妊娠期糖尿病孕婦孕中期外周血miR-375表達(dá)及預(yù)測產(chǎn)后糖代謝異常價值

陳玉婷 陶春梅 陳 倩 初曉麗 吳文詩

深圳市寶安區(qū)沙井人民醫(yī)院(518104)

妊娠期糖尿病(GDM)臨床經(jīng)過復(fù)雜，可能對母嬰生命安全均造成威脅，且部分孕婦產(chǎn)后仍存在糖代謝異常，遠(yuǎn)期心血管疾病發(fā)生風(fēng)險倍增。明確GDM孕婦產(chǎn)后糖代謝異常影響因素并針對性干預(yù)，對增強產(chǎn)婦產(chǎn)后軀體健康、提高生活質(zhì)量。miRNA參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展，有研究發(fā)現(xiàn)與成人糖尿病相關(guān)[1-2]。目前關(guān)于微小RNA-375(miR-375)對GDM患者產(chǎn)后糖代謝異常的預(yù)測價值研究不多，本研究以此為切入點進(jìn)行觀察探討、為GDM患者的早期糖代謝干預(yù)等提供新依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性收集2018年1月—2019年7月本院產(chǎn)前檢查并分娩的GDM患者200例臨床資料為GDM組，本人簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合有關(guān)指南中GDM診斷標(biāo)準(zhǔn)[3-5]；②年齡≥20周歲；③孕13周前建立孕檢卡，孕前血糖正常，孕24～28周行75gOGTT診斷GDM；④臨床資料完整、規(guī)律產(chǎn)檢并配合產(chǎn)后隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并妊娠期高血壓疾病等其他妊娠合并癥；②合并基礎(chǔ)性心肝腎功能不全、惡性腫瘤、自身免疫性疾病等可能對GDM干預(yù)及分娩結(jié)局等產(chǎn)生影響的疾患；③入組前3月內(nèi)有糖皮質(zhì)激素應(yīng)用史；④不配合相關(guān)干預(yù)或隨訪脫落病例。取同期本院行產(chǎn)前檢查且糖耐量檢測正常的孕中期孕婦100例為對照組，各項檢查結(jié)果均在正常范圍內(nèi)、年齡≥20歲且本人簽署知情同意書。本院倫理委員會通過此次倫理審核。

1.2 miR-375檢測

對入組孕婦抽取晨空腹靜脈血行RNA抽提。設(shè)置逆轉(zhuǎn)錄條件為：16℃ 30min、42℃ 30min、85℃ 5min、4℃ 5min。設(shè)置聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)條件為：95℃ 15s 45個循環(huán)、60℃ 60s。根據(jù)反應(yīng)曲線得到Ct值，使用U6 SnRNA作為內(nèi)參，按照公式2﹣△△Ct計算miR-375的相對表達(dá)量。

1.3 隨訪及臨床資料收集

GDM組孕婦產(chǎn)后3月復(fù)查口服糖耐量試驗(OGTT)并根據(jù)結(jié)果分為糖代謝正常組、糖代謝異常組。收集者臨床資料，包括年齡、孕前體質(zhì)指數(shù)、孕期增重、既往生育史、文化程度、居住地、生活習(xí)慣(吸煙、飲酒)、家族糖尿病史、孕期是否應(yīng)用胰島素、分娩后是否母乳喂養(yǎng)等。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。兩組計數(shù)資料比較采用卡方檢驗，計量資料比較采用獨立樣本t檢驗；logistics回歸分析GDM患者產(chǎn)后糖代謝異常的危險因素；繪制受試者工作特征(ROC)曲線評估外周血miR-375表達(dá)水平對GDM患者產(chǎn)后糖代謝異常的預(yù)測價值。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

GDM組，入組時孕周(25.5±2.0)周(24～27周)，體質(zhì)指數(shù)(BMI)(24.9±2.1)kg/m2(23～27 kg/m2),孕(2.3±0.7)次(1～5次)，產(chǎn)(0.6±0.1)次(0～2次)；對照組，入組時孕周(25.6±1.9)周(24～28周)，體質(zhì)指數(shù)(24.9±2.0)kg/m2(23～28 kg/m2)孕(2.3±0.8)次(1～4次)，產(chǎn)(0.6±0.1)次(0～2次)。兩組孕婦資料比較無差異(P>0.05)。

2.2 外周血miR-375表達(dá)水平

GDM組外周血miR-375表達(dá)水平(0.61±0.09)高于對照組(0.40±0.07)(t=20.440，P=0.000)。且GDM組產(chǎn)后糖代謝正常與異常者，其孕前BMI、孕期增重、家族糖尿病史、miR-375水平等存在差異(P<0.05)，余臨床指標(biāo)未見差異(P>0.05)，具體見表1。

