鈍頂螺旋藻多糖的提取工藝及其生物活性

張亞旗，盧珍華，黃世英，李桂玲，2，李 健，2

(1.集美大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，福建 廈門 361021；2.福建省海洋功能食品工程技術(shù)研究中心，福建 廈門 361021)

0 引言

螺旋藻是藍(lán)藻綱顫藻科的一類低等生物，由單細(xì)胞或多細(xì)胞組成的絲狀體，體長200～500 μm，寬5～10 μm，圓柱形，呈疏松或緊密的有規(guī)則的螺旋形彎曲，形如鐘表發(fā)條，故而得名[1-2]。螺旋藻主要分為鈍頂螺旋藻(Spirulinaplatensis)和極大螺旋藻(Spirulinamaxima)，其中鈍頂螺旋藻富含蛋白質(zhì)、多糖、葉綠素、β-胡蘿卜素、γ-亞麻酸、維生素、微量元素、藻藍(lán)蛋白等[3-5]。螺旋藻營養(yǎng)均衡，具有脂肪和膽固醇含量低、蛋白質(zhì)含量高的特點，在人類保健食品領(lǐng)域逐漸扮演重要的角色。聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織認(rèn)為螺旋藻是21世紀(jì)人類最佳食物和最佳營養(yǎng)品[6-7]。

植物多糖是一種重要的天然活性成分，廣泛存在于自然界的植物體中，是由許多α-糖苷鍵或β-糖苷鍵連接所形成的化合物[8]。其中鈍頂螺旋藻多糖具有多種特殊的生理作用，能夠有效起到抗單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-I)活性的作用[9]、對角膜新生血管的抑制作用[10]，對免疫刺激活性增加[11]、降血脂[12]、調(diào)節(jié)腸道微生物[13]以及肝素輔助因子Ⅱ介導(dǎo)的抗凝活性等有重要作用[14]。鈍頂螺旋藻多糖提取的常用方法有熱水浸提法、堿液浸提法、微波輔助提取法、超聲波輔助提取法、反復(fù)凍融破壁提取法和酶輔助提取法等[15-19]。Chaiklahan等[20]運(yùn)用熱水浸提法提取螺旋藻多糖，通過響應(yīng)面優(yōu)化最終多糖得率為8.3%。由于鈍頂螺旋藻中蛋白質(zhì)含量高達(dá)60%～70%，蛋白質(zhì)脫除就成了鈍頂螺旋藻多糖制備過程中一個非常關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。目前常用的除蛋白質(zhì)方法主要有蛋白酶水解法、Sevag法、三氯乙酸法、加熱濃縮法等[21]。其中Sevag法是去除蛋白質(zhì)的經(jīng)典方法，它具有操作簡便、試劑廉價、去除游離蛋白質(zhì)效果好等優(yōu)點[22]。由于Sevag法使用有毒有害試劑，擴(kuò)大生產(chǎn)易造成環(huán)境污染，從工業(yè)化生產(chǎn)的角度考慮，需要探究一種更加環(huán)保和低成本的生產(chǎn)工藝。

本文采用熱堿浸提法提取鈍頂螺旋藻粗多糖，等電點沉淀與離子交換樹脂分離技術(shù)聯(lián)用工藝進(jìn)行脫蛋白，并與Sevag法脫蛋白進(jìn)行對比，研究了不同濃度下鈍頂螺旋藻多糖的DPPH自由基的清除能力及其對正常細(xì)胞LO2、腫瘤細(xì)胞HepG2增殖的抑制作用。通過單因素實驗和正交設(shè)計試驗優(yōu)化鈍頂螺旋藻多糖的最佳提取工藝，為鈍頂螺旋藻多糖的提取和工業(yè)化生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)，同時也為鈍頂螺旋藻多糖的生物活性研究提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鈍頂螺旋藻干粉，購于福建神六保健品有限公司。

