全自動(dòng)固相萃取氣相色譜-質(zhì)譜法測定蔬菜中五氯硝基苯和百菌清殘留量

王鐘 趙志強(qiáng) 徐文杰 何漪 王敏

摘 要：目的：建立全自動(dòng)固相萃取氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（Auto-SPE GC-MS）同時(shí)測定蔬菜中五氯硝基苯和百菌清殘留量的分析方法。方法：蔬菜樣品經(jīng)乙腈溶劑提取，經(jīng)過全自動(dòng)固相萃取儀凈化后，采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行檢測。結(jié)果：在0.10～2.00 μg/mL添加水平，五氯硝基苯的平均回收率在82.6%～91.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.0%～9.6%（n=10）。百菌清的平均回收率在83.0%～95.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為6.5%～11.0%（n=10）。以信噪比RSN=3計(jì)算兩種農(nóng)藥殘留的最低檢出限，五氯硝基苯的最低檢出限為0.003 mg/kg，百菌清的最低檢出限為0.001 mg/kg。結(jié)論：該方法自動(dòng)化程度高，結(jié)果準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性好，檢出限較低，可滿足蔬菜中五氯硝基苯和百菌清殘留量的同時(shí)檢測要求。

關(guān)鍵詞：蔬菜;五氯硝基苯;百菌清;氣相色譜-質(zhì)譜法;全自動(dòng)固相萃取

Determination of Quintozene and Chlorothalonil Residues in Vegetables by Gas Chromatography/Mass Spectrometry with Automated Solid Phase Extraction

WANG Zhong1，2， ZHAO Zhiqiang1，2， XU Wenjie1，2， HE Yi1，2， WANG Min1，2

（1.ZIBO Center for Disease Control and Prevention， Zibo 255026， China; 2.Zibo Key Laboratory of Environmental Organic Pollution and Population Health Monitoring and Analysis， Zibo 255026， China）

Abstract： Objective： A multiresidue analytical method was developed for determination of quintozene and chlorothalonil residues in Vegetables by gas chromatography-mass spectrometry with automated solid phase extraction（Auto SPE GC-MS）.Method： Samples were extracted by acetonitrile and cleaned by automated solid phase extraction，then tested with internal standard method.Result： The recovery of quintozene ranged from 82.6% to 91.6% at spiked level of 0.10～2.00 μg/mL，the relative standard deviation was varied from 7.0% to 9.6%（n=

10）.The LOD of quintozene? was 0.003 mg/kg. The recovery of chlorothalonil ranged from 83.0% to 95.1% at spiked level of 0.10～2.00 μg/mL，the relative standard deviation was varied from 6.5% to 11.0%（n=10）.The LOD of chlorothalonil was 0.001 mg/kg. Conclusion： The method is accurate，reproducible，with a relatively low detection limit. It is effective to determinate quintozene and chlorothalonil residues in Vegetables.

Keywords： vegetables; quintozene; chlorothalonil; gas chromatography-mass spectrometry; automated solid phase extraction

蔬菜安全是食品安全中十分重要的方面之一，蔬菜在食品中占有十分重要的地位，蔬菜中的農(nóng)藥殘留量常作為評(píng)價(jià)食品安全性的主要內(nèi)容之一[1-2]。為防止蔬菜在生長過程中遭受病蟲害，防止蔬菜在儲(chǔ)存和運(yùn)輸過程中變質(zhì)，噴灑農(nóng)藥和殺菌劑成為有效的措施之一[3]。但是，蔬菜中殘留農(nóng)藥殺菌劑的毒性嚴(yán)重危害人們的身體健康[4]。為確保蔬菜的質(zhì)量安全，加強(qiáng)對(duì)蔬菜農(nóng)藥殘留檢測方法及農(nóng)藥污染控制措施的研究就顯得尤為重要。農(nóng)藥五氯硝基苯具有化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、不易揮發(fā)、不易氧化分解等特點(diǎn)，對(duì)多種蔬菜的苗期病害有較好的防治效果[5]。百菌清是一種高效、低毒的廣譜殺菌劑，已被廣泛應(yīng)用于蔬菜病害的防治。對(duì)于文獻(xiàn)報(bào)道的五氯硝基苯農(nóng)藥殘留量和百菌清殘留量的檢測方法有高效液相色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法[6-9]。全自動(dòng)固相萃取氣相色譜-質(zhì)譜法測定蔬菜中五氯硝基苯和百菌清殘留量的檢測方法鮮有報(bào)道[10-11]。本文研究了全自動(dòng)固相萃取儀凈化，用氣相色譜質(zhì)譜儀同時(shí)測定蔬菜中的五氯硝基苯和百菌清農(nóng)藥殘留量的檢測方法，取得了較好的結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