表1 GMD患者產(chǎn)后不同糖代謝者臨床資料比較

2.3 GMD患者產(chǎn)后糖代謝異常影響因素分析

以GMD組患者產(chǎn)后糖代謝異常作為應(yīng)變量(產(chǎn)后糖代謝異常=1，產(chǎn)后糖代謝正常=0)，選擇表1中具有統(tǒng)計學(xué)差異的指標(biāo)作為自變量。經(jīng)logistics回歸分析，孕前BMI較大、孕期增重較多、家族糖尿病史、miR-375表達(dá)水平較高等均是GDM患者發(fā)生產(chǎn)后糖代謝異常的危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 GMD患者產(chǎn)后糖代謝異常影響因素的logistics回歸分析

2.4 外周血miR-375對GDM患者產(chǎn)后糖代謝異常的預(yù)測效能

ROC曲線分析顯示，孕中期GDM患者外周血miR-375對產(chǎn)后糖代謝異常預(yù)測的臨界值為0.625，其時敏感度、特異度分別為64.0%、78.7%，AUC為0.760(95%CI 0.691～0.829)。見圖1。

3 討論

GDM孕婦產(chǎn)后大部分糖代謝恢復(fù)正常，一部分產(chǎn)婦可能存在糖代謝異常，遠(yuǎn)期發(fā)生糖尿病風(fēng)險高。GDM孕婦產(chǎn)后糖代謝異常發(fā)生機制尚不明確，

圖1 外周血miR-375水平對GDM患者產(chǎn)后糖代謝異常的預(yù)測效能

早期干預(yù)并影響最終結(jié)局是目前臨床研究重點。Garcia[4]研究發(fā)現(xiàn)，miR-375在成年2型糖尿病患者血中存在異常表達(dá)，且與胰島β細(xì)胞功能、胰島素抵抗等相關(guān)；Higuchi[5]研究認(rèn)為，機體循環(huán)中的miR-375可作為2型糖尿病的生物標(biāo)志物。關(guān)于miR-375 與GDM關(guān)系目前研究不多，孫天虹[6]研究提及GDM孕婦外周血miR-375與正常孕婦相比出現(xiàn)上升趨勢，但未提出上升對病情及預(yù)后的影響。本研究對比孕中期GDM組與對照組發(fā)現(xiàn)， GDM組外周血miR-375表達(dá)量增加，提示miR-375在GDM發(fā)生發(fā)展中發(fā)生一定作用。

為進(jìn)一步明確miR-375對GDM孕婦產(chǎn)后糖代謝異常的影響，本文結(jié)合臨床資料進(jìn)行單因素分析，發(fā)現(xiàn)發(fā)生產(chǎn)后糖代謝異常的GDM孕婦其孕前BMI、孕期增重、miR-375表達(dá)水平較高，且多合并家族糖尿病史。進(jìn)一步經(jīng)logistics回歸分析，孕前BMI較大、孕期增重較多、家族糖尿病史、miR-375表達(dá)水平等均是GDM患者發(fā)生產(chǎn)后糖代謝異常的危險因素。孕前BMI較大、孕期增重較多、家族糖尿病史對GDM發(fā)生的作用已多有研究[7-9]證實，且此類孕婦的GDM病情一般較重，可能導(dǎo)致胰島功能嚴(yán)重受損并誘發(fā)產(chǎn)后糖代謝異常出現(xiàn)。

miR-375促使GDM孕婦產(chǎn)后糖代謝異常的機制不明，Li[10]在其2014年的研究中提出，miR-375通過調(diào)節(jié)Mtpn和Pdk1基因的表達(dá)并對胰島素分泌產(chǎn)生影響，提示可能成為糖尿病治療的潛在靶點，控制miR-375表達(dá)可幫助胰島β細(xì)胞成熟。Yoshimatsu[11]研究認(rèn)為，miR-375可能作為預(yù)測胰島分離和移植后慢性胰腺炎患者胰島產(chǎn)量和代謝功能的新的生物標(biāo)志物。以上研究提示，miR-375在糖尿病及胰島細(xì)胞中作用，可能與在GDM中具有共通性，miR-375高表達(dá)所致GDM病情嚴(yán)重、胰島細(xì)胞破壞加劇，增加了產(chǎn)后胰島細(xì)胞功能、胰島素敏感性恢復(fù)的難度，但以上推測有待后續(xù)深入研究加以明確。

采用ROC分析miR-375水平預(yù)測GDM孕婦發(fā)生產(chǎn)后糖代謝異常價值，預(yù)測臨界值為0.625，敏感性及特異性達(dá)到64.03%、78.69%。提示檢測GDM孕婦孕中期miR-375水平，可對產(chǎn)后糖代謝異常發(fā)生有一定預(yù)測價值。綜上所述，孕中期GDM孕婦外周血miR-375水平異常增高，對產(chǎn)后發(fā)生糖代謝異常有一定預(yù)測價值。而關(guān)于miR-375表達(dá)干預(yù)用于治療GDM還有待臨床深入研究。