苯酚、濃硫酸、葡萄糖、NaOH、乙醇(體積分?jǐn)?shù)95%)、鹽酸、正丁醇、二甲基亞砜(DMSO)、氯仿、二水檸檬酸鈉、檸檬酸、十二水磷酸氫二鈉、二水合磷酸二氫鈉等均為分析純，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；1 mL Uni SP/CM/Q/DEAE 50xs(預(yù)裝柱)，蘇州納微科技有限公司；硅藻土(DP20)，青島盛泰硅業(yè)有限公司；碧云天蛋白質(zhì)測定試劑盒；四甲基噻唑藍(lán)(MTT)，南京奧多福尼生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-8000A型紫外可見分光光度計，上海元析儀器有限公司;C-MAG HS 10數(shù)顯型加熱磁力攪拌器，德國IKA集團(tuán)；GE AKTA Pure蛋白純化儀，GE Healthcare，瑞典；冰箱，青島海爾股份有限公司；PH211酸度計，HANNA instruments；超濾平板膜小試設(shè)備，福建福美科技有限公司；布氏漏斗，化通天下實驗儀器耗材；抽濾瓶，化通天下實驗儀器耗材；5810R高速冷凍離心機(jī)，德國艾本德股份有限公司；Synergy H1MF多功能酶標(biāo)儀，美國伯騰儀器有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗流程

等電點沉淀與離子交換樹脂分離技術(shù)聯(lián)用工藝：螺旋藻藻懸液經(jīng)過熱堿浸提，在pH=4條件下進(jìn)行等電點沉淀，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%硅藻土抽濾，收集濾液進(jìn)行陽離子交換和色譜層析，得到螺旋藻多糖。

Sevag法脫蛋白：螺旋藻藻懸液經(jīng)過熱堿浸提，10 000 r/min下離心10 min，取上清液進(jìn)行乙醇沉淀、靜置，再10 000 r/min下離心10 min，收集沉淀進(jìn)行Sevag法脫蛋白，得到螺旋藻多糖。

1.3.2 熱堿浸提螺旋藻多糖單因素試驗

研究料液比、浸提溫度、浸提時間及堿液質(zhì)量分?jǐn)?shù)對多糖提取率的影響。稱取2.00 g樣品5份，分別溶解于不同量的蒸餾水中，使料液比(m∶V)分別為1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50；浸提溫度分別取50，60，70，80，90 ℃；浸提時間1～5 h；NaOH質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%，0.75%，1.0%，1.25%，1.5%，進(jìn)行水浴浸提。冷卻至常溫，10 000 r/min離心10 min收集上清液，采用1∶1鹽酸溶液調(diào)節(jié)上清液pH=7，測定多糖含量，并計算多糖得率。初步確定各單因素的最佳水平范圍。每個處理做3次平行實驗。

1.3.3 螺旋藻多糖提取工藝優(yōu)化

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，設(shè)計正交試驗的因素與水平表，如表1所示。

表1 正交試驗因素與水平表

1.3.4 脫蛋白方法

脫蛋白方法采用等電點沉淀與離子交換樹脂分離技術(shù)聯(lián)用工藝法和Sevag法。

等電點沉淀與離子交換樹脂分離技術(shù)聯(lián)用工藝法：在螺旋藻堿提液中加入6 mol/L的鹽酸溶液，調(diào)節(jié)堿提液pH=4，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的硅藻土，攪拌均勻，使用布氏漏斗進(jìn)行抽濾，將濾液脫鹽。將脫鹽后的濾液使用離子交換色譜進(jìn)行脫蛋白，陽離子交換色譜柱使用10 mmol/L pH=4的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液進(jìn)行洗脫，陰離子交換色譜柱使用20 mmol/L pH=7.8的磷酸鹽緩沖溶液進(jìn)行洗脫，分別收集透過液，測定多糖及蛋白質(zhì)濃度。

Sevag法：氯仿與正丁醇混合體積比為5∶1，配制成Sevag試劑。樣品溶液與Sevag試劑體積比為4∶1，然后用電動攪拌器以200 r/min的速度攪拌5 min，于分液漏斗中靜置30 min。棄去下層液，并移取一定量上層液測定其蛋白質(zhì)和多糖濃度，重復(fù)上述操作。

