足細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化與腎小球疾病

陳海云 敖英 朱亞男 汪暉

430071 武漢，武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系發(fā)育源性疾病湖北省重點實驗室

足細(xì)胞是腎小球臟層上皮細(xì)胞，對于維持腎小球濾過屏障的結(jié)構(gòu)和功能具有重要意義。研究表明，在一些理化因素的刺激下，足細(xì)胞會出現(xiàn)損傷或功能障礙，嚴(yán)重者出現(xiàn)細(xì)胞凋亡和脫落，導(dǎo)致腎小球硬化和腎功能損害[1]。上述損傷因素也會致使足細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)，足細(xì)胞功能蛋白Ⅰ型腎母細(xì)胞瘤(Wilms’tumor 1，WT1)、去氧腎上腺素等表達(dá)減少，并伴隨蛋白尿、腎小球玻璃樣變等病理現(xiàn)象。足細(xì)胞EMT是足細(xì)胞損傷的早期事件，且足細(xì)胞EMT在多種腎小球疾病中都扮演著重要的角色。本文將圍繞足細(xì)胞EMT展開闡述，對足細(xì)胞EMT的影響因素、發(fā)生機(jī)制以及足細(xì)胞EMT與腎小球疾病的關(guān)系進(jìn)行綜述，擬展現(xiàn)足細(xì)胞EMT及其所致疾病的最新研究進(jìn)展。

一、足細(xì)胞EMT

EMT是指在各種理化因素作用下，上皮細(xì)胞失去其表型特征，并獲得間質(zhì)細(xì)胞表型的病理生理學(xué)改變。這種細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)變由關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)，包括蝸牛家族Snail、鋅指E盒結(jié)合和堿性螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子。足細(xì)胞為不可再生細(xì)胞，附著在腎小球基底膜(glomerular basement membrane，GBM)外側(cè)，與內(nèi)皮細(xì)胞及其他蛋白多糖等共同構(gòu)成腎小球濾過屏障。近年來的研究表明，在損傷因素作用下，足細(xì)胞會產(chǎn)生一系列形態(tài)學(xué)改變，并可能發(fā)生EMT。

足細(xì)胞EMT的主要表現(xiàn)為細(xì)胞骨架蛋白重排、足突融合和裂孔膜間隙增大；足細(xì)胞表型標(biāo)志物如nephrin、podocin、P-cadherin、WT1等表達(dá)降低，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物如結(jié)蛋白(desmin)、成纖維細(xì)胞特異性蛋白-1(fibroblast-specific protein 1，F(xiàn)SP-1)、波形蛋白(vimentin)、平滑肌肌動蛋白(a-smooth muscle actin，α-SMA)等表達(dá)上調(diào)，同時受損的足細(xì)胞從GBM上脫落使足細(xì)胞數(shù)量減少，GBM裸露，破壞腎小球濾過膜完整性，腎小球功能發(fā)生改變，產(chǎn)生蛋白尿，進(jìn)一步發(fā)展成為腎小球硬化。已證實，EMT是足細(xì)胞損傷的早期事件，可進(jìn)一步引起細(xì)胞凋亡和脫落，因而在腎小球硬化中起至關(guān)重要的作用[2]。

二、足細(xì)胞EMT的誘因

足細(xì)胞EMT是足細(xì)胞損傷的一種表現(xiàn)形式，也是導(dǎo)致多種腎小球疾病的始動因素之一。導(dǎo)致足細(xì)胞損傷的因素主要可分為先天因素(遺傳因素)和后天因素兩類。研究表明，凡是能夠誘使足細(xì)胞損傷的因素都可能引起足細(xì)胞發(fā)生EMT[3]。

