色譜法在巴比妥類藥物含量測定中的應(yīng)用分析

李儼，孫立麗，王婉婷

（吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林）

0 引言

巴比妥類藥物內(nèi)最主要的成分就是巴比妥酸鹽，該成分具有抑制中樞神經(jīng)的作用，因此在臨床上常用于鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、催眠需求上，而介于此類藥物的安全隱患，在使用時保障巴比妥酸鹽含量符合標(biāo)準(zhǔn)，否則容易出現(xiàn)醫(yī)療事故。就這一點，依照國家規(guī)定任何巴比妥類藥物都必須經(jīng)過藥品檢驗，而色譜法就是此類藥品檢驗中的常用方法，但隨著現(xiàn)代技術(shù)發(fā)展，色譜法在巴比妥類藥物測定中的應(yīng)用方式也越來越多，對此文章將依照測定流程，分析色譜法測定巴比妥類藥物的常見方式，且闡述各方法的特點。

1 巴比妥類藥物特征

要對巴比妥類藥物進行測定，就必須先了解此類藥物的特征，這一基礎(chǔ)上下文將對常見巴比妥類藥物的結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)進行分析。常見巴比妥類藥物包括：巴比妥、苯巴比妥、戊巴比妥、環(huán)己烯巴比妥、司可巴比妥、異戊巴比妥、硫噴妥鈉、甲苯巴比妥、己鎖巴比妥。

巴比妥類藥物的理化性質(zhì)包括分子量、溶劑，針對以上常見藥物，其理化性質(zhì)分別為：巴比妥分子量：184.19、溶劑：pH值9.4的硼酸鹽緩沖液；苯巴比妥分子量：232.24、溶劑：0.1mol/L NaOH溶液；戊巴比妥分子量：226.27、溶劑：pH值9.4的硼酸鹽緩沖液；環(huán)己烯巴比妥分子量236.27：、溶劑：pH值10或13的堿性溶液；司可巴比妥分子量：260.27、溶劑：pH值9.4的硼酸鹽緩沖液；異戊巴比妥分子量：226.27、溶劑：pH值9.4的硼酸鹽緩沖液；硫噴妥鈉分子量：264.3227、溶劑：pH值9.4的硼酸鹽緩沖液；甲苯巴比妥分子量：246.26、溶劑：pH值10的堿性溶液；己鎖巴比妥分子量：236.27、溶劑：分子量：246.26、溶劑：pH值10的堿性溶液。

2 色譜法應(yīng)用

介于國標(biāo)巴比妥類藥物測定流程，色譜法應(yīng)用可以分為兩個步驟，即前處理、色譜法測定，下文將對兩個步驟中的色譜法應(yīng)用常見方式、應(yīng)用方法及特點進行分析。

2.1 前處理

目前，色譜法巴比妥類藥物測定當(dāng)中的前處理方法有二，即蛋白沉淀法、溶劑萃取法，下文將對兩種方法的應(yīng)用進行分析。

（1）蛋白沉淀法

蛋白沉淀法主要適用于血樣狀態(tài)的巴比妥類藥物測定當(dāng)中，應(yīng)用具有針對性特點，且該方法應(yīng)用方式簡便、容錯率較高，因此受到了廣泛關(guān)注。在應(yīng)用方法上，針對巴比妥藥物類型，需要先選擇對應(yīng)的蛋白沉淀劑，后將蛋白沉淀劑滴入藥物溶液當(dāng)中，使兩者產(chǎn)生反應(yīng)，此時蛋白受沉淀劑影響會逐漸下降，而剩余巴比妥鹽酸則浮于上層，實現(xiàn)了蛋白與巴比妥鹽酸分離，后續(xù)采用色譜法可以進行檢驗。這種方法的應(yīng)用可以保護色譜柱被污染、避免萃取時的乳化現(xiàn)象。原理上，該方法中的蛋白沉淀劑屬于有機溶劑，具有降低溶液中介電常數(shù)的作用，接觸后會使溶液內(nèi)的蛋白質(zhì)分子凝集而沉淀。此外，關(guān)于蛋白沉淀劑的選擇，一般常用的沉淀劑為甲醇、乙腈，這兩種沉淀劑在前人實驗當(dāng)中均具有良好表現(xiàn)，特點在于甲醇沉淀劑的安全性更高，而乙腈的沉淀效果最好[2]。

