保泰松片HPLC含量檢測方法的建立

李玲??陳乃江??姜燕

[摘要] 目的 建立保泰松片含量測定的HPLC方法。 方法 采用Phenomenex Luna C18（250 mm × 4.6 mm，5μm）色譜柱，流動相為乙腈-水（磷酸調(diào)pH至3.0）（70︰30），流速1.0mL/min，檢測波長為239nm，柱溫為室溫，進樣體積為10μL。結(jié)果 保泰松在9.65～96.50μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率為99.6%，RSD為0.7%（n=9），保泰松檢測限為2ng。 結(jié)論 該方法操作簡便、準確、靈敏度高、重復性好，可用于保泰松片的含量測定。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；保泰松片；含量測定；方法驗證

[中圖分類號] R927.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2015）17-61-03

HPLC method for content determination of phenylbutazone tablets

LI Ling CHEN Naijiang JIANG Yan

Lianyungang Institute for Drug Control， Lianyungang 222006， China

[Abstract] Objective To develop a method for the determination of phenylbutazone tablets by HPLC. Methods A Phenomenex Luna C18 column（250mm×4.6mm，5μm） was used， and the mobile phase was acetonitrile –water[adjusting pH to 3.0 with phosphoric acid] （70∶30）. The flow rate was 1.0mL/min and the detection wavelength was set at 239nm. The injection volume was 10μL. Results The linear range of phenylbutazone was 9.65-96.50μg/mL （r=0.9999）， the average recovery was 99. 6% and RSD was 0.7%（n=9）， the limit of detection was 2ng. Conclusion The method is simple， accurate with promising sensitivity and reproducibility， and can be used in the determination of phenylbutazone tablets.

[Key words] HPLC； Phenylbutazone tablets； Determination； Method verification

保泰松片為非甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥，用于治療類風濕性關(guān)節(jié)炎、風濕性關(guān)節(jié)炎及痛風。本品不良反應(yīng)發(fā)生率較高[1-4]，因此有必要建立一種準確、有效、快捷的含量測定方法。保泰松片的質(zhì)量標準收載于衛(wèi)生部藥品標準二部第5冊[5]，原標準中保泰松片的含量測定采用容量分析法。筆者查閱相關(guān)文獻[6]，有HPLC法測定保泰松片的含量，采用磷酸二氫鉀溶液作為緩沖鹽，流動相配制復雜，且對色譜柱有損害，會大大縮短色譜柱的使用壽命。本文選擇乙腈-水系統(tǒng)作為流動相，建立了高效液相色譜法測定保泰松片的含量，此法避免了使用緩沖鹽對色譜柱壽命的影響，且方法簡單、專屬性強、精密度高、重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 2695 高效液相色譜儀、Waters 2996 DAD檢測器，Empower 色譜工作站，Sartorius BP-211D 電子天平，PHS-3C型酸度計（上海精密科學儀器有限公司），BRANSON B5500S-MT型超聲儀。

1.2 試藥

對照品保泰松（批號100481-200601，含量99.9%）購自中國食品藥品檢定研究院；保泰松片[上海現(xiàn)代哈森（商丘）藥業(yè)有限公司，H41024168，規(guī)格為0.1 g，批號為13082702，1312280，14043002]；乙腈為色譜純（德國Merck公司），磷酸為分析純（國藥集團化學試劑股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

采用Phenomenex Luna C18（250mm ×4.6mm，5μm）色譜柱；流動相為乙腈-水（磷酸調(diào)pH至3.0）（70︰30）；流速為1.0mL/min；檢測波長為239nm；柱溫為室溫；進樣量為10μL。理論板數(shù)按保泰松峰計算不低于4000。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取保泰松對照品96.60mg，置100mL量瓶中，加甲醇超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。

精密量取對照品儲備液5mL置100mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

取樣品（批號13082702）20片，除去包衣后，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于保泰松50mg），置100mL量瓶中，加甲醇約70mL，超聲處理20min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備

取不含保泰松的空白輔料適量，按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。

2.5 專屬性考察

分別取對照品溶液，供試品溶液，陰性樣品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。從色譜圖可見，其他成分對保泰松的測定無干擾，保泰松的保留時間約為7.4 min。表明該方法專屬性良好。