1.先天因素 遺傳因素是影響機(jī)體生長發(fā)育的重要內(nèi)因之一，它包括染色體組學(xué)、基因組學(xué)。WT1在腎臟發(fā)育過程中可促進(jìn)后腎間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)間充質(zhì)-上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化(mesenchymal-epithelial transition，MET)分化為足細(xì)胞，對足細(xì)胞的形成和成熟至關(guān)重要。報道指出[4]，錯義突變或足細(xì)胞條件性敲除WT1可導(dǎo)致人和小鼠腎小球瘢痕化。由WT1錯義突變誘導(dǎo)的小鼠腎小球硬化模型導(dǎo)致足細(xì)胞緊密連接蛋白(Zonula occludens 1，ZO-1)表達(dá)降低和足細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)表達(dá)上調(diào)[5]，進(jìn)一步可引發(fā)足細(xì)胞EMT，提示W(wǎng)T1可能是足細(xì)胞EMT的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑?；虻募谆腿ゼ谆且环N常見的表遺傳修飾形式，可參與許多生物過程。有研究指出[6]，基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9，MMP9)啟動子去甲基化可促進(jìn)足細(xì)胞EMT，但其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。另有研究指出，由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNA methyltransferase1，DNMT1)直接介導(dǎo)的Kruppel樣因子4(kruppel-like factor 4，KLF4)的高甲基化有助于腎上皮細(xì)胞中EMT的進(jìn)展[7]。由此推測，表遺傳修飾異常也可能是足細(xì)胞EMT的一種誘因。

2.后天因素 除了先天因素外，足細(xì)胞發(fā)育不良、腎素-血管緊素系統(tǒng)(renin-angiotensin-system，RAS)、活性氧(reactive oxygen，ROS)、脂質(zhì)及炎癥因子等很多誘導(dǎo)因素也可以促進(jìn)足細(xì)胞發(fā)生EMT。

足細(xì)胞作為一種終末分化細(xì)胞，其發(fā)育成熟后不具再生性，故足細(xì)胞發(fā)育異常亦可引起足細(xì)胞EMT。足細(xì)胞發(fā)育不良會引起足細(xì)胞缺失和功能障礙[8]。nephrin作為足細(xì)胞的重要功能蛋白，它的正常表達(dá)在很大程度影響足細(xì)胞的狀態(tài)。胚胎時期，nephrin表達(dá)缺失是足細(xì)胞發(fā)育不良的標(biāo)志之一，可導(dǎo)致足突和裂孔膜的形成障礙。成年個體nephrin缺失標(biāo)志著足細(xì)胞上皮表型的破壞，同時也可以激活β-連環(huán)蛋白(β-catenin)信號通路誘導(dǎo)足細(xì)胞發(fā)生EMT，促進(jìn)腎小球硬化發(fā)生。孕期不良環(huán)境暴露可引起低出生體重和早產(chǎn)，繼而影響足細(xì)胞發(fā)育。本實驗室研究發(fā)現(xiàn)，孕期咖啡因暴露會引起胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩，并引起胎腎結(jié)構(gòu)與功能的損傷，足細(xì)胞標(biāo)志基因nephrin表達(dá)降低，致胎兒足細(xì)胞發(fā)育不良，并導(dǎo)致成年子代蛋白尿和腎小球硬化礙[9]。而我們的進(jìn)一步研究也發(fā)現(xiàn)，足細(xì)胞發(fā)育不良大鼠成年后其足細(xì)胞表型向EMT轉(zhuǎn)變，如上皮細(xì)胞標(biāo)志基因nephrin、WT1等表達(dá)降低，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志基因desmin、α-SMA等的表達(dá)上調(diào)礙[10]。以上研究提示，足細(xì)胞的發(fā)育異常不僅會引起足細(xì)胞功能障礙，更可能導(dǎo)致足細(xì)胞EMT的發(fā)生。

