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    干枸杞漿果菌落總數(shù)測(cè)定結(jié)果的測(cè)量不確定度評(píng)價(jià)

    2020-12-28 07:01:46陽,
    工業(yè)微生物 2020年6期
    關(guān)鍵詞:平皿稀釋液枸杞

    高 陽, 劉 丹

    歐陸食品檢測(cè)服務(wù)(大連)有限公司,遼寧 大連 116000

    因?yàn)槭称钒踩珕栴}引發(fā)了一系列的疾病,人們便更加注重食品質(zhì)量,尋找質(zhì)檢合格的產(chǎn)品才能放心食用。然而食品檢驗(yàn)檢測(cè)中包含了諸多重要指標(biāo),但是最常見的檢驗(yàn)指標(biāo)是產(chǎn)品的菌落總數(shù)[1]。因?yàn)槭称吩谏a(chǎn)、加工和運(yùn)輸途中會(huì)受到一定程度的污染,而菌落總數(shù)的變化能很好的體現(xiàn)出食品最終質(zhì)量,成為判斷是否符合國家食品標(biāo)準(zhǔn)要求的重要指標(biāo)。

    微生物檢測(cè)樣品具有不均一性,導(dǎo)致多次檢測(cè)的結(jié)果也具有分散性,從而引入了測(cè)量不確定度這一概念。在一個(gè)完整的測(cè)量結(jié)果報(bào)告中包含不確定度參數(shù),表明結(jié)果在一定的置信區(qū)間內(nèi)是真實(shí)可靠的[2]。

    因此,本文對(duì)樣品干枸杞漿果的菌落總數(shù)測(cè)量結(jié)果進(jìn)行了不確定評(píng)估,使結(jié)果更加準(zhǔn)確且完整,具有科學(xué)性、真實(shí)性。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1儀器設(shè)備

    恒溫培養(yǎng)箱:(37±1)℃;恒溫水浴鍋:(46±1)℃;電子天平:分度值0.1 g;均質(zhì)器;移液器;無菌培養(yǎng)皿:直徑90 mm。

    1.1.2培養(yǎng)基與試劑

    平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基;0.1%蛋白胨鹽水(PSS)。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1菌落總數(shù)檢測(cè)方法

    按照國際標(biāo)準(zhǔn)ISO 4833-1:2013 Microbiology of the food chain —Horizontal method for the enumeration of microorganisms —Part 1: Colony count at 30 ℃ by the pour plate technique規(guī)定的檢測(cè)程序進(jìn)行。

    檢測(cè)過程為:

    (1) 無菌稱取25 g干枸杞漿果樣品并加入225 mL PSS,置于無菌均質(zhì)袋內(nèi)均質(zhì),用拍打式均質(zhì)器拍打2 min,充分混合制成10-1初始稀釋液。

    (2) 用2 mL無菌吸管轉(zhuǎn)移1.0 mL 10-1稀釋溶液到9.0 mL無菌PSS,充分混合制得10-2稀釋溶液。

    (3) 另取一支新的2 mL無菌吸管,重復(fù)上述(2)操作,獲得進(jìn)一步稀釋,本試驗(yàn)一直稀釋到10-5稀釋度。每稀釋一次即換用1支新的滅菌吸管。

    (4) 取兩塊無菌平皿。用無菌吸管分別吸取 1 mL干枸杞漿果樣品的初始懸浮液(10-1稀釋度)加到每塊平皿中。

    (5) 另取兩塊無菌平皿,用另一支無菌吸管,分別吸取 1 mL 10-2樣品稀釋液。

    (6) 本試驗(yàn)選取后4個(gè)連續(xù)的十倍稀釋液接種到平皿中,以期獲得生長菌落數(shù)在10~300之間的平皿,以便計(jì)數(shù)。

    (7) 每塊平皿倒入12 mL~15 mL冷卻到44 ℃~47 ℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂,從制備好初始懸浮液(如果是液體樣品為10-1稀釋液)向平皿內(nèi)傾倒瓊脂,時(shí)間不得超過45 min。

    (8) 采用順時(shí)針逆時(shí)針各三圈、水平和左右方向各三次的方式,將接種液體與瓊脂混合均勻,平皿放置在涼的水平面上待凝固。

    (9) 完全凝固后,若懷疑產(chǎn)品中的微生物在培養(yǎng)中會(huì)蔓延生長至培養(yǎng)基表面時(shí),可需加入4 mL 44 ℃~47 ℃覆蓋培養(yǎng)基或平板計(jì)數(shù)瓊脂,覆蓋在先前平皿表面,待其凝固[3]。