1.3.5 螺旋藻多糖對DPPH自由基的清除能力

用DPPH法測定螺旋藻的抗氧化活性[23-24]。準(zhǔn)確稱取DPPH 4 mg溶解于體積分?jǐn)?shù)50%乙醇溶液中，配制成0.1 mmol/L的DPPH工作液。將不同濃度的多糖樣品溶液100 μL分別加入100 μL的DPPH工作液，混合均勻后避光反應(yīng)30 min，VC作為對照，在517 nm處測定吸光度值(A1)，其中空白對照以體積分?jǐn)?shù)50%乙醇代替樣品，測定其吸光度值(A0)；樣品對照以體積分?jǐn)?shù)50%乙醇代替DPPH溶液，測定其吸光度值(A2)。DPPH自由基清除率計算公式如下：清除率/%=[1-(A1-A2)/A0]×100。

1.3.6 細(xì)胞毒性實驗

通過MTT法測定LO2和HepG2細(xì)胞的活力[25]。將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞以每孔100 μL(1×104個)接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，置于體積分?jǐn)?shù)5% CO2、37 ℃ CO2細(xì)胞恒溫培養(yǎng)箱中孵育12 h后，吸棄上清液，加入含有不同濃度多糖樣品的DMEM高糖培養(yǎng)基，處理24 h，吸棄上清液，加入含15 μL 5 g/L MTT溶液的DMEM高糖培養(yǎng)基115 μL，培養(yǎng)4 h。待培養(yǎng)結(jié)束后，加入150 μL DMSO，振板10 min，在490 nm下測定其吸光度值。

1.4 分析方法

1.4.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

采用苯酚-硫酸法測定多糖含量。稱取0.1 g 105 ℃下干燥恒重的葡萄糖定容至100 mL容量瓶中，得到標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液(1 g/L)，搖勻備用。將配制好的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液分別稀釋配制成0，20，40，60，80，100 mg/L 的溶液,精確移取以上不同濃度的葡萄糖溶液1.0 mL,加入1 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)6%苯酚溶液,再加入5 mL的濃硫酸,混勻，靜置30 min后在490 nm 處測定其吸光度值,以吸光度值為縱坐標(biāo)、葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為：y=0.009 47x-0.007 47，R2=0.999 7。

1.4.2 多糖含量的測定

將螺旋藻多糖溶液適當(dāng)稀釋后，從中吸取1 mL，加入1 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)6%苯酚溶液和5 mL濃硫酸，混勻，靜置30 min。在490 nm處測定吸光度值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程得到對應(yīng)的葡萄糖濃度，按下列公式計算樣品中多糖得率：多糖得率/%=(c×V×n×100)/m，式中：c為樣品溶液中葡萄糖質(zhì)量濃度(mg/L)；n為樣品溶液稀釋倍數(shù)；V為測定溶液體積(mL)；m為螺旋藻藻粉質(zhì)量(g)。

1.4.3 螺旋藻多糖脫蛋白率和多糖損失率的測定

采用碧云天蛋白質(zhì)測定試劑盒測定蛋白質(zhì)含量，并以此計算不同脫蛋白方法對多糖溶液蛋白質(zhì)脫除率的影響。

蛋白質(zhì)脫除率公式如下：蛋白質(zhì)脫除率/%=(N1-N2)×100/N1，式中：N1為去除蛋白質(zhì)前原液中蛋白質(zhì)的含量；N2為去除蛋白質(zhì)后原液中蛋白質(zhì)的含量。

多糖保留率的計算公式為：多糖保留率/%=(M2/M1)×100，式中，M1為去除蛋白質(zhì)前原液中多糖的含量；M2為去除蛋白質(zhì)后原液中多糖的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗

不同溫度條件下螺旋藻多糖浸出效果見圖1a?？梢钥闯?，在50～90 ℃溫度范圍內(nèi)，50～80 ℃，螺旋藻多糖得率隨溫度的升高而不斷增大，且增幅明顯，當(dāng)溫度升高至90 ℃時，多糖得率增大幅度明顯減小。溫度升高，能夠增加反應(yīng)速率，使分子運(yùn)動加快，有利于多糖從細(xì)胞中溶出，并且增加了多糖在水中的溶解度[26]。

堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)對螺旋藻多糖浸出效果的影響見圖1b?？梢钥闯?，在堿性環(huán)境下，堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)對多糖浸提的有利因素主要體現(xiàn)細(xì)胞壁被分解破壞，有利于胞內(nèi)多糖及細(xì)胞壁中的多糖溶出[27]。由圖1b可以看出，粗多糖得率隨NaOH濃度升高而呈增加趨勢。而堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)過高對多糖的浸提也會產(chǎn)生一些不利的影響，易使蛋白質(zhì)變性產(chǎn)生絮狀沉淀，包裹部分多糖，造成多糖的損失[28]。由圖1b可見，當(dāng)NaOH質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.25%時，多糖得率達(dá)到最大值，之后多糖得率開始下降，說明過高的堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)確實不利于多糖的浸提。

提取時間對螺旋藻多糖浸出效果的影響見圖1c。可以看出，多糖得率隨著提取時間的增加而增大，這說明反應(yīng)時間過短時，堿法提取不充分，因而得率隨著時間的延長而提高，提取時間越長多糖得率越高[29]。在提取時間為3 h時，粗多糖得率變化最小，曲線趨于平穩(wěn)，甚至稍稍出現(xiàn)下降的情況，表明反應(yīng)已經(jīng)基本達(dá)到平衡狀態(tài)。隨著反應(yīng)時間的增加，蛋白質(zhì)變性和多糖水解也在不斷進(jìn)行，不利于多糖的提取。

料液比對螺旋藻多糖浸出效果的影響見圖1d?？梢钥闯?，不同的料液比會顯著影響螺旋藻多糖的得率[30]。當(dāng)料液比超過1∶20時，隨著溶劑用量的增加，多糖得率增長幅度減緩，表明此時螺旋藻已基本浸提完全。從整個提取工藝來看，增加提取劑的用量可降低浸出液體系中蛋白質(zhì)及多糖的濃度，有利于減少后續(xù)過濾過程中因浸出液流失及脫除蛋白過程中蛋白質(zhì)沉淀對多糖的吸附造成的多糖損失[31]。但是用水量過多，會導(dǎo)致后續(xù)工藝的能耗負(fù)擔(dān)及用水成本的增加。

2.2 提取工藝正交試驗結(jié)果

由表2可知，對螺旋藻多糖提取影響因素大小分別為：提取溫度>堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)>料液比>浸提時間。得到最佳組合為 A2B2C2D2，即：提取時間為3 h，料液比(m∶V)為1∶20，提取溫度為80 ℃，堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.25%。在此條件下進(jìn)行3次驗證實驗，多糖提取率達(dá)到8.78%。

表2 正交試驗設(shè)計及結(jié)果

由表3可知，校正模型具有顯著性，其中A、B因素對提取率無顯著影響，表明提取時間和料液比2個因素對螺旋藻多糖的提取基本無影響，提取溫度、堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)2個因素對螺旋藻多糖的提取影響極顯著(P<0.01)。因此，提取溫度和堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)2個影響因素可作為提取過程中影響多糖提取率的首要考慮因素，且該提取方法可用于螺旋藻多糖的提取。

表3 正交試驗的方差分析

李會端等[32]采用單因素試驗分析螺旋藻多糖的堿提取最佳條件，發(fā)現(xiàn)堿提取工藝條件為：NaOH濃度為0.4 mol/L，料液比為1∶25(g∶mL)，提取時間為2 h，多糖提取率為4.524%。郝志欣等[33]采用單因素試驗和正交試驗對熱堿浸提法提取螺旋藻多糖工藝進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳提取工藝為：pH=11，溫度為80 ℃，固液比為1∶30，浸提2次，浸提時間為1 h，多糖得率為4.213 %。這些研究報道與本研究相比，多糖得率均低于本研究的。

