蛇竭顆粒對神經(jīng)根型頸椎病大鼠模型血清一氧化氮、血漿內(nèi)皮素的影響

李勁松，周興明，譚宗和，陳龍全

1.宣恩縣民族醫(yī)院（湖北宣恩445500）

2.湖北民族學院中醫(yī)藥學院（湖北恩施445000）

蛇竭顆粒對神經(jīng)根型頸椎病大鼠模型血清一氧化氮、血漿內(nèi)皮素的影響

李勁松1，周興明1，譚宗和1，陳龍全2

1.宣恩縣民族醫(yī)院（湖北宣恩445500）

2.湖北民族學院中醫(yī)藥學院（湖北恩施445000）

目的研究蛇竭顆粒對神經(jīng)根型頸椎病大鼠模型血清一氧化氮（NO）、血漿內(nèi)皮素（ET）含量的影響。方法采用頸椎插線法建立大鼠神經(jīng)根型頸椎病模型，將50只正常Wistar大鼠，隨機分為模型組、假手術(shù)組、頸復(fù)康顆粒對照組、蛇竭顆粒高劑量組和蛇竭顆粒低劑量組，測定各組NO、ET的含量。結(jié)果治療28 d后，蛇竭顆粒高、低劑量組及頸復(fù)康對照組血清NO含量顯著升高，血漿內(nèi)皮素含量明顯下降，與治療前比較有顯著性意義（P＜0.05）。治療后蛇竭顆粒高、低劑量組及頸復(fù)康對照組血清NO含量與模型組比較有顯著差異（P＜0.01）；蛇竭顆粒高、低劑量組及頸復(fù)康對照組的血漿ET含量治療后明顯低于模型組（P＜0.01），蛇竭顆粒高劑量組血漿ET含量的明顯高于頸復(fù)康對照組（P＜0.05）。結(jié)論蛇竭顆?？捎绊憙?nèi)皮細胞活性因子NO、ET水平及含量的變化，對頸椎病有積極治療作用。

蛇竭顆粒；神經(jīng)根型頸椎??；血清一氧化氮；血漿內(nèi)皮素

神經(jīng)根型頸椎病是指以頸椎間盤退變?yōu)橹饕∽兓A(chǔ)，包括頸周圍肌肉、關(guān)節(jié)繼發(fā)性改變和相鄰椎體退變增生而刺激或壓迫脊神經(jīng)根的頸椎病，通常表現(xiàn)為頸及一側(cè)上肢疼痛，同時伴有該脊神經(jīng)根支配區(qū)域感覺缺失、運動功能缺損和反射改變而發(fā)生的一種綜合癥候群［1］。臨床癥狀以頸、肩、臂、手的疼痛、麻木為主要表現(xiàn)，該病往往因受寒、勞累、損傷而發(fā)病。蛇竭顆粒是我院的自制制劑，具有活血化瘀、祛風除濕、消腫止痛的功用，尤其在頸椎病神經(jīng)根型患肢麻木疼痛的治療方面，有顯著的作用。前期藥效實驗表明，該藥具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛和改善血液循環(huán)作用。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，觀察蛇竭顆粒對神經(jīng)根型頸椎病大鼠模型血清一氧化氮（NO）、血漿內(nèi)皮素（ET）的影響，進一步探討該藥對神經(jīng)根型頸椎病的療效乃至周圍神經(jīng)退形性變的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量（200±10）g（湖北民族學院醫(yī)學實驗中心提供）50只。

1.1.2 試劑和儀器 NO（硝酸還原酶法）試劑盒（南京聚力生物醫(yī)學工程研究所生產(chǎn)），ET（放射免疫法）試劑盒（北京東亞放射免疫研究所生產(chǎn)），高速冷凍離心機（北京時代北利離心機有限公司），Ecom－F6124半自動生化分析儀（德國）。

1.1.3 藥物 蛇蝎顆粒藥物組成（白花蛇、血竭、鳳仙花、土鱉蟲、威靈仙、當歸、防風、葛根），本院制劑室制備，實驗時用蒸餾水加熱溶化蛇蝎顆粒成液態(tài)，含生藥量1.0 g／mL，頸復(fù)康顆粒，承德頸復(fù)康藥業(yè)集團有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 參照文獻［2］方法：10%水合氯醛以0.35mL／100 g劑量麻醉大鼠，俯臥位固定，常規(guī)消毒后，手觸下頸部附近最高棘突（T2），以第2胸椎棘突為標記，以頸7為中心，沿棘突縱行切開皮膚及皮下組織、頸后部肌群，直至C6～T2椎弓充分暴露，用尖刀銳性分離棘突兩側(cè)的肌肉，暴露棘突及兩側(cè)椎板，用眼科剪刀剪斷頸6、7兩側(cè)橫突以上椎板，暴露出椎管內(nèi)的脊髓，用神經(jīng)剝離子將脊髓推向右側(cè)，顯露出左側(cè)頸6、7神經(jīng)根，將約1.5 cm長，直徑0.5mm的尼龍漁線輕輕沿脊髓縱軸放至C6－T1神經(jīng)根腋下（漁線經(jīng)過酒精浸泡，無菌干燥后再浸泡至0.1%的多聚賴氨酸溶液中，以增加其組織黏附性）。導(dǎo)致頸神經(jīng)根的炎癥，從而造成人鼠的神經(jīng)根型頸椎病模型。逐層關(guān)閉、縫合。術(shù)后常規(guī)給手術(shù)動物注射慶大霉素防止傷口感染，連續(xù)3 d。假手術(shù)組動物僅分離C6～T2錐體，鉗開C7椎板，暴露脊髓，但不做插線。

