測各溶液的吸光度值[17]。以ρ(葡萄糖)為橫坐標,吸光度值為縱坐標,繪制標準曲線。

    1.2.2 小米多糖提取方法

    小米預(yù)處理:將小米與w(乙醇)=95%溶液混合后置于三口燒瓶中,攪拌,置于50 ℃恒溫水浴中加熱3 h進行脫脂,取出小米后晾干備用。

    準確稱取10 g脫脂小米置于燒杯中,加入一定量蒸餾水,將超聲波發(fā)生器插入燒杯中,設(shè)定超聲功率,然后在恒溫水浴下攪拌,提取一定時間后,取上清液,加入3倍w(乙醇)=95%溶液進行醇沉,轉(zhuǎn)速為4 500 r/min,離心30 min,取沉淀。溶解沉淀并定容,用苯酚硫酸法檢測多糖的含量,并計算多糖提取率[18]。

    1.2.3 多糖提取率的計算

    多糖提取率的計算公式見式(1)。

    (1)

    式中:η為小米多糖的提取率,%;ρ為檢測液多糖質(zhì)量濃度,mg/mL;V為粗多糖溶解定容后的總體積,L;m為原料小米的質(zhì)量,g;N為稀釋倍數(shù)。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 葡萄糖標準曲線

    繪制出葡萄糖標準曲線見圖1。圖中的橫坐標為ρ(葡萄糖),縱坐標為吸光度值,得出標準曲線的線性回歸方程為y=0.007x+0.006,線性相關(guān)系數(shù)R2=0.999,說明該標準曲線線性關(guān)系良好。

    ρ(葡萄糖)/(μg·mL-1)圖1 葡萄糖標準曲線

    2.2 單因素實驗結(jié)果

    采用單因素實驗測定了超聲時間、超聲功率、提取溫度和料液比4種因素對米脂小米多糖超聲提取率的影響,結(jié)果見圖2。

    超聲時間/mina 超聲時間

    超聲功率/Wb 超聲功率

    提取溫度/℃c 提取溫度

    料液比/(g·mL-1)d 料液比圖2 不同條件對小米多糖提取率的影響

    由圖2a可知,隨著超聲時間的增加提取率在增加,在50min后趨于穩(wěn)定,因此選擇超聲時間為50min;由圖2b可知,多糖提取率在超聲功率為70W時達到最大,繼續(xù)增加功率多糖提取率反而減小,說明超聲功率過大可能會破壞多糖的結(jié)構(gòu),因此選擇超聲功率為70W;由圖2c可知,小米多糖的提取最佳溫度為50 ℃,因此,選擇溫度為50 ℃;由圖2d可知,隨著提取液的增加多糖提取率在增加,在料液比為1∶20g/mL后趨于穩(wěn)定,提取率不再上升,因此選擇料液比為1∶20g/mL。在上述條件下,陜北小米多糖的提取率可達0.923%。

    2.3 響應(yīng)面優(yōu)化小米多糖提取工藝

    2.3.1 響應(yīng)面實驗設(shè)計及結(jié)果

    根據(jù)單因素實驗的結(jié)果采用響應(yīng)面分析軟件中的Box-Behnken設(shè)計實驗,將對影響小米多糖提取的4個因素超聲時間(A)、超聲功率(B)、提取溫度(C)和料液比(D)進行四因素三水平的響應(yīng)面優(yōu)化實驗設(shè)計,設(shè)計了29組實驗。實驗的因素和水平設(shè)計見表1,實驗結(jié)果見表2。

    表1 實驗因素與水平設(shè)計編碼表

    表2 響應(yīng)面實驗設(shè)計與結(jié)果

    表2中前24組是析因?qū)嶒?,?組為中心實驗,中心實驗的作用是估計實驗誤差。

    2.3.2 模型的建立及方差分析

    該提取模型的建立及方差分析見表3。

    表3 回歸模型的建立與方差分析

    續(xù)表

    2.3.3 響應(yīng)面分析

    響應(yīng)面法可以得出各因素間交互作用對小米多糖提取率的影響,從3D立面圖中曲面的陡峭程度來判斷其對提取率的影響,圖中曲面越陡峭(顏色越深)的一方對提取率的影響越大,具體見圖3。

    a 超聲時間與超聲功率的交互作用

    b 超聲時間與提取溫度的交互作用

    c 超聲時間與料液比的交互作用

    d 超聲功率與提取溫度的交互作用

    e 超聲功率與料液比的交互作用

    f 提取溫度與料液比的交互作用圖3 各因素間交互作用對小米多糖提取率影響的3D立面圖

    由圖3可知,圖3a中2個因素對應(yīng)的曲面陡峭程度相差不大,說明超聲時間和超聲功率對多糖提取率的影響程度幾乎接近;由圖3b可知提取溫度的影響略大于超聲時間的影響;圖3c中料液比對應(yīng)的一面明顯比超聲時間所對應(yīng)的面更陡峭,因此,料液比的影響更大;由圖3d可知提取溫度的影響略大于超聲功率的影響;圖3e中料液比對提取率的影響要明顯大于超聲功率;圖3f中料液比的影響也明顯大于提取溫度對提取率的影響。綜合可得,料液比對米脂小米多糖提取率的影響最大,然后是提取溫度和超聲時間,超聲功率對提取率的影響最小。

    響應(yīng)面優(yōu)化法建立的該提取過程的數(shù)學(xué)模型及回歸方程可以預(yù)測出該提取過程的最佳提取條件為超聲時間53.21min、超聲功率72.82W、提取溫度48.79 ℃、料液比1∶22.16g/mL,預(yù)測提取率為0.993%。為了便于操作,將提取操作條件圓整為提取時間53min、超聲功率73W、提取溫度49 ℃、料液比1∶22g/mL。最后進行了3次平行驗證實驗,得出平均提取率為0.985%,與預(yù)測值基本接近。因此,可以用該模型來優(yōu)化該提取過程的工藝條件。

    3 結(jié) 論

    對米脂小米多糖進行了提取研究,采用超聲輔助提取法,用苯酚硫酸法對多糖進行檢測,采用單因素實驗和響應(yīng)面優(yōu)化實驗相結(jié)合的方法對提取條件進行了優(yōu)化,建立了米脂小米多糖超聲提取過程的數(shù)學(xué)模型,得到的優(yōu)化工藝路線為提取時間53min,超聲功率73W,提取溫度49 ℃,料液比1∶22g/mL,米脂小米多糖的平均提取率為0.985%,與該提取模型的預(yù)測值基本一致,說明用響應(yīng)面優(yōu)化的方法可以較好完成該提取條件的優(yōu)化,同時與傳統(tǒng)的提取方法比較,大大縮短了小米多糖的提取時間,而提取率基本相當。綜上所述,小米多糖的超聲提取研究可以為其后續(xù)研究提供一定的理論基礎(chǔ)。

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