2.3 螺旋藻多糖脫蛋白研究

2.3.1 等電點沉淀與離子交換樹脂分離技術(shù)聯(lián)用工藝法脫蛋白

由圖2a可知，隨著螺旋藻多糖溶液pH值的上升，蛋白質(zhì)的脫除率不斷下降，多糖的保留率升高，說明螺旋藻粗多糖溶液中的雜蛋白的等電點主要在2～4。在pH=2時，蛋白質(zhì)脫除率達(dá)到最高，但此時的多糖保留率低。推測可能是由兩個原因造成：其一，由于酸性環(huán)境中部分多糖被水解，多糖損失過多；其二，由于蛋白質(zhì)沉降時包裹了部分多糖一并沉降下來，導(dǎo)致多糖損失過多。因此，根據(jù)圖2a，選擇pH=4進(jìn)行等電點沉淀最為合適，和陳昕等[34]研究結(jié)果一致，此時多糖保留率為90.75%，蛋白質(zhì)脫除率為48.24%。將經(jīng)等電點沉淀后的粗多糖溶液使用不同的色譜柱進(jìn)行脫蛋白處理。

由圖2b可知，4種色譜柱對多糖的吸附能力為Q>DEAE>CM>SP，對蛋白質(zhì)的吸附能力為SP>CM>DEAE>Q。推測，經(jīng)過等電點沉淀后，溶液中的大部分蛋白質(zhì)帶正電荷，流經(jīng)樹脂時，帶正電荷的蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)被交換到樹脂上，大部分螺旋藻多糖由于分子質(zhì)量較大，所帶電荷較弱無法交換到樹脂內(nèi)部，當(dāng)粗多糖流過樹脂時，多糖因不帶電較快流出，大部分蛋白質(zhì)被吸附在色譜柱上，只有少部分流出。陰離子交換樹脂對螺旋藻多糖有部分吸附，可能是因為螺旋藻多糖中帶有硫酸根離子的多糖被陰離子交換樹脂吸附[34]。綜合考慮，選擇強(qiáng)陽離子色譜柱層析作為進(jìn)一步純化螺旋藻多糖的方式。通過等電點沉淀與離子交換樹脂分離技術(shù)聯(lián)用工藝法脫蛋白得到多糖的保留率為86.62%，蛋白質(zhì)脫除率為89.54%。經(jīng)實驗驗證，等電點沉淀與離子交換樹脂分離技術(shù)聯(lián)用工藝法脫蛋白最終多糖得率為7.55%。

2.3.2 Sevag法脫蛋白

由于螺旋藻中蛋白質(zhì)含量較高，Sevag法脫蛋白過程中需要反復(fù)處理。由圖3可以看出，隨著脫蛋白次數(shù)的增加，蛋白質(zhì)脫除率越來越高，但是多糖保留率越來越低。Sevag法主要對游離蛋白質(zhì)脫除效果較為明顯，但對于多糖結(jié)合很牢固或被多糖包裹的蛋白質(zhì)的效果較差。所以可能是因為少量的蛋白質(zhì)與多糖結(jié)合緊密，以糖蛋白的形式存在不易被去除。在反復(fù)處理的過程中，每次去除蛋白質(zhì)變性的膠狀物時，不可避免溶有多糖，與蛋白質(zhì)結(jié)合的蛋白聚糖和糖蛋白也會在處理時會沉淀下來，造成多糖損失[35]。因此，一般脫蛋白次數(shù)不宜過多。由圖3可以看出，脫蛋白次數(shù)為3次最為合理，此時蛋白質(zhì)脫除率為48.40%，多糖保留率為72.03%。經(jīng)實驗驗證，Sevag法脫蛋白最終的多糖得率為6.33%。