氣相色譜-質(zhì)譜儀（GC-MS QP 2010plus）;全自動(dòng)固相萃取儀（Reeko Fotector Plus，48位）;氮?dú)獯蹈蓛x（OA-SYS/美國Organomation）;渦旋混勻器（SZ-1型，江蘇金壇市金城國勝實(shí)驗(yàn)儀器廠）;分析天平（賽多利斯sartorius CP225D）：感量0.000 01 g;高速組織搗碎機(jī)（Retsch GM200）;離心機(jī)（Thermo ST 16R）：轉(zhuǎn)速5 000 r/min;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（STEROGLASS STRIKE 300）;乙腈（默克，色譜純）;丙酮（默克，色譜純）;甲苯（默克，色譜純）;正己烷（默克，色譜純）;Florisil固相萃取柱（安捷倫公司;1 g，6 mL）;氯化鈉（國藥集團(tuán)，優(yōu)級(jí)純）;無水硫酸鈉（國藥集團(tuán)，分析純）：經(jīng)550 ℃烘烤4 h，儲(chǔ)存于干燥器中，冷卻后備用;五氯硝基苯（GSB 05-1845-2016，100 μg/mL），定值單位：農(nóng)業(yè)部環(huán)保科研監(jiān)測所;百菌清（GSB05-2312-2016，100 μg/mL），定值單位：農(nóng)業(yè)部環(huán)保科研監(jiān)測所。內(nèi)標(biāo)溶液配制：稱取美國AccuStandard 環(huán)氧七氯純品2.5 mg，用甲苯溶解并定容至100 mL，搖勻，濃度為25 mg/L。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品的制備與保存

取蔬菜（以大白菜為例）樣品1 kg左右，取可食部分用勻漿儀充分粉碎。所取樣品平均分為2份，1份供測定，另1份放置于-20 ℃冰箱中保存，備用。

1.2.2 提取

稱取15.00 g蔬菜樣品（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入60 μL內(nèi)標(biāo)溶液，加入5.0 g氯化鈉，充分振搖混勻，加入30.0 mL乙腈，渦旋混勻1 min后置于超聲波儀中超聲20 min，加入8 g無水硫酸鈉，再渦旋混勻1 min，于4 000 r/min離心5 min，吸取上清液20.0 mL至25 mL離心管中，于35 ℃水浴中氮吹濃縮至近干，加入5.0 mL正己烷復(fù)溶，待凈化。

1.2.3 凈化和濃縮

取Florisil固相萃取柱（1 g，6 mL），依次用4 mL丙酮+正己烷（1∶9，v/v）溶液和4 mL正己烷活化后，吸取1.2.2提取液于固相萃取柱中并及時(shí)收集流出液，用6 mL丙酮+正己烷（1∶9，v/v）溶液洗脫，收集并合并洗脫液，于35 ℃水浴中氮吹濃縮至近干，用正己烷定容至1.00 mL，于GC-MS進(jìn)樣分析，全自動(dòng)固相萃取儀條件見表1。

1.2.4 氣相色譜-質(zhì)譜儀條件

色譜柱：石英毛細(xì)管質(zhì)譜柱（RTX-5 MS，30 m×0.25 mm，0.25 μm）;柱箱溫度控制程序：初始溫度40 ℃，保持1 min，以30 ℃/min速率升至130 ℃，保持0 min，再以5 ℃/min速率升至250 ℃，保持5 min;色譜儀載氣類型：高純氦氣（純度>99.999%），流速為1.9 mL/min;進(jìn)樣口溫度：280 ℃;進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，1.5 min后開啟分流閥;傳輸線溫度：280 ℃;進(jìn)樣量體積：1.0 μL;電子轟擊源（EI）能量：70 eV;離子源溫度：230 ℃;溶劑延遲：9.5 min;掃描模式：選擇性離子檢測（SIM）;定量方法：峰面積內(nèi)標(biāo)法定量，目標(biāo)物及內(nèi)標(biāo)保留時(shí)間及定性、定量離子見表2。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別吸取五氯硝基苯、百菌清標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液各0 μL、1.0 μL、2.0 μL、5.0 μL、10.0 μL和20.0 μL于6個(gè)1 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，每個(gè)容量瓶中加入40 μL內(nèi)標(biāo)溶液，配制成混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.6 測定

（1）定性測定。對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣液按上述規(guī)定的條件進(jìn)行測定時(shí)，如果樣液與混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的選擇離子圖中在相同保留時(shí)間有峰出現(xiàn)，則根據(jù)定性選擇離子的種類及其豐度比對(duì)其進(jìn)行陽性確證。

（2）定量測定。取凈化濃縮后的樣品溶液，按照上述儀器條件，進(jìn)樣分析。將目標(biāo)物和內(nèi)標(biāo)物響應(yīng)值的比值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算目標(biāo)物濃度。

