HPLC法同時(shí)測(cè)定木香分氣丸中三種成分含量

王麗瓊

(樂(lè)山市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，四川 樂(lè)山 614000)

木香分氣丸制劑處方包含十六味藥材，主治寬胸消脹、理氣止嘔。臨床用于肝郁氣滯、脾胃不和所致的胸膈痞悶、兩肋脹滿、胃脘疼痛、倒飽嘈雜、惡心嘔吐、噯氣吞酸[1]。其功能與處方中陳皮(橙皮苷)、枳實(shí)(橙皮苷)、厚樸(和厚樸酚、厚樸酚)等相關(guān)，厚樸為君藥，陳皮和枳實(shí)為臣藥，對(duì)三者質(zhì)量進(jìn)行控制尤為重要，多組分同時(shí)測(cè)定可以更好地評(píng)價(jià)木香分氣丸的質(zhì)量[2-4]，木香分氣丸現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定內(nèi)容尚屬空白[5]，不利于質(zhì)量控制。參閱相關(guān)文獻(xiàn)，孫全明等[6]采用HPLC法測(cè)定木香分氣丸中丁香酚、木香烴內(nèi)酯、去氫木香烴內(nèi)酯、厚樸酚與和厚樸酚的含量；陳曉明等[7]采用HPLC同時(shí)測(cè)定木香分氣丸中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量；梁艷等[8]采用HPLC法測(cè)定木香分氣丸中橙皮苷的含量。綜上，無(wú)同時(shí)測(cè)定木香分氣丸中橙皮苷、和厚樸酚與厚樸酚3種成分的方法。本文建立HPLC法同時(shí)測(cè)定木香分氣丸中橙皮苷、和厚樸酚與厚樸酚3種成分的含量，為本品質(zhì)量控制提供一定參考。

1 儀器與試藥

美國(guó)安捷倫1260高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器；瑞士梅特勒-托利多XSE205電子分析天平；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)：110721-201818，純度：96.2%)、和厚樸酚對(duì)照品(批號(hào)：110730-201614，純度：99.3%)、厚樸酚對(duì)照品(批號(hào)：110729-201513，純度：98.8%)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。木香分氣丸(市售，甘肅佛仁制藥科技有限公司，批號(hào)分別為181101、180304；甘肅河西制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)為181001)。乙腈為色譜純，甲醇為色譜純和分析純，磷酸為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 混合對(duì)照品溶液的配制 取對(duì)照品橙皮苷75.92 mg，精密稱定，置于50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得橙皮苷對(duì)照品貯備液；精密稱取和厚樸酚對(duì)照品14.90 mg與厚樸酚對(duì)照品62.22 mg，置于25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得和厚樸酚與厚樸酚的混合對(duì)照品貯備液；精密量取該混合對(duì)照品貯備液5 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得和厚樸酚與厚樸酚的混合對(duì)照品稀釋溶液；精密量取橙皮苷對(duì)照品貯備液2 mL和混合對(duì)照品稀釋溶液5 mL，置于10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的配制 取本品，粉碎，取約3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率200 W，頻率40 kHz)1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.1.3 陰性樣品溶液的配制 按處方配制不含陳皮、枳實(shí)和厚樸的陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：Welch UltimateC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇(A)-乙腈(B)-0.3%磷酸溶液(C)，梯度洗脫程序見(jiàn)表1，檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm(橙皮苷)、290nm(和厚樸酚、厚樸酚)；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃。見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫程序

2.3 專屬性試驗(yàn)

取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液進(jìn)樣分析，根據(jù)保留時(shí)間和色譜圖定性。供試品溶液色譜圖中，在混合對(duì)照品溶液色譜圖中3個(gè)組分對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處有相同的色譜峰，見(jiàn)圖1；供試品溶液中3個(gè)組分峰的光譜圖與對(duì)照品溶液相應(yīng)保留時(shí)間處峰的光譜圖一致；陰性無(wú)干擾。

注：A.混合對(duì)照品；B.木香分氣丸樣品；C.陰性樣品；1.橙皮苷；2.和厚樸酚；3.厚樸酚

2.4 定量限試驗(yàn)