Ang II的過度生成通過激活受體AT1R促進(jìn)TGF-β1等細(xì)胞因子的表達(dá)，誘導(dǎo)系膜細(xì)胞外基質(zhì)合成，并促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子8(transcription factor 8，TCF8)的轉(zhuǎn)錄，抑制上皮基因表達(dá)進(jìn)一步促進(jìn)足細(xì)胞EMT[11]。ROS是足細(xì)胞損傷和慢性腎病進(jìn)展的重要促進(jìn)因素，可促進(jìn)足細(xì)胞凋亡，ROS的增加可引起足細(xì)胞損傷和蛋白尿，繼而出現(xiàn)腎臟炎癥、腎小球硬化和間質(zhì)纖維化礙[12]。Ang II可以增加足細(xì)胞中ROS的產(chǎn)生，從而介導(dǎo)F-肌動蛋白骨架重排，導(dǎo)致足細(xì)胞損傷甚至凋亡礙[13]，證實這種ROS異?；罨鸬牡鞍坠羌苤嘏?、TGF-β釋放增加、細(xì)胞外基質(zhì)合成等均會致使足細(xì)胞發(fā)生EMT。脂質(zhì)代謝異常與足細(xì)胞EMT的發(fā)生也密切相關(guān)。研究表明，低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein receptor，LDL-R)的蛋白表達(dá)與α-SMA蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，與nephrin蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。脂質(zhì)積累促進(jìn)Ⅰ型膠原蛋白(Type 1 collagen)、α-SMA和纖維連接蛋白(Fibronectin)的表達(dá)，并降低了足細(xì)胞中nephrin的表達(dá)。這證實LDL-R途徑誘導(dǎo)的脂質(zhì)積累可誘導(dǎo)足細(xì)胞EMT。一系列報道顯示礙[14]，腫瘤壞死因子α(TNF-α)和白細(xì)胞介素6(interleukin-6，IL-6)等炎性細(xì)胞因子通過下調(diào)E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、ZO-1等上皮標(biāo)志物的表達(dá)，上調(diào)α-SMA、Fibronectin等間充質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá)來誘導(dǎo)EMT，雖然未見到其關(guān)于足細(xì)胞EMT的相關(guān)報道，但炎性細(xì)胞因子可誘導(dǎo)EMT是確認(rèn)的。

三、介導(dǎo)足細(xì)胞EMT的信號通路

介導(dǎo)足細(xì)胞EMT的通路有許多種，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的主要信號通路有TGF-β/smad、Wnt/β-catenin和Notch。這些通路既有各自的信號傳導(dǎo)路徑，又在不同層面相互連接、整合，組成錯綜復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)，共同介導(dǎo)和調(diào)控足細(xì)胞EMT的過程。

1.TGF-β/Smad信號通路 轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)是目前已知誘導(dǎo)足細(xì)胞EMT的最主要因子，也是誘導(dǎo)各種細(xì)胞纖維化形成的樞紐環(huán)節(jié)。TGF-β1之所以能發(fā)揮其生物功能，主要依靠以 Smad 和絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)為主的信號途徑。在一定刺激下，TGF-β1受體被激活后，磷酸化并激活 Smad2、Smad3，活化的Smad2、Smad3 與 Smad4 形成復(fù)合物并一同進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，促進(jìn)整合素鏈接激酶(integrin linked Kinase，ILK)、整合素-β1(β1-integrin)、Wnt、Snail、α-SMA和基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrix metalloprotein-2，MMP-2)等轉(zhuǎn)分化相關(guān)基因的表達(dá)，上調(diào)β-catenin的表達(dá)，從而促進(jìn)EMT的發(fā)生。已有研究報道，β-catenin的激活可以下調(diào)上皮標(biāo)志物E-cadherin和ZO-1的表達(dá)，而上調(diào)α-SMA等的表達(dá)。這證實β-catenin蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)參與誘導(dǎo)EMT過程。TGF-β1信號通過Smad直接增加LEF1的表達(dá)，并通過磷酸肌醇3-激酶(PI3K)-Akt途徑抑制糖原合酶激酶3β(GSK-3β)，使β-catenin依賴性激活淋巴增強(qiáng)因子1(LEF-1)誘導(dǎo)EMT，同時也有研究證實，抑制TGF-β1的表達(dá)可以阻止腎小球硬化及纖維化的發(fā)生，減少間質(zhì)細(xì)胞相關(guān)基因Ⅳ型膠原和纖黏蛋白的表達(dá)[16]。可見，TGF-β/Smad通路在介導(dǎo)EMT的過程中扮演了重要角色。實驗證明，TGF-β/Smad通路可引起體外培養(yǎng)的足細(xì)胞發(fā)生EMT，且足細(xì)胞EMT的程度與TGF-β1呈劑量依賴增加，TGF-β1可通過激活PI3K/PKB信號通路，調(diào)節(jié)足細(xì)胞基質(zhì)的粘附和纖維連接蛋白基質(zhì)沉積，促進(jìn)EMT進(jìn)程[17]。

