子宮肌瘤患者子宮組織中miR-590、miR-16表達(dá)及意義

李紅玉 王靜麗 范麗絲

聯(lián)勤保障部隊(duì)第九八八中心醫(yī)院(鄭州，450007)

子宮肌瘤在育齡婦女中發(fā)病率較高，不及時(shí)醫(yī)治會(huì)出現(xiàn)貧血、白帶異常、子宮內(nèi)膜炎等癥狀，增加不孕癥、子宮內(nèi)膜癌等風(fēng)險(xiǎn)[1]。作為激素依賴(lài)性腫瘤，子宮肌瘤細(xì)胞中孕激素受體M蛋白表達(dá)量顯著升高，可能與疾病發(fā)生有關(guān)[2]。劉冉等[3]發(fā)現(xiàn)，雌激素受體蛋白可能在妊娠期子宮肌瘤生長(zhǎng)中具有調(diào)控作用。微小RNA(miRNA)可參與調(diào)控腫瘤及其他疾病發(fā)生發(fā)展。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-590在原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)下調(diào)，miR-590過(guò)表達(dá)抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移[4]；miR-590過(guò)表達(dá)可抑制乳腺癌細(xì)胞增殖，影響乳腺癌發(fā)生發(fā)展[5]。另有報(bào)道，miRNA家族另一成員miR-16能抑制肝癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡，可能作為臨床治療新靶點(diǎn)[6]。Yang等研究發(fā)現(xiàn)，miR-16在膠質(zhì)瘤中上調(diào)表達(dá)，通過(guò)抑制B淋巴細(xì)胞瘤-2(BCL2)基因表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞凋亡[7]。但miR-590與miR-16在子宮肌瘤組織中表達(dá)情況及與患者激素水平和臨床病理特征關(guān)系鮮有報(bào)道。本研究通過(guò)檢測(cè)miR-590、miR-16在子宮肌瘤組織中表達(dá)水平，分析其與患者激素水平關(guān)系，探討其在子宮肌瘤發(fā)生發(fā)展中的意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2016年1月—2018年12月本院收治的子宮肌瘤患者64例，按組織學(xué)分型分為漿膜下肌瘤、肌壁間肌瘤、粘膜下肌瘤 、子宮頸肌瘤。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理組織切片診斷為子宮肌瘤。②術(shù)前未接受放、化療者。③知情并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①心、肝、腎功能?chē)?yán)重不全。②患有精神疾病。③合并其它腫瘤。另選取同期因子宮脫垂行子宮切除術(shù)患者64例為正常子宮肌層組。研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)，本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批。

1.2 主要儀器和試劑

電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析儀(羅氏cobase 411，上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司)，熒光定量PCR儀(Applied Biosystems 7500 fast Real-Time PCR System，美國(guó)ABI公司)，RNA提取試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)、反轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京百奧萊博科技有限公司)，熒光定量PCR試劑盒(德國(guó)Qiagen公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 miR-590、miR-16檢測(cè)術(shù)中收集切除的肌瘤組織及正常子宮肌層組織。放入液氮迅速冷凍， -80℃保存。組織研磨后Trizol法提取總RNA，將總RNA用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄為cDNA，將所得cDNA -20℃保存用于實(shí)時(shí)熒光定量(qRT-PCR)實(shí)驗(yàn)。qRT-PCR 20μl反應(yīng)體系：2x QuantiNova SYBR Green PCR Master Mix 10μl，ROX 0.1μl，上游引物2μl，下游引物2μl，cDNA 2μl，無(wú)酶水3.9μl。反應(yīng)步驟：95℃初始活化2min。95℃，5s；60℃，10s；以上38個(gè)循環(huán)，每個(gè)樣本3次重復(fù)。采用2-△△CT法計(jì)算miR-590和miR-16相對(duì)表達(dá)量，本次實(shí)驗(yàn)以U6為內(nèi)參基因，所用引物見(jiàn)表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3.2血清性激素檢測(cè)取入組者術(shù)前月經(jīng)周期第6～8d晨空腹靜脈血，采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清雌激素(E2)、孕酮(P)、促卵泡激素(FSH)、黃體生成素(LH)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料

兩組年齡、吸煙、飲酒、高血壓等比例無(wú)差異(P>0.05)。子宮肌瘤組體質(zhì)指數(shù)(BMI)、有妊娠史比例與正常子宮肌層組有差異(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.2 兩組子宮組織中miR-590、miR-16表達(dá)水平

子宮肌瘤組子宮組織中miR-590(0.52±0.14)、miR-16(0.46±0.11)表達(dá)水平均低于正常子宮肌層組(1.03±0.31、1.01±0.27)(t=11.995、15.092，均P=0.000)。

表2 兩組一般資料比較

2.3 兩組血清性激素水平

子宮肌瘤組血清E2、LH、FSH、P水平均高于正常子宮肌層組(P均<0.05)。見(jiàn)表3。

2.4 miR-590、miR-16表達(dá)與性激素水平的相關(guān)性

兩組子宮組織中miR-590、miR-16表達(dá)水平均與血清中LH、P水平呈負(fù)相關(guān)(P均<0.05)，與E2、FSH水平無(wú)相關(guān)性(P均>0.05)。見(jiàn)表4。

