三七總皂苷和多烯磷脂酰膽堿調(diào)控大鼠非酒精性脂肪肝的藥效學(xué)比較

姜清芳 黃敏怡 游春香 容燮峰 江 濤

廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，廣東廣州 510260

非酒精性脂肪性肝?。╪onalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一種代謝應(yīng)激性肝臟損傷，隨著飲食結(jié)構(gòu)日益西化，NAFLD的發(fā)病率呈上升趨勢[1]，并且低齡化日益嚴(yán)重，目前已是引起醫(yī)學(xué)界不可忽視的一種肝臟疾病[2]。三七總皂苷（Panax notognseng saponins，PNS）是三七的主要有效活性成分[3]。PNS的抗NAFLD機理目前尚不明確，有文獻(xiàn)報道三七具有抵抗肝臟損傷的作用，三七的護肝作用主要表現(xiàn)在減輕肝細(xì)胞變性壞死程度，減少肝細(xì)胞間膠原纖維，減輕肝臟脂肪變性和炎癥細(xì)胞浸潤，減少肝細(xì)胞變性壞死等[4-5]。由于這些屬性，使其對NAFLD的治療成為可能。本研究通過建立大鼠NAFLD模型，對比PNS和多烯磷脂酰膽堿（Polyene Phosphatidyl choline，PPC）對模型大鼠的脂肪代謝及肝功能的作用，進一步探討三七總皂苷治療NAFLD的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

三七總皂苷，注射用血栓通（凍干），廣西梧州制藥（集團）股份有限公司，批號：19041116，規(guī)格：250mg，Z20025652；多烯磷脂酰膽堿，多烯磷脂酰膽堿膠囊（易善復(fù)），賽諾菲（北京）制藥有限公司，批號：9BJD280，規(guī)格：228mg，H20059010。SD 大鼠，SPF級，雄性，體重（150±20）g，購自廣東省實驗動物中心，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2018-0002。高脂飼料和普通飼料均為SPF級。高脂飼料配方，基礎(chǔ)飼料52.2%，豬油15%，蛋黃粉15%，酪蛋白10%，蔗糖5%，膽固醇1.2%，膽酸鈉1.6%。飼養(yǎng)環(huán)境為SPF級，溫度（25±2）℃，濕度（60±15）%，給予標(biāo)準(zhǔn)食物，自由飲水，每12小時光照-黑暗循環(huán)飼養(yǎng)。實驗開始前適應(yīng)性喂養(yǎng)7d。

1.2 實驗分組

將32只大鼠隨機分為兩組，空白對照組（Blank，n=8），以普通飼養(yǎng)飼養(yǎng)；高脂飲食組（HFD，n=24），以高脂飼料進行飼養(yǎng)。飼養(yǎng)4周后，將HFD組大鼠隨機分為三組，依次為三七總皂苷組（PNS，n=8），給藥劑量為 0.2g/（kg·d）；多烯磷脂酰膽堿組（PPC，n=8），根據(jù)多烯磷脂酰膽堿含量折算后給藥濃度為 0.1g/（kg·d）；模型組（Model，n=8），給予對應(yīng)體積的生理鹽水。分別灌胃4周。

1.3 實驗指標(biāo)測定

1.3.1 生化指標(biāo)測定 給藥結(jié)束后，大鼠禁食12h，以0.3mL/100g的2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后統(tǒng)一處死。經(jīng)腹主動脈取血，以12 000r/min分離血清，全自動生化分析儀檢測肝功能指標(biāo)血清天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP），血脂指標(biāo)總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）等。

1.3.2 肝重指數(shù) 各組大鼠在給藥結(jié)束和抽取血液標(biāo)本后，找到門靜脈及上、下腔靜脈，用細(xì)繩將下腔靜脈扎緊，用手術(shù)剪刀于門靜脈入口稍下處剪開一小口，用細(xì)軟皮管插入門靜脈血管中，并用細(xì)線扎緊，用注射器沿皮管向門靜脈內(nèi)緩慢打入生理鹽水灌洗，剪斷上腔靜脈，反復(fù)灌洗，待肝臟變白后，停止灌洗。向兩側(cè)牽拉腹腔皮膚，完整切取整個肝臟，稱重。肝臟重量與體重之比即為肝重指數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