2.4 螺旋藻多糖對DPPH的清除能力

在DPPH測定中，抗氧化劑是單電子與DPPH自由基配對，使其在517 nm處的強(qiáng)吸收逐漸消失，其褪色程度與接受的電子數(shù)量相關(guān)[36]。使用DPPH法測定螺旋藻多糖在0.4～2.0 g/L質(zhì)量濃度下的抗氧化能力，結(jié)果如圖4所示?？梢?，螺旋藻多糖具有一定的抗氧化能力，并且螺旋藻多糖的DPPH自由基清除能力與濃度呈正相關(guān)，隨著濃度的不斷提高，DPPH自由基清除能力從27.68%提升至59.09%。丁小梅等[37]在pH=8、溫度為90 ℃、料液比為1∶40、提取時間為2 h的條件下提取出的螺旋藻多糖具有DPPH自由基清除能力，其IC50為0.463 g/L。周志剛等[38]采用熱水浸提提取螺旋藻多糖，發(fā)現(xiàn)其無顯著的抗氧化能力?？梢?，不同提取方法和提取條件所得到的螺旋藻多糖，其抗氧化能力與作用也不同。因此，可推測螺旋藻多糖的抗氧化能力與多糖結(jié)構(gòu)相關(guān)，需進(jìn)一步研究。

2.5 螺旋藻多糖細(xì)胞毒性實驗測定結(jié)果

MTT是一種可以被活細(xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶還原的染料物質(zhì)，可以形成水不溶性藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜而沉淀在細(xì)胞中，死細(xì)胞無法將其還原。二甲基亞砜(DMSO)可以溶解細(xì)胞中的藍(lán)紫色甲臜，利用酶標(biāo)儀在490 nm處測定其吸光度值，可以間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)內(nèi)，MTT結(jié)晶甲臜形成的量與活細(xì)胞數(shù)成正比，從而反映活細(xì)胞的增殖情況[39]。通過MTT法分別檢測了螺旋藻多糖對正常的肝細(xì)胞LO2和肝癌細(xì)胞HepG2增殖能力的影響，結(jié)果如圖5所示。圖5a為螺旋藻多糖對正常的肝細(xì)胞LO2增殖能力的影響，可見，在100～2 000 mg/L范圍內(nèi)螺旋藻多糖對LO2細(xì)胞的增殖能力無明顯影響。圖5b為螺旋藻多糖對肝癌細(xì)胞HepG2增殖能力的影響，可見，螺旋藻多糖在10～100 mg/L 范圍內(nèi)對HepG2細(xì)胞增殖能力無影響，但隨著濃度的不斷升高，500,1 000和2 000 mg/L 的螺旋藻多糖對HepG2細(xì)胞有明顯的毒性作用，細(xì)胞存活率分別下降至78.97%，74.96%和73.08%，細(xì)胞增殖能力顯著下降(P<0.05),具有統(tǒng)計學(xué)意義。朱勁華等[40]研究了螺旋藻多糖對回腸癌HCT-8、神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251、宮頸癌HeLa、肝癌SMMC7721和肺癌A549細(xì)胞增殖能力的影響，同時與人的正常肝細(xì)胞LO2進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)螺旋藻多糖對癌癥細(xì)胞增殖能力有顯著的抑制作用，但對正常肝細(xì)胞LO2的增殖能力影響較弱，并且存在濃度劑量效應(yīng)，高濃度抑制作用強(qiáng)，與本研究結(jié)論一致。

3 結(jié)論

本研究通過單因素及正交試驗，優(yōu)化了熱堿浸提法提取螺旋藻粗多糖。設(shè)計了一種等電點沉淀與離子交換樹脂分離技術(shù)聯(lián)用脫蛋白的新工藝，并與Sevag法脫蛋白作了對比。結(jié)果表明，熱堿浸提的最佳工藝條件：料液比(m∶V)為1∶20，浸提溫度為80 ℃，浸提時間為3 h，堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.25%，在此條件下，使用等電點沉淀與離子交換樹脂分離技術(shù)聯(lián)用工藝法脫蛋白多糖總提取率達(dá)到7.55%，蛋白質(zhì)脫除率達(dá)到89.54%。相對于Sevag法脫蛋白，多糖得率提高了17.3%，蛋白質(zhì)脫除率提高了45%。此條件下獲得的螺旋藻多糖具有一定的抗氧化能力，并且對正常細(xì)胞LO2無毒性，對肝癌細(xì)胞HepG2具有一定的抑制增殖作用。今后擬對螺旋藻多糖進(jìn)一步分離純化，并對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定與解析，通過小鼠實驗對抗癌作用進(jìn)行深入探討。