精密稱取三組分對(duì)照品各適量，用甲醇溶解并稀釋成一定濃度的溶液，按“2.2”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析。根據(jù)信噪比(S/N)=10，得橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚定量限分別為0.06、0.04、0.09 μg·mL-1。

2.5 線性與范圍考察

分別精密量取“2.1.1”項(xiàng)下橙皮苷對(duì)照品儲(chǔ)備液4、2、1、0.5、0.2、0.1 mL，混合對(duì)照品儲(chǔ)備液4、2、0.5、0.2、0.1 mL，分別置6個(gè)對(duì)應(yīng)的10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得6個(gè)線性濃度溶液，取6種溶液，按“2.2”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜。分別以三組分濃度c(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)分別為：橙皮苷A=16.809 5c+15.434 8，14.61～584.28 μg·mL-1，r=0.999 9；和厚樸酚A=15.390 9c+13.178 6，5.92～236.73 μg·mL-1，r=0.999 9；厚樸酚A=14.755 6c-6.923 6，24.59～983.57 μg·mL-1，r=0.999 9。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.1.1”項(xiàng)的混合對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)進(jìn)樣分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。三組分峰面積RSD分別為橙皮苷0.9%、和厚樸酚1.1%、厚樸酚0.7%，精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取木香分氣丸(批號(hào)181001)，照“2.1.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，平行6份，分別進(jìn)樣分析。結(jié)果橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的平均含量分別為4.127 5、0.768 2、1.5611 mg·g-1(n=6)，RSD分別為1.9%、1.3%、1.7%，方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取對(duì)照品橙皮苷61.12 mg，置于50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得橙皮苷對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密稱取和厚樸酚對(duì)照品11.52 mg與厚樸酚對(duì)照品24.58 mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品儲(chǔ)備液；取批號(hào)為181001的樣品(橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的含量分別為4.129 1，0.767 8，1.560 4 mg·g-1)約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入5 mL橙皮苷對(duì)照品儲(chǔ)備液和1 mL混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，按“2.1.2”項(xiàng)制備供試品溶液，平行制備6份，按“2.2”項(xiàng)進(jìn)樣分析，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表2，表明加樣回收率良好。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取批號(hào)181001的樣品溶液，室溫放置，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣分析，記錄峰面積。橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚峰面積RSD(n=6)分別為0.8%、0.6%、1.1%，表明在常溫條件下樣品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 含量測(cè)定

取木香分氣丸3批，每批平行3份，照“2.1.2”項(xiàng)制備供試品溶液，照“2.2”項(xiàng)色譜條件分析，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果 (mg·g-1，n=3)

3 討論

3.1 色譜條件考察

參考橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的紫外光譜圖：橙皮苷在284 nm波長(zhǎng)有吸收峰；和厚樸酚、厚樸酚在290 nm波長(zhǎng)有吸收峰。經(jīng)過(guò)考察，最后選擇雙通道檢測(cè)(284 nm：橙皮苷；290 nm：和厚樸酚與厚樸酚)。

中藥成分復(fù)雜，各組分理化性質(zhì)不一致，采用有機(jī)相40%等度洗脫時(shí)，供試品溶液中橙皮苷不能被有效分離，采用梯度洗脫能很好分離；比較乙腈和甲醇對(duì)分離的影響，乙腈條件下各組分出峰快，峰窄，甲醇條件下基線較平穩(wěn)，經(jīng)過(guò)考察，采用乙腈-甲醇-0.3%磷酸溶液三相梯度洗脫，三組分峰保留時(shí)間適中，分離度好。

3.2 結(jié)論

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提倡多指標(biāo)成分含量測(cè)定，以更全面地體現(xiàn)中藥質(zhì)量，中藥成分復(fù)雜，各組分間性質(zhì)差異大，紫外吸收各異，采用多波長(zhǎng)可以實(shí)現(xiàn)多組分同時(shí)檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)采用雙通道HPLC法同時(shí)測(cè)定木香分氣丸中橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的含量，直接超聲提取，操作簡(jiǎn)單，經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，專屬性、進(jìn)樣精密度和加樣回收率結(jié)果好，可作為木香分氣丸中3個(gè)組分的含量測(cè)定方法。