1.2.2 分組與給藥 造模后大鼠為5組，分別為模型組、假手術(shù)組、蛇竭顆粒高低2個劑量組、頸復(fù)康陽性對照組。用藥劑量按動物體表面積折算的等效劑量比值表，計算出大鼠用藥的等效量，手術(shù)后正常飲食喂養(yǎng)1周，從第2周開始，每日各給藥組分別灌胃給予相應(yīng)劑量的藥物水溶液，模型組和假手術(shù)組給予等體積生理鹽水；蛇竭顆粒高、低劑量組分別每天給予6.0 g、3.0g／（kg·d）灌胃，頸復(fù)康顆粒組6.0 g／（kg·d）灌胃；每天1次，連續(xù)灌胃共4周。

1.2.3 血清NO、血漿ET含量測定 各組分別在造模后7d和治療后28d，用2%戊巴比妥鈉麻醉，取大鼠股動靜脈血4mL（2mL抗凝，2mL不抗凝），嚴格按照NO、ET試劑盒說明操作。檢測血液中NO、ET含量的變化。血清NO加10%的EDTA二鈉溶液20 μL，混勻30min后，4℃離心5min，離心力為3000 r／min，提取上層清液于－20℃冰箱保存。血漿ET加40μL抑肽酶和30μL 7.5%的EDTA二鈉溶液，混勻30min后，4℃離心10min，離心力為3000 r／min，提取上層血漿0.5mL，于－20℃冰箱保存。

1.3 統(tǒng)計學處理 實驗數(shù)據(jù)分析用SPSS 17.0 for?windows統(tǒng)計軟件，以均數(shù)±標準差（±s）表示，各組間比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有顯著意義。

2 結(jié)果

治療前假手術(shù)組血清NO含量、血漿ET含量與模型組比較有顯著性意義（P＜0.05），表明造模后血清NO的含量下降，血漿ET含量升高，而蛇竭顆粒高、低劑量組，頸復(fù)康對照組及模型組之間無顯著性差異（P＞0.05）。治療28 d后，蛇竭顆粒高、低劑量組及頸復(fù)康對照組血清NO含量顯著升高，血漿內(nèi)皮素含量明顯下降（P＜0.05）。治療后蛇竭顆粒高、低劑量組及頸復(fù)康對照組血清NO含量與模型組比較有顯著差異（P＜0.01），與假手術(shù)組比較無顯著差異（P＞0.05）；蛇竭顆粒高劑量組NO含量與低劑量組比較無顯著性意義（P＞0.05），與頸復(fù)康對照組比較則有顯著性差異（P＜0.05）。蛇竭顆粒高、低劑量組及頸復(fù)康對照組的血漿ET含量治療后明顯低于模型組（P＜0.01），蛇竭顆粒高劑量組降低血漿ET含量的效果優(yōu)于頸復(fù)康對照組（P＜0.05），而蛇竭顆粒低劑量組與頸復(fù)康對照組比較無顯著性意義（P＞0.05）。見表1。

3 討論

神經(jīng)根型頸椎病中醫(yī)辯證為“痹癥”范疇，乃風寒濕熱之邪侵襲肢體經(jīng)絡(luò)，氣血閉阻運行不暢所致，感受風寒濕邪，痹阻經(jīng)絡(luò)，經(jīng)脈失養(yǎng)，以致氣血閉塞不通。蛇竭顆粒有活血化瘀、祛風除濕、消腫止痛的功效。我們前期的藥效研究顯示，蛇竭顆?？商岣咝∈鬅嵬撮撝担粶p少冰醋酸引起的扭體次數(shù)，對弗氏完全佐劑引起的大鼠足跖腫脹有較好的抑制作用，表現(xiàn)出鎮(zhèn)痛、抗炎和改善血液循環(huán)的良好作用。研究表明NO和ET是一對重要的內(nèi)源性細胞因子，參與頸椎病的生理和病理過程。具有擴張血管、增加灌流、抗血栓、抗炎、增加血液纖溶性及降低纖維蛋白原含量的作用［3］，它還能舒張血管平滑肌，抑制血小板粘附活化聚集，以及清除自由基等。NO作為一種新型的細胞效應(yīng)分子，在介導(dǎo)和（或）調(diào)節(jié)心血管、神經(jīng)、免疫和炎癥等方面均發(fā)揮重要作用。ET是目前已知最強的內(nèi)源性血管收縮物質(zhì)，具有十分廣泛的生物活性，具有調(diào)節(jié)體內(nèi)有關(guān)活性物質(zhì)的釋放作用。ET還可以促進血管平滑肌細胞增殖和血栓形成，當頸椎病處于病理狀態(tài)時，ET表達調(diào)控紊亂，導(dǎo)致ET的異常表達和釋放，ET過量釋放，作用于頸椎周圍血管，可使局部血管發(fā)生強烈收縮、痙攣。血管緊張度取決于舒、縮血管物質(zhì)間的平衡，NO與ET共同調(diào)節(jié)血管緊張性和內(nèi)皮細胞連續(xù)性，可有效地舒張血管，增加血流量，一旦NO的生成與釋放受抑制，兩者之間的平衡被打破，內(nèi)皮素將促使血管收縮、血流減少［4］。