    (10) 將平皿倒置于 (30±1)℃的培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)(72±3)h。

    (11) 菌落計(jì)數(shù):在規(guī)定的培養(yǎng)周期后,盡可能記錄平皿上菌落低于300的菌落數(shù),乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告菌落總數(shù)。

    1.2.2不確定度的試驗(yàn)方案

    由操作人員A和操作人員B分別對(duì)10份干枸杞漿果樣品進(jìn)行菌落總數(shù)檢測(cè)試驗(yàn),試驗(yàn)方案的描述如圖1。每個(gè)操作人員對(duì)每個(gè)樣品取一次試驗(yàn)的用量,制備初級(jí)稀釋液進(jìn)行一次檢驗(yàn)檢測(cè)。具體檢測(cè)方法按1.2.1菌落總數(shù)檢測(cè)方法進(jìn)行。

    圖1 測(cè)算實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差的試驗(yàn)方案

    2 結(jié)果與討論

    2.1 測(cè)量不確定度評(píng)定

    對(duì)兩名操作人員同一天檢測(cè)的10個(gè)干枸杞漿果樣品菌落總數(shù)結(jié)果進(jìn)行歸納分析,詳細(xì)數(shù)據(jù)見表1。

    再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差見式(1-1)

    表1 操作員A和操作員B的10個(gè)樣品計(jì)數(shù)結(jié)果

    0.09(log10)CFU/g

    (1-1)

    式中:

    yij——對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換值,單位為log10(CFU/g)或log10(CFU/mL);

    i——樣品的序號(hào),i=1-n(n≥10);

    j——再現(xiàn)性條件的編號(hào),j=A或j=B。

    按照《測(cè)量不確定度表示導(dǎo)則》(GUM)的定義,擴(kuò)展不確定度U為合成不確定度uc(y)和包含因子k的乘積。取k值為2(置信水平95%)時(shí),則

    U=2uc(y)=2SR

    (1-2)

    因?yàn)樵佻F(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差SR為±0.09(log10),包含因子為2的擴(kuò)展不確定度U即為0.09×2=0.18(log10)。

    2.2 討論

    2.2.1不確定度來源分析

    依據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)ISO/TS 19036:2006 Microbiology of food and animal feeding stuffs Guidelines for the estimation of measurement uncertainty for quantitative determinations的要求,本次實(shí)驗(yàn)室采用整體法來評(píng)估菌落總數(shù)的測(cè)量不確定度(MU)。此方法是對(duì)經(jīng)過全部檢驗(yàn)檢測(cè)過程后所得的最終試驗(yàn)結(jié)果的可再現(xiàn)性計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差,認(rèn)為對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)性評(píng)估等同于合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度。整體法一般忽略偏差,采用“黑匣子”系統(tǒng),指出了在食品微生物檢驗(yàn)檢測(cè)過程中主要的不確定度來源[4],如圖2列出的九種因素。

    圖2 食品微生物學(xué)不確定度主要來源示意圖

    2.2.2不確定度的應(yīng)用

    微生物檢測(cè)中本身存在各種影響因素,使檢測(cè)結(jié)果為一個(gè)估計(jì)值,而不是準(zhǔn)確的數(shù)值。例如,表1中操作人員A的1號(hào)樣品結(jié)果為510 000 CFU/g,取對(duì)數(shù)后為5.71(log10),那么檢測(cè)結(jié)果報(bào)告為:(5.71±0.18)log10=5.53 log10~5.89 log10,計(jì)算反對(duì)數(shù)結(jié)果為338 844 CFU/g~776 247 CFU/g。結(jié)果報(bào)告為338 844 CFU/g~776 247 CFU/g顯然比只報(bào)告為510 000 CFU/g更具有真實(shí)性。同理可得出表1中其他樣本結(jié)果。由此可見,在測(cè)量結(jié)果中添加不確定度可以提高檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)性。

    3 結(jié)論

    本次試驗(yàn)干枸杞漿果樣品的菌落總數(shù)為(y±0.18) log10,其擴(kuò)展不確定度為0.18(log10),其他樣品的菌落總數(shù)檢測(cè)結(jié)果可參考該結(jié)果。本次實(shí)驗(yàn)表明,在檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告中引入不確定度,可使本實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果更加真實(shí)和準(zhǔn)確。

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