（2）溶劑萃取法

因為巴比妥類藥物具有親脂性特征，所以其與有機溶液接觸之后很容易榮家，同時此類藥物當(dāng)中的內(nèi)源性干擾物質(zhì)普遍數(shù)據(jù)強極性水溶性物質(zhì)，在這一基礎(chǔ)上通過有機溶液是可以對巴比妥類藥物進行萃取的。關(guān)于容積萃取法的應(yīng)用方式有二，即液-液萃取法、固相萃取法，其中前者主要在兩相之間對藥物的物分配系數(shù)進行提取，在根據(jù)提取結(jié)果對不同組分物質(zhì)進行分離即可，而后者則是在固相基礎(chǔ)上進行相同操作，該方式相對簡陋，因此現(xiàn)代測定中已經(jīng)不太常用。另外，在液-液萃取法應(yīng)用當(dāng)中要注意兩個要點，即萃取時間與二次萃取應(yīng)用，其中萃取時間需要根據(jù)溶液來進行確認，例如當(dāng)溶液為甲苯時，萃取時間應(yīng)當(dāng)控制在15min左右；二次萃取應(yīng)用中要重視方式方法的選擇，這一點根據(jù)前人研究了解到，與溶劑萃取法契合度較高的二次萃取法為超聲波萃取，該方法可以有效提升萃取效率[3]。

（3）固相萃取法

固相萃取法是一種主要通過柱色譜分離原理來實現(xiàn)遷出了方法，在現(xiàn)代應(yīng)用當(dāng)中常用于生物樣品條件下。原理上，首先需要采用固定相對生物樣品進行吸附處理，可得樣品當(dāng)中的目標(biāo)物或者干擾物，其次完成后采用常規(guī)洗脫分離手段可知實現(xiàn)樣品分離，這種方法的優(yōu)勢在于流程較為簡單，可以在短時間內(nèi)多大批量樣品進行處理，同時處理完成后的回收率、萃取率都有良好表現(xiàn)，因此被廣泛應(yīng)用。但值得注意的是，固相萃取法雖然流程簡單，但實際操作卻較為復(fù)雜，同時需要大量的有機溶液作為支撐，說明該方法的成本、污染性較高，且在一些特殊條件下，可能出現(xiàn)微量分析物過量損失的問題，例如當(dāng)非特異性的沉淀反應(yīng)過量時會導(dǎo)致這一問題，此時固相萃取法的凈化效果、檢測靈敏度、可靠性都會隨之貶低，因此在前處理環(huán)節(jié)當(dāng)中，如果條件允許不建議選擇這種方法。

2.2 色譜法測定

結(jié)合上述前處理方法，在對巴比妥類藥物處理完成之后，即可開始色譜法測定，此步驟測定方式較多，主要包括：高效液相色譜法、超高效液相色譜、反相高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用聯(lián)用技術(shù)，下文將對各類方法進行分析。

（1）高效液相色譜法

高效液相色譜法在巴比妥類藥物測定當(dāng)中應(yīng)用最為常見，其主要利用高壓輸液泵將樣品液流動相輸入固定相色譜柱當(dāng)中，在分離后通過檢測儀器獲取色譜柱檢測結(jié)果即可。該方式主要來源于氣相色譜法、液相色譜法，利用這兩種方法的特點，進行分析可以得到準(zhǔn)確結(jié)果，且因為不同巴比妥類藥物性狀不同，這種方式的應(yīng)用范圍十分廣泛。例如可以將高效液相色譜法應(yīng)用于液態(tài)巴比妥藥物測定當(dāng)中，即采用Diamonsil TM C18的反相柱作為色譜柱、將醋酸銨-甲醇作為流動相進行測定，結(jié)果顯示該方法的檢出限在1.0μg/mL范圍，滿足測定要求。