表1 各組治療前后血清NO和血漿ET的含量（±s，n＝10）

表1 各組治療前后血清NO和血漿ET的含量（±s，n＝10）

注：與模型組比較?P＜0．05，??P＜0．01；與頸復(fù)康組比較△P＜0.05。

組別 NO（μmol／L）造模7 d后 治療28 d血漿ET（pg／mL）造模7 d后 治療28 d模型組 13.19±2.37 16.76±2.34 159.72±46.13 153.56±47.58假手術(shù)組 29.68±2.56? 34.35±2.87?? 136.04±45.24 138.43±43.54?頸復(fù)康組 13.56±2.31 28.27±1.74?? 157.35±52.76 115.67±45.93??蛇竭顆粒高劑量組（6.0g） 14.02±2.27 36.32±2.43??△ 154.47±51.84 96.65±50.82??△蛇竭顆粒低劑量組（3.0g） 13.74±2.15 29.68±2.17?? 155.26±48.53 108.82±45.51??

本研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)根型頸椎病大鼠模型急性期血漿ET水平升高，NO含量降低，此時NO與ET處于紊亂狀態(tài)，蛇竭顆粒治療28 d后ET明顯下降，而NO顯著升高，表明該藥治療神經(jīng)根型頸椎病的機制，可能是通過調(diào)控ET與NO的表達量，調(diào)節(jié)舒、縮血管因子間的平衡，從而減輕頸椎間盤組織邊緣的血管增生、炎癥細胞浸潤、組織水腫及纖維素樣滲出等慢性炎癥反應(yīng)，改善局部及全身血液循環(huán)，緩解神經(jīng)根壓迫所致的各種臨床癥狀。確切的療效機制尚需進一步深入探討。

［1］ 盛鋒，沈國權(quán)，孫武權(quán).神經(jīng)根型頸椎病療效評價量表的研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合學報，2010，8（9）：824－826.

［2］ 竇夏睿，孫建寧，王威，等.急性期神經(jīng)根型頸椎病模型的建立［J］.北京中醫(yī)藥大學學報，2006，29（5）：332－334.

［3］ 張蕾，阮君山，嚴令耕，等.內(nèi)皮素和一氧化氮致血管損傷性疾病的分子機制及藥物研發(fā)策略［J］.中國藥理學通報，2012，28（2）：162－164.

［4］ 高冬，陳文元，吳立婭，等.血府逐瘀湯誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞血管新生中一氧化氮的作用［J］.中醫(yī)雜志，2011，52（21）：1852－1855.

Effects of Shejie Granules on Serum Nitric Oxide and Plasma Endothelin in Rat M odel w ith Nerve Root Cervical Spondylosis

LIJinsong1，ZHOU Xingming1，TAN Zonghe1，CHEN Longquan2
（1．National Hospital of Xuanen，Xuanen 445500，China；
2．School ofChinese Medicine，Hubei University for Nationalities，Enshi 445000，China）

ObjectiveTo investigate the effects of Shejie granules on serum nitric oxide（NO）and plasm a endothelin（ET）in ratm odelw ith nerve root cervical spondylosis．MethodsThe rat m odelw ith nerve root cervical spondylosis w as established by intervertebralnylon suture inser?ting m ethod．The 50 cases of norm alW istar rats w ere random ly divided into m odelgroup，sham operation group，control group treated w ith Jingfukang granules and treatm ent group treated w ith high－dosed and low－dosed Shejie granules，respectively．The NO and ET levels in each group w ere observed．ResultsAfter treatm ent，the NO and ET levels in both treatm ent and con?trol group w ere im proved m ore significantly than those in both m odeland sham operation group（P＜0．05）．In addition，the effect in treatm ent group treated w ith high－dosed Shejie granules w as better than that in controlgroup treated w ith Jingfukang granules（P＜0．05）．ConclusionThe Shejie granules can influence the levels and contents of active factors of NO and ET in endothe?lial cell and have positive therapeutic effect on cervical spondylosis．

Shejie granules；nerve root cervical spondylosis；serum nitric oxide

R274

A

1008－8164（2015）04－0005－03

2015－06－15 責任編輯：牟冬生

湖北省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥研究項目（2013ZY24）。

李勁松（1965－），男，湖北宣恩人，主任醫(yī)師，研究方向：民族醫(yī)藥臨床應(yīng)用。