2.5 影響子宮肌瘤發(fā)生的logistic回歸分析

通過(guò)logistic回歸分析，E2及P高水平、miR-590及miR-16低表達(dá)是子宮肌瘤發(fā)生的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表3 兩組血清性激素水平比較

表4 子宮肌瘤組miR-590、miR-16表達(dá)與性激素水平相關(guān)性

表5 logistic回歸分析影響子宮肌瘤發(fā)生的危險(xiǎn)因素

3 討論

已有研究[8]認(rèn)為，影響子宮肌瘤發(fā)病的主要因素有肥胖、妊娠史、精神壓力等。本研究發(fā)現(xiàn)，子宮肌瘤患者中較高BMI、無(wú)妊娠史者高于正常子宮肌層組，提示BMI及妊娠史可能與子宮肌瘤發(fā)生有關(guān)。

miRNA已被證實(shí)在腫瘤疾病發(fā)生發(fā)展中起調(diào)控作用。Qu等研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌患者血清中miR-21-5p表達(dá)水平上調(diào)，與胰腺癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)[9]；Gao等研究，上皮性卵巢癌患者miR-200c水平明顯升高，與癌癥進(jìn)展和患者生存率有關(guān)，可能是預(yù)測(cè)卵巢癌患病程度的生物標(biāo)志物[10]。吳棪等研究表明，miR-590能有效抑制舌鱗癌細(xì)胞配體表達(dá)，可能降低和減少免疫活性細(xì)胞凋亡和破壞，在癌癥進(jìn)展中起抑癌作用[11]；Ma等在肺鱗癌研究中發(fā)現(xiàn)，miR-590在肺鱗癌患者血清中表達(dá)水平明顯降低，水平與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，可作為判斷肺鱗癌患病風(fēng)險(xiǎn)的生物標(biāo)志物[12]。有研究表明，高侵襲性和轉(zhuǎn)移性的乳腺癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄激活因子3(ATF-3)表達(dá)水平顯著升高，抑制ATF-3表達(dá)可促進(jìn)miR-590表達(dá)，miR-590可能通過(guò)靶向ATF-3在乳腺癌細(xì)胞中負(fù)反饋表達(dá)[13]。本研究結(jié)果，miR-590在子宮肌瘤組織中低表達(dá)，與在舌鱗癌、肺鱗癌中表達(dá)水平一致[11-12]。提示miR-590可能作為抑癌因子參與了子宮肌瘤的進(jìn)展。

另有研究發(fā)現(xiàn)，肺腺癌細(xì)胞中miR-16表達(dá)水平低于正常支氣管上皮細(xì)胞，高表達(dá)miR-16可導(dǎo)致肺腺癌細(xì)胞增殖減少，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[14]；研究報(bào)道，青蒿琥酯可通過(guò)上調(diào)miR-16表達(dá)，降低環(huán)氧化酶-2表達(dá)，促進(jìn)前列腺素E2產(chǎn)生，從而促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞凋亡，起抑癌作用[15]；Liu等研究表明，miR-16上調(diào)可抑制膀胱癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞凋亡[16]。本研究結(jié)果顯示，子宮肌瘤組織中miR-16表達(dá)下調(diào)，與Gu等[14-15]在肺腺癌、前列腺癌中結(jié)果相似，提示miR-16低表達(dá)可能與子宮肌瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

子宮肌瘤發(fā)生發(fā)展與性激素水平密切相關(guān)。Shortrede等研究發(fā)現(xiàn)，E2和P可誘導(dǎo)子宮平滑肌瘤細(xì)胞增殖，在子宮肌瘤形成中有重要作用[17]。經(jīng)有效治療后子宮肌瘤患者血清LH、FSH水平顯著降低[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，子宮肌瘤組患者血清中E2、LH、FSH、P水平均顯著升高，提示 E2、LH、FSH、P等性激素升高可能與子宮肌瘤發(fā)生有關(guān)。有研究表明，鎘可能通過(guò)雌激素受體介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞中多種miRNA表達(dá)，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡[19]。miR-18a下調(diào)可促進(jìn)雌激素受體1表達(dá)并促進(jìn)細(xì)胞凋亡[20]。提示miRNA與性激素間可能存在相互作用。本研究發(fā)現(xiàn)，miR-590、miR-16表達(dá)與患者血清E2、P水平呈負(fù)相關(guān)，提示二者低表達(dá)可能促進(jìn)了E2、P水平升高。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，E2及P水平升高、miR-590及miR-16低表達(dá)均是子宮肌瘤發(fā)生的危險(xiǎn)因素。提示miR-590、miR-16低表達(dá)及血清E2、P水平升高，可能與子宮肌瘤發(fā)生有關(guān)。因此臨床應(yīng)密切關(guān)注患者以上因素，采取有效檢測(cè)手段盡早發(fā)現(xiàn)子宮肌瘤病變，以改善患者預(yù)后。

綜上所述，子宮肌瘤患者子宮組織中miR-590、miR-16表達(dá)下調(diào)，且與血清E2、P水平呈負(fù)相關(guān)，是子宮肌瘤發(fā)生的危險(xiǎn)因素，可能與子宮肌瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)。但本研究樣本較少，且未納入子宮肌瘤患者的正常子宮肌層組織為對(duì)照組，是本研究不足，將在下一步研究中納入，且具體作用機(jī)制尚待驗(yàn)證和研究。