2.Wnt/β-catenin信號通路 Wnt/β-catenin信號傳導(dǎo)途徑幾乎涉及胚胎發(fā)育的每個方面。Wnt(Wingless and lnt1)信號是一種跨膜信號，參與細(xì)胞的分化和運動，腎臟的發(fā)育、形態(tài)以及功能的維持均有賴于 Wnt 信號通路正?！伴_啟”和及時“關(guān)閉”，但其在成人腎臟中的表達(dá)基本是維持不變的。Wnt 信號通路在足細(xì)胞中的激活通常與蛋白尿和腎小球硬化進(jìn)展有關(guān)。β-catenin是Wnt的下游信號分子，當(dāng) Wnt 配體與卷曲受體蛋白Frizzled(Fz)受體以及低密度脂蛋白受體關(guān)聯(lián)蛋白6(low density lipoprotein receptor-related protein，LRP6)或者其類似物(LRP5)相關(guān)結(jié)合時，Wnt 信號通路被激活，GSK-3β不能使β-catenin磷酸化，β-catenin 穩(wěn)定游離在胞質(zhì)中，聚積后轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核。核β-catenin與 T 細(xì)胞因子/淋巴增強(qiáng)因子(TCF/LEF)轉(zhuǎn)錄因子家族的成員結(jié)合以促進(jìn)EMT。最新研究表明，在糖尿病腎病患者中，Wnt/β-catenin 信號通路激活，誘導(dǎo) β-catenin 表達(dá)增加，從而加速足細(xì)胞 EMT礙[18]，最終導(dǎo)致足細(xì)胞功能紊亂。

3.Notch信號通路 Notch信號通路與TGF-β/Smad信號通路存在交互作用，Notch途徑為TGF-β1介導(dǎo)EMT進(jìn)程所必需。Notch信號可以通過誘導(dǎo)缺氧誘導(dǎo)因子1a(Hypoxia-inducible factor 1a，HIF-1a)間接促進(jìn)Snail1的表達(dá)，其中Snail1是轉(zhuǎn)錄阻遏物，在調(diào)節(jié)EMT中起關(guān)鍵作用。研究表明礙[19]，Notch途徑通過激活Snail1誘導(dǎo)EMT。Snail1表達(dá)的上調(diào)可以通過抑制上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)，促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-cadherin及vimentin的表達(dá)，進(jìn)而使足細(xì)胞發(fā)生EMT。另外Snail2與Notch相互作用，對于Notch介導(dǎo)的E-cadherin的抑制和β-catenin的激活是必需的。除了由細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)的直接作用外，Notch還通過各種信號通路(包括NF-κB和β-catenin)以及各種調(diào)控miRNA的作用間接調(diào)控EMT礙[20]。

如前所述，3條信號通路都可以激活足細(xì)胞的EMT，且在某種程度上，β-catenin 作為一個共同的開關(guān)，使TGF-β、Notch和Wnt 信號通路在不同的層面相互連接、整合，成為調(diào)控EMT所必需的轉(zhuǎn)錄分子及信號媒介。

四、足細(xì)胞EMT與腎小球疾病

足細(xì)胞損傷是多種腎小球疾病的共同病理基礎(chǔ)，包括糖尿病腎病、腎小球硬化、IgA型腎病等。EMT是足細(xì)胞損傷的早期事件，可進(jìn)一步誘發(fā)多種腎小球疾病。