2 結(jié)果與討論

2.1 優(yōu)化固相萃取條件

2.1.1 選擇合適的固相萃取凈化柱

在固相萃取法中，常用的吸附劑有反相C18、弗羅里硅土、石墨化碳黑、中性氧化鋁等。本文試驗(yàn)了弗羅里硅土、反相C18、中性氧化鋁和石墨化碳黑的加標(biāo)回收率。當(dāng)用弗羅里硅土作為固相萃取劑時(shí)，五氯硝基苯和百菌清的回收率均在90%左右;當(dāng)使用中性氧化鋁為固相萃取劑，兩者的回收率在70%左右，均高于反相C18和石墨化炭黑固相萃取柱;但中性氧化鋁的活性易受到樣品中含水量變化的影響，在相同條件下，其對(duì)色素的吸附能力比弗羅里硅土差，因此，最終選用弗羅里硅土為填充劑的固相萃取柱。

2.1.2 選擇固相萃取劑用量（固相萃取柱的規(guī)格）

在固相萃取法中，固相萃取柱填料的用量過少，凈化效果差;但如果填料用量過多，則需要用更大量的洗脫溶劑洗脫。試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)弗羅里硅土與蔬菜基質(zhì)的質(zhì)量比為1∶10時(shí)，方法回收率較高，且凈化效果較好。故本試驗(yàn)選擇弗羅里固相萃取劑的用量為1.0 g（實(shí)際凈化蔬菜基質(zhì)為10 g）。

2.1.3 選擇洗脫溶劑種類和洗脫液體積

大多數(shù)有機(jī)氯農(nóng)藥能較好的溶解在溶劑丙酮和正己烷中。根據(jù)此特點(diǎn)，本試驗(yàn)分別以正己烷、丙酮+正己烷（1∶9）、丙酮+正己烷（1+1）和丙酮+正己烷（1+9）為洗脫溶劑，各取10 mL用量來考察對(duì)五氯硝基苯和百菌清的洗脫回收率。試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)用正己烷作為洗脫溶劑時(shí)，對(duì)目標(biāo)物的洗脫強(qiáng)度較弱，回收率較低;當(dāng)用丙酮+正己烷（1+9）作為洗脫溶劑時(shí)，對(duì)目標(biāo)物的洗脫效果最好，五氯硝基苯和百菌清的添加回收率均在90%以上。在選定的丙酮+正己烷（1+9）作為洗脫溶劑的條件下，用20 mL洗脫溶劑考察了最佳用量，見圖1。由圖1可知，當(dāng)用10 mL洗脫液時(shí)可以把90%以上的目標(biāo)物洗脫下來。但當(dāng)隨著洗脫液用量的進(jìn)一步增大，加標(biāo)回收率變化不明顯。最后確定最佳洗脫劑為丙酮+正己烷（1+9），用量為10 mL。

2.2 方法的線性范圍與最低檢測濃度

試驗(yàn)表明，在所選五氯硝基苯、百菌清標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度在0.10～2.00 μg/mL，按照上述優(yōu)化好的儀器條件進(jìn)樣分析，色譜圖見圖2。以濃度為橫坐標(biāo)，以目標(biāo)物的響應(yīng)值（峰面積）與內(nèi)標(biāo)物響應(yīng)值（峰面積）的比值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，五氯硝基苯的方程為y=-0.006 8+0.28x，相關(guān)系數(shù)r大于0.999;百菌清的方程為y=-0.063+0.98x，相關(guān)系數(shù)r大于0.999。以3倍的基線噪音計(jì)算檢出限，當(dāng)取樣量為15.0 g時(shí)，方法的最低檢測濃度分別為五氯硝基苯0.003 mg/kg，百菌清0.001 mg/kg。

2.3 精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)

稱取蔬菜（以大白菜為例）4份，1份作為本底檢測，另3份分別加入濃度0.50 μg/mL、1.00 μg/mL、1.50 μg/mL的五氯硝基苯和百菌清混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0 mL進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)來表示方法的準(zhǔn)確度。同時(shí)對(duì)加標(biāo)樣品進(jìn)行（n=10）多次重復(fù)測定，用結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）來表示方法的精密度。試驗(yàn)結(jié)果顯示，五氯硝基苯加標(biāo)回收率為82.6%～91.6%，精密度為7.0%～9.6%;百菌清的加標(biāo)回收率為83.0%～95.1%，精密度為6.5%～11.0%。

3 結(jié)論

本文研究了全自動(dòng)固相萃取氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法同時(shí)測定蔬菜中五氯硝基苯、百菌清農(nóng)藥殘留量。該方法檢測全過程全自動(dòng)化程度高、精密度好、準(zhǔn)確度高、檢出限低，適用于蔬菜中五氯硝基苯、百菌清殘留量的測定要求。

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