圖1 對照品溶液（A）、樣品溶液（B）及陰性溶液（C）的液相色譜圖

2.6 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2”項下的對照品貯備液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0mL，分別置100mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，各精密吸取10μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標，以對照品質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標，制備標準曲線，得回歸方程：Y=29506X+21093，r=0.9999。表明保泰松在9.65～96.50 μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.7 穩(wěn)定性考察

取同一份供試品溶液（批號13082702），分別于0、2、4、6、8、12、16 h進樣，記錄色譜圖。結(jié)果保泰松峰面積RSD=0.5%，表明樣品在16h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 精密度考察

取同一份供試品溶液（批號13082702），連續(xù)進樣6次，測定保泰松峰面積。結(jié)果RSD=0.5%，表明儀器精密度良好。

2.9 重復性考察

取同一批樣品（批號13082702）6份，按“2.3”項下方法平行制備成供試品溶液，分別進樣。結(jié)果RSD=0.7%，表明方法的重復性良好。

2.10 加樣回收率試驗

取9份已測知含量的樣品（批號13082702）細粉，精密稱取適量（約相當于保泰松5mg），分別置20mL量瓶中，平均分成3組，分別精密加入對照品儲備液4、5、6mL，加甲醇適量，超聲處理20min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。精密吸取10μL，注入液相色譜儀，計算加樣回收率。結(jié)果本品低、中、高3個濃度的平均回收率（n=9）為99.6%，RSD=0.7%。說明本方法準確度好。加樣回收率試驗結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=9）

樣品含量

（mg） 加入量

（mg） 測得量

（mg） 回收率

（%） 平均回收率

（%） RSD

（%）

4.883 3.864 8.701 98.81 99.6 0.7

4.870 3.864 8.723 99.72

4.888 3.864 8.707 98.84

4.918 4.830 9.758 100.21

4.901 4.830 9.717 99.71

4.883 4.830 9.743 100.62

4.853 5.796 10.642 99.88

4.879 5.796 10.631 99.24

4.892 5.796 10.658 99.48

2.11 檢測限和定量限

精密吸取保泰松對照品溶液適量，加甲醇逐步稀釋至色譜圖中保泰松峰高分別為噪音的3倍和10倍，測得保泰松的檢測限和定量限分別為2ng和5ng。

2.12 樣品含量測定

取3批供試品，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，精密量取10μL，按外標法計算含量，3批樣品含量分別為97.1%，96.4%，98.6%。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

保泰松為吡唑烷二酮類化合物，在不同pH溶液中呈現(xiàn)不同的光譜吸收，在本文的偏酸性流動相色譜條件下，經(jīng)DAD檢測器在190～400nm的波長范圍內(nèi)進行掃描，發(fā)現(xiàn)保泰松在239 nm 波長處有最大吸收，因此選擇239nm作為檢測波長。

3.2 流動相的選擇

參考有關(guān)文獻資料[6-15]及相關(guān)書籍[16-18]，考慮流動相操作簡單方便，且對色譜柱損害最小原則，分別考察了甲醇-水、乙腈-水系統(tǒng)在不同pH條件下對峰型的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈-水系統(tǒng)優(yōu)于甲醇-水系統(tǒng)；試驗中以磷酸調(diào)節(jié)水pH分別為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0時對峰形的影響，結(jié)果表明當乙腈-水（pH 3.0）為70︰30時峰型最好，且基線平穩(wěn)，出峰時間適中。

3.3 提取條件的選擇

保泰松溶于乙醇或乙醚，幾乎不溶于水，考慮有機溶劑的性質(zhì)，選擇甲醇作為提取溶劑；同時考察超聲時間對提取效果的影響，發(fā)現(xiàn)超聲20min即能使有效成分溶出。故以此為提取條件。

3.4 耐用性試驗

改變色譜條件：乙腈初始濃度（±5%），流動相pH（±0.5），柱溫（±5℃），流速（±0.1mL/min），根據(jù)主峰理論板數(shù)和拖尾因子進行考察試驗條件的耐用性。經(jīng)試驗，以上變動均能滿足本試驗系統(tǒng)適用性要求，表明該方法耐用性良好。

本研究建立HPLC法測定保泰松片的含量，具有操作簡便，專屬性強，結(jié)果準確，重復性好的優(yōu)點，可以避免容量分析法的固有缺點，可作為保泰松片的定量分析方法。

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（收稿日期：2015-06-03）