1.足細(xì)胞EMT與糖尿病腎病 糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病患者最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，也是全世界終末期腎病發(fā)病的主要原因，常見的臨床特征為進(jìn)行性蛋白尿，腎臟足細(xì)胞損傷是引起蛋白尿的關(guān)鍵靶點。Liu[21]認(rèn)為，損傷早期的足細(xì)胞EMT是使腎小球濾過屏障受損發(fā)生蛋白尿的主要因素，終止足細(xì)胞EMT可早期防治蛋白尿的發(fā)生，緩解DN的進(jìn)程。高糖可從多途徑引起足細(xì)胞EMT，如叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子O1(Forkhead transcription factor O1，F(xiàn)oxO1)在抗氧化應(yīng)激、糖脂代謝等方面發(fā)揮重要作用。在足細(xì)胞中，F(xiàn)oxO1可能通過抑制TGF-β/Smad/ILK信號通路過度激活，減輕高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞EMT，從而緩解DN甚至足細(xì)胞損傷礙[22]；結(jié)締組織生長因子(CTGF)誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷可能導(dǎo)致DN，抑制CTGF可通過減少β-catenin的表達(dá)來預(yù)防足細(xì)胞EMT，緩解DN進(jìn)程礙[23]；胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7(IGFBP7)參與調(diào)節(jié)DN中足細(xì)胞的損傷，沉默IGFBP7可通過抑制TGF-β/Smad途徑抑制HG介導(dǎo)的足細(xì)胞EMT，IGFBP7可作為DN的新型診斷和治療靶標(biāo)[24]等。

隨著對分子生物學(xué)的認(rèn)識越來越深入，人們發(fā)現(xiàn)非編碼單鏈RNA(miRNA)和長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA，lncRNA)與DN中足細(xì)胞EMT之間關(guān)系密切。有報道稱，miR-124a可通過抑制小窩蛋白-1(caveolin 1，cav-1)和β-catenin的激活來減弱DN所致的足細(xì)胞EMT[25]；miR-133b和miR-199b的敲低可減輕DN中TGF-β誘導(dǎo)的足細(xì)胞EMT[26]；lncRNA ENSRNOG00000037522的上調(diào)通過抑制nephrin等的表達(dá)增強(qiáng)DN中的足細(xì)胞EMT等[27]。這些研究提示，非編碼RNA與足細(xì)胞EMT及DN的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，其有望成為DN防治的潛在靶標(biāo)。

2.足細(xì)胞EMT與腎小球硬化癥 足細(xì)胞EMT是腎小球硬化的始動因素。腎小球硬化癥是一種以腎小球病變?yōu)橹鞯呐R床病理綜合征，其典型病理特征為腎小球玻璃樣變、系膜細(xì)胞增生及細(xì)胞外基質(zhì)過量沉積，臨床主要表現(xiàn)為大量蛋白尿和腎功能進(jìn)行性惡化。它是各種慢性腎小球疾病向終末期腎病進(jìn)展和惡化的共同病理階段。當(dāng)腎小球受到損傷時，足細(xì)胞會發(fā)生一系列的表型改變甚至脫失。有研究指出，在多數(shù)病理生理條件下足細(xì)胞的主要反應(yīng)是發(fā)生EMT[28]。最近的實驗表明，足細(xì)胞在損傷后可能經(jīng)歷EMT，這種表型轉(zhuǎn)化導(dǎo)致足細(xì)胞失去其特化的上皮特征并獲得新的間充質(zhì)標(biāo)記物，這一轉(zhuǎn)變無疑會損害腎小球濾過屏障的完整性，導(dǎo)致蛋白尿發(fā)生[29]。這種腎小球功能性異常進(jìn)一步可誘發(fā)一系列腎小球疾病，最終致腎小球硬化。