所得數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以（）表示，采用單因素方差分析（one-way ANOVA），P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01為差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體重及肝重指數(shù)比較

與Model組比較，PNS組的解剖前體重水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），肝重和肝重指數(shù)水平差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；PPC組僅解剖前體重與Model組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），肝重水平與Model組比較，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），肝重指數(shù)與Model組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。PNS組和PPC組體重增長較慢，與Model組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示兩種藥物對大鼠體重具有控制作用。肝重指數(shù)Blank組和PNS組較低，與Model組比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），PPC組的肝重指數(shù)與Model組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），提示PNS組對大鼠肝重指數(shù)改善優(yōu)于PPC組。見表1。

2.2 各組大鼠的生化指標(biāo)比較

與Model組比較，PNS組的ALP、ALT和AST值水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），PPC組僅ALT值與Model組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），ALP和AST值與模型組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。提示PNS組對大鼠肝功能指標(biāo)的改善優(yōu)于PPC組。見表2。

與Model組比較，PNS組的LDL-C、TC和TG值水平差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。PPC組僅TG值與Model組比較，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），LDL-C和TC值與Model組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。提示PNS在改善NAFLD大鼠的血脂指標(biāo)LDL-C、TC和TG值方面優(yōu)勢顯著，PPC組在改善TG值上效果明顯，對LDL-C和TC值無明顯改善。見表3。

表1 各組大鼠體重及肝重指數(shù)比較（±s）

表1 各組大鼠體重及肝重指數(shù)比較（±s）

注：與Blank組比較，△△P＜0.01；與Model組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與PPC組比較，▼P＜0.05，▼▼P＜0.01

組別 n 造模前體重（g） 解剖前體重（g） 肝重（g） 肝重指數(shù)（%）Blank 8 197.14±8.56 487.00±30.70 13.60±2.01**▼▼ 2.79±0.31**▼▼Model 8 198.42±9.56 516.28±58.34 24.18±1.98△△▼▼ 4.94±0.67△△PNS 8 198.74±2.51 461.51±33.34* 18.38±1.54△△**▼ 3.98±0.15△△**▼▼PPC 8 196.02±2.46 453.74±16.08* 20.25±1.45△△** 4.77±0.31△△F 1.186 3.113 41.122 47.922 P 0.339 0.034 0.000 0.000

表2 各組大鼠肝功能指標(biāo)比較（±s，U/L）

表2 各組大鼠肝功能指標(biāo)比較（±s，U/L）

注：與Blank組比較，△△P＜0.01；與Model組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與PPC組比較，▼P＜0.05，▼▼P＜0.01

組別 n ALP ALT AST Blank 8 117.3±21.93**▼▼ 42.60±14.39** 143.77±29.61**Model 8 184.64±61.45△△ 73.66±30.84△△▼ 247.13±77.12△△PNS 8 128.43±15.44*▼ 43.56±20.96* 146.46±28.42**PPC 8176.06±42.34△△ 49.50±8.99* 192.66±21.99 F 5.561 4.192 7.958 P 0.006 0.009 0.001

表3 各組大鼠血脂指標(biāo)比較（±s，mmol/L）

表3 各組大鼠血脂指標(biāo)比較（±s，mmol/L）

注：與Blank組比較，△△P＜0.01；與Model組比較，**P＜0.01；與PPC組比較，▼▼P＜0.01

組別 n LDL-C TC TG Blank 8 0.96±0.31**▼▼ 1.71±0.48**▼▼ 0.22±0.02**Model 8 4.08±0.46△△ 4.48±0.38△△ 0.67±0.33△△▼▼PNS 8 2.30±0.73△△**▼▼ 2.95±0.75△△**▼▼ 0.25±0.08**PPC 8 3.78±0.44△△ 4.10±0.39△△ 0.28±0.07**F 75.122 47.707 62.657 P 0.000 0.000 0.000