（2）超高效液相色譜

超高效液相色譜是一種脫胎于高效液相色譜法的先進技術(shù)，在近幾年的巴比妥類藥物測定中應(yīng)用逐漸頻繁。介于兩種方法的相似性，在原理上兩者并沒有太多差異，但區(qū)別在于超高效液相色譜中采用的固定相為超高柱效細粒徑新型固定相，這種固定相的填料粒度較于上述方法更低，因此色譜柱功效提升，據(jù)悉可達到20萬塊/m的理論要求，在實際測定中具有更快的分離速度。例如在苯巴比妥含量測定當(dāng)中，可以以C18s色譜柱作為固定相，結(jié)合高效液相色譜法原理進行分離，整個過程十分短暫，于4min內(nèi)可將藥物中的四種成分完全分離，且標(biāo)準(zhǔn)曲線表現(xiàn)良好，可見該方法具有分離程度高、靈敏度高、測定速度快的優(yōu)勢，有利于測定成本降低。

（3）反相高效液相色譜法

反相高效液相色譜法應(yīng)用當(dāng)中，主要以表面為非極性的載體作為固定相、以高極性溶劑作為流動相來進行測定。應(yīng)用方法上，固定相可選擇ODS-18系列色譜柱、流動相可選擇甲醇-水，測定當(dāng)中可以得到準(zhǔn)確的線性曲線圖，且曲線圖線性關(guān)系表現(xiàn)良好，同時根據(jù)前人研究了解到，該方法的回收率達到了95%以上，可見其具有精度優(yōu)勢。

結(jié)合上述三種方法應(yīng)用可見，各類方法在應(yīng)用當(dāng)中互有優(yōu)劣，因此原則上需要根據(jù)實際要求來選擇相應(yīng)方法，但綜合對比下，超高效液相色譜的應(yīng)用性能最為優(yōu)秀，因此其在準(zhǔn)確性、速度、成本上均有優(yōu)勢，因此測定中可以重點考慮該方法的應(yīng)用。

（4）液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是一種系統(tǒng)化的測定技術(shù)，即首先依照液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的基本原理進行系統(tǒng)設(shè)計，系統(tǒng)中至少要包括液相色譜系統(tǒng)、樣品導(dǎo)入系統(tǒng)、接口、質(zhì)量分析器、離子檢測器、真空系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。其次將巴比妥類藥物通過樣品導(dǎo)入系統(tǒng)導(dǎo)入液相色譜系統(tǒng)當(dāng)中，后經(jīng)過接口與質(zhì)量分析器、離子檢測器、真空系統(tǒng)接觸，在真空系統(tǒng)當(dāng)中藥物成本將會逐漸分離，分離完成后在質(zhì)量分析器、離子檢測器作用下可得分離成分數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)將會被數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)接收，依照運行邏輯將數(shù)據(jù)對應(yīng)后展示。這種方法具有較高的自動化表現(xiàn)，應(yīng)用中更具便捷性優(yōu)勢。

3 結(jié)語

綜上，本文主要對色譜法在巴比妥類藥物含量測定中的應(yīng)用進行了分析，通過分析可見，巴比妥類藥物種類較多，結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)各異，需要采用相應(yīng)方法來進行測定；參照測定流程，對色譜法巴比妥類藥物測定的前處理、測定步驟中的各類方式進行了分析，了解了各方式原理、功效以及優(yōu)劣表現(xiàn)，在選擇時應(yīng)當(dāng)根據(jù)實際需求來選定方式。