3.足細(xì)胞EMT與免疫球蛋白A(IgA)腎病 IgA腎病是最為常見的一種原發(fā)性腎小球疾病，其特征在于腎小球系膜細(xì)胞中IgA的沉積。以往臨床上IgA腎病主要是以系膜區(qū)IgA沉積為病理特征，研究也多集中于系膜細(xì)胞在腎小球硬化中的作用。但近幾年來，足細(xì)胞病變在腎小球腎炎進(jìn)展中的作用越來越受矚目。目前的研究表明，足細(xì)胞損傷在IgA腎病的腎小球硬化中起著重要作用。IgA1是IgA腎病中公認(rèn)的關(guān)鍵性致病因子。越來越多的報道指出，系膜區(qū)內(nèi)未成熟的IgA1沉積可能是IgA腎病的致病機(jī)制[30]。IgA腎病中IgA1直接下調(diào)了足細(xì)胞標(biāo)記物nephrin的mRNA表達(dá)，最終導(dǎo)致蛋白尿的形成。同時大量伴有蛋白尿的IgA腎病患者足細(xì)胞中表現(xiàn)出顯著的α-SMA和FSP-1的mRNA表達(dá)增加[31]。這些結(jié)果均表明，IgA腎病患者發(fā)生足細(xì)胞EMT。

4.足細(xì)胞EMT與腎病綜合征 腎病綜合征可由多種病因引起，主要表現(xiàn)為大量蛋白尿、低蛋白血癥、高脂血癥等臨床癥候群。足細(xì)胞特異性基因突變可能在腎病綜合征的發(fā)展中起重要作用。已證實，nephrin是足細(xì)胞的特殊功能蛋白，它的缺失會導(dǎo)致足細(xì)胞功能障礙性損傷，進(jìn)一步導(dǎo)致足細(xì)胞EMT，并伴隨著蛋白尿和腎病綜合征的易感[32]。最早發(fā)現(xiàn)編碼sli膜蛋白nephrin(NPHS1)和podocin(NPHS2)的基因遺傳缺陷可致腎病綜合征，推測足細(xì)胞EMT與腎病綜合征有關(guān)，且足細(xì)胞EMT可能參與介導(dǎo)了腎病綜合征[33]。

五、足細(xì)胞EMT的防治藥物

足細(xì)胞損傷在腎小球硬化的發(fā)病機(jī)制中起核心作用。因此，靶向遏制足細(xì)胞損傷和穩(wěn)定足細(xì)胞數(shù)量的療法在一定程度上可減緩腎小球硬化的進(jìn)展。目前，對足細(xì)胞EMT所致腎小球硬化的治療手段一般采取綜合治療。現(xiàn)用較多的防治藥物主要為新型化學(xué)類藥物、傳統(tǒng)中藥制劑和分子藥物。

1.化學(xué)類藥物 常用的化學(xué)類藥物包括免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素類等。糖皮質(zhì)激素可通過受體和非受體途徑穩(wěn)定細(xì)胞骨架、上調(diào)nephrin，進(jìn)而保護(hù)足細(xì)胞免受損傷[34]。肝細(xì)胞生長因子(HGF)在腎臟間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，且與慢性腎纖維化中TGF-β1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。體外和體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)HGF特異性地抵消了TGF-β1的作用[35]，提示HGF對腎臟的保護(hù)作用與抑制足細(xì)胞EMT有關(guān)。有實驗發(fā)現(xiàn)，APX-115(ewha-18278)是一種新型口服Noxs抑制劑，可以保護(hù)2型糖尿病誘發(fā)的腎損傷[36]，APX-115治療的DN大鼠nephrin表達(dá)明顯比患病大鼠高，且α-SMA和Ⅳ膠原的蛋白表達(dá)被抑制，表明APX-115可以逆轉(zhuǎn)糖尿病足細(xì)胞損傷，改善足細(xì)胞EMT進(jìn)展。