3 討論

NAFLD是由于食物和外周的脂肪組織增多，促使游離脂肪酸輸送入肝臟增多，游離脂肪酸在肝細(xì)胞線粒體內(nèi)氧化磷酸化減少，而極低密度脂蛋白合成不足或減少，成肝臟脂質(zhì)代謝的合成、降解和分泌失調(diào)，導(dǎo)致脂質(zhì)在肝細(xì)胞內(nèi)異常沉積[6-7]。NAFLD除可直接導(dǎo)致失代償期肝硬化、肝細(xì)胞癌和移植肝復(fù)發(fā)外，還可影響其他慢性肝病的進展，并參與2型糖尿病和動脈粥樣硬化的發(fā)病[8-9]。代謝綜合征相關(guān)惡性腫瘤、動脈硬化性心腦血管疾病以及肝硬化是影響NAFLD患者生活質(zhì)量和預(yù)期壽命的重要因素[10-12]。為此，NAFLD是當(dāng)代醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的新挑戰(zhàn)，近期NAFLD肝病對人類健康的危害仍將不斷增加。

多烯磷脂酰膽堿是從大豆中提取的一種磷脂，主要活性成分為多聚磷脂酰膽堿二酰甘油和多聚乙酰卵磷脂，這些多烯磷脂酰膽堿在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與重要的內(nèi)源性磷脂一致[13]?？诜笤诟闻K聚集并滲入肝細(xì)胞膜和亞細(xì)胞膜內(nèi)與肝細(xì)胞相結(jié)合，并以完整的分子與肝細(xì)胞膜及細(xì)胞膜相結(jié)合，通過直接影響膜結(jié)構(gòu)使受損的肝功能和酶活力恢復(fù)正常，從而調(diào)節(jié)肝臟的能量平衡，促進肝組織再生[14-15]。多烯磷脂酰膽堿是臨床廣泛用于護肝的藥物，本課題將多烯磷脂酰膽堿作為治療非酒精性脂肪肝的陽性對照藥物。

PNS是我國傳統(tǒng)名貴中藥材五加科人參屬多年生草本植物三七的主要有效活性成分。三七味微甘而苦，似人參之味，與人參同科同屬，但其藥用成分比人參繁多[16]。PNS含有多種單體皂苷，主要有：三七皂苷R1，人參皂苷Rbl和人參皂苷Rg1等[17]。近年來有關(guān)PNS在保肝作用和機制的研究進展迅速。PNS可通過抑制腫瘤壞死因子（TNF-α）的增高，抑制分泌型磷脂酶A2（SPLA2）水平[18]，減輕對肝細(xì)胞的炎癥刺激和Kupffer細(xì)胞的激活，抑制肝星狀細(xì)胞（HSC）增殖，促進其凋亡[19]，抑制Ⅰ、Ⅲ型膠原和層粘連蛋白合成等來達(dá)到抗纖維化的作用[20]；抗脂質(zhì)過氧化可能也是PNS對化學(xué)性肝損傷的重要保護機制[21]。PNS具備很強的清除自由基能力，可防止氧自由基對肝細(xì)胞膜及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)過氧化損傷，保護肝細(xì)胞膜完整性，減少肝糖原消耗，改善肝臟微循環(huán)[22]。筆者的前期研究也發(fā)現(xiàn)，三七總皂苷不僅能夠降低動脈粥樣硬化合并肝損傷大鼠的血脂水平，穩(wěn)定斑塊，同時還具有護肝作用，能降低肝損傷大鼠的ALT和AST水平[23]。

綜上所述，三七總皂苷組在NAFLD大鼠模型中具有降低體重、降低血脂、改善肝功能指標(biāo)等作用，與目前臨床廣泛用于護肝的藥物多烯磷脂酰膽堿相比，三七總皂苷均具有綜合優(yōu)勢優(yōu)勢。需進一步研究其治療NAFLD的作用機制，并探索其成為NAFLD目標(biāo)治療藥物的可能性。