2.中藥制劑類 傳統(tǒng)中藥制劑在臨床上的應(yīng)用也非常廣泛，如雷公藤內(nèi)酯醇(triptolide，TP)，是從雷公藤中分離所得的一種二萜類化合物，可通過靶向轉(zhuǎn)錄因子、激酶或抑制泛素/蛋白酶體等機(jī)制發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖和促腫瘤細(xì)胞凋亡等抗腫瘤作用。大量體內(nèi)外研究均證實，TP具有保護(hù)足細(xì)胞、抑制蛋白尿的作用，并可通過調(diào)節(jié)Smad信號途徑減輕腎臟纖維化程度[37]。TP通過有效抑制p53、p38和NFκB等信號通路，直接作用于足細(xì)胞，以減輕細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激等造成的損傷，從而保護(hù)足細(xì)胞。雷公藤制劑治療糖尿病腎病已在臨床上廣泛應(yīng)用。糖腎平為中藥復(fù)方在防治DN的臨床應(yīng)用中顯示出良好的療效。研究發(fā)現(xiàn)[38]，糖腎平能降低足細(xì)胞中TGF-β1、Smad2/3的表達(dá)，增加足細(xì)胞標(biāo)志物CD2相關(guān)蛋白(CD2-associated protein，CD2AP)表達(dá)，減少間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA，這些結(jié)果表明，糖腎平通過抑制TGF-β1/Smad2/3信號通路的激活緩解足細(xì)胞EMT，維持足細(xì)胞形態(tài)功能的穩(wěn)定性，進(jìn)而保證腎小球濾過屏障的完整性，減少蛋白尿的發(fā)生，減輕腎臟纖維化，這可能是其防治DN的作用機(jī)制之一。

3.分子藥物 隨著分子生物學(xué)熱潮的來臨，研究者更多的認(rèn)識到其在機(jī)制研究及疾病防治中的重要位置。非編碼RNA，如lncRNA、miRNA參與各種生理和病理過程，最近的證據(jù)表明它們參與了上皮-間質(zhì)化的過程。已知lncRNA ENSRNOG00000037522在DN足細(xì)胞EMT中起關(guān)鍵作用。通過小干擾RNA轉(zhuǎn)染使lncRNA ENSRNOG00000037522沉默或敲低lncRNA ENSRNOG00000037522可以通過調(diào)節(jié)α-SMA、nephrin的表達(dá)來修復(fù)足細(xì)胞的損傷[27]。lncC01619在足細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，并參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路。在DN大鼠模型中l(wèi)ncC01619下調(diào)，并導(dǎo)致足細(xì)胞損傷，而過表達(dá)lncC01619可減輕DN大鼠足細(xì)胞損傷改善腎功能[39]，同樣miR-27a已被證實通過DN中PPARγ/β-catenin信號傳導(dǎo)介導(dǎo)足細(xì)胞EMT，其在DN患者中表達(dá)上調(diào)，具有臨床和生物學(xué)意義。在DN大鼠中給予miR-27a抑制劑可逆轉(zhuǎn)足細(xì)胞EMT，并緩解腎功能[40]。以上研究均提示我們非編碼RNA在腎病患者足細(xì)胞EMT中扮演著重要的角色，其具備臨床和生物學(xué)意義，可作為足細(xì)胞EMT的潛在靶點。雖然類似的分子藥物暫時并沒有出現(xiàn)在臨床上，但其在整體動物水平具有良好的干預(yù)效果，相信在不久的以后，它們將會成為最安全有效的治療藥物。

六、結(jié)語

EMT是胚胎發(fā)育和組織修復(fù)中的重要機(jī)制。EMT參與介導(dǎo)疾病的進(jìn)展，包括器官纖維化和癌癥。足細(xì)胞的損傷會使足細(xì)胞發(fā)生EMT，破壞腎小球的濾過屏障，引發(fā)蛋白尿，導(dǎo)致多種腎小球疾病的發(fā)生、發(fā)展。EMT是一個動態(tài)的轉(zhuǎn)變過程，引發(fā)EMT的信號通路有多種，對其中任一環(huán)節(jié)進(jìn)行干預(yù)都有可能會誘發(fā)新的疾病或產(chǎn)生新的治療靶點，阻斷足細(xì)胞EMT可能成為更好的治療腎小球疾病的方案。尋找更早期且精準(zhǔn)的靶點是今后要努力的方向。