麗格海棠的組織培養(yǎng)與快速繁殖研究

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院）園藝研究所，山西 太原 030031）

近年來，我國園林化城市快速發(fā)展，越來越多的苗木植株被廣泛運(yùn)用于景觀設(shè)計(jì)與園林建設(shè)中，麗格海棠是常見的品種之一。由于其具有較高的觀賞價(jià)值，深受廣大民眾和設(shè)計(jì)者的喜愛，所以，越來越具有較大的市場潛力[1]。但由于麗格海棠特殊的生長條件，其不適合長途運(yùn)輸，且在初期繁殖的數(shù)量有限，成為諸多城市景觀運(yùn)用的缺憾。為了能夠有效解決該問題，對(duì)麗格海棠進(jìn)行組織培養(yǎng)和快速繁殖是一個(gè)有效的途徑。

1 植物名稱

麗格海棠又名為玫瑰海棠。

2 外植體滅菌處理

每年4 月份，將當(dāng)年多年生老株上春季新生長出的麗格海棠莖尖、葉柄及新葉作為試驗(yàn)的材料標(biāo)本，并分步進(jìn)行操作：一是將麗格海棠葉片切成小片，二是將麗格海棠葉柄切成小段。隨后取出切割好并進(jìn)行傷口靜晾過的試驗(yàn)標(biāo)本，將葉柄和葉片浸泡在70%的乙醇中30s，之后將乙醇倒掉，再將其分散浸泡在0.2%的HgCl 中，浸泡時(shí)間為3min，輕輕取出葉片和葉柄切段標(biāo)本，用無菌水沖洗。而后浸泡在0.1%的HgCl 中，時(shí)間為5min，然后用無菌水反復(fù)沖洗，在整個(gè)過程中，不斷輕輕搖晃三角瓶，保證其浸泡徹底[2]。

3 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件

MS、3%的蔗糖和0.75%的瓊脂為麗格海棠葉片和葉柄切征組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基，pH 值為5.8。將不同濃度和種類的植物生長調(diào)節(jié)劑添加在不同的培養(yǎng)階段，培養(yǎng)溫度為（24±2）℃，光照強(qiáng)度為2200～2900Lx，每天光照時(shí)間為13h。

4 結(jié)果和分析

4.1 比較麗格海棠莖尖、葉柄、葉的脫分化程度

在MS+6-BA4.0 mg/L+IBA1.0 mg/L 培養(yǎng)基上，分別接種麗格海棠莖尖、葉柄、葉，在對(duì)其進(jìn)行為期3 周的培養(yǎng)基培養(yǎng)后觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基上首先膨大的是莖尖外植體，并且有部分標(biāo)本上長出了愈傷組織塊。

對(duì)其培養(yǎng)5 周后觀察可見，麗格海棠的葉片外植體大部分長出了愈傷組織塊，而且隨著愈傷組織的不斷增大，呈現(xiàn)疏松的顆粒狀黃綠色狀態(tài)[3]。

通過對(duì)每個(gè)周期3 種標(biāo)本培養(yǎng)基培進(jìn)行觀察后發(fā)現(xiàn)，麗格海棠莖尖、葉柄、葉3 種外植體都能夠長出愈傷組織。但最容易脫分化的是莖尖，其次是葉柄，且莖類和葉柄這2 種外植體脫分化誘導(dǎo)率為100%。最后是最難誘導(dǎo)的麗格海棠葉片，原因一是生長周期長，二是誘導(dǎo)率低，葉片外植體僅有71.4%的誘導(dǎo)率。由此可見，麗格海棠的葉片組織分化強(qiáng)度高，相對(duì)來說，莖尖和葉柄組織分化程度低（見表1）。

表1 比較麗格海棠莖尖、葉柄、葉脫分化程度

4.2 誘導(dǎo)麗格海棠葉柄外植體愈傷組織受6-BA 的影響研究

在不同濃度6-BA 的MS+6-BA4.0 mg/L+IBA1.0mg/L 培養(yǎng)基上，接種培養(yǎng)滅菌過的部分麗格海棠葉柄外植體，觀察和分析誘導(dǎo)麗格海棠葉柄外植體愈傷組織，受不同濃度6-BA 的影響（見表2）。發(fā)現(xiàn)6-BA 濃度的不同，在誘導(dǎo)麗格海棠葉柄方面存在差異，在沒有6-BA 的培養(yǎng)基上，不能夠誘導(dǎo)出愈傷組織。但隨著6-BA 濃度的不斷增加，明顯提高了麗格海棠葉柄愈傷組織的誘導(dǎo)率和增值率。但較高濃度的6-BA，又會(huì)對(duì)麗格海棠葉柄愈傷組織的誘導(dǎo)和增殖起到抑制作用。通過觀察發(fā)現(xiàn)，麗格海棠葉柄愈傷組織最大誘導(dǎo)率、增值率、效果最好是在6-BA 濃度為4.0mg/L。由此可見，較為理想的麗格海棠誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+6-BA4.0mg/L+IBA1.0mg/L。

表2 誘導(dǎo)麗格海棠葉柄外植體愈傷組織受6-BA 的影響

4.3 麗格海棠愈傷組織分化增殖受6-BA 影響分析

在不同濃度的6-BA 分化培養(yǎng)基上，分化培養(yǎng)誘導(dǎo)成功的麗格海棠愈傷組織塊，觀察和分析麗格海棠愈傷組織分化發(fā)芽受不同濃度外源激素6-BA 的影響（見表3）。通過對(duì)該表的數(shù)據(jù)分析能夠發(fā)現(xiàn)，麗格海棠愈傷組織分化在不同濃度6-BA 中的效應(yīng)存在差異。隨著6-BA 濃度不斷增加，也相應(yīng)提高了麗格海棠芽的分化率和產(chǎn)芽量。但當(dāng)6-BA 濃度超過1.5mg/L 時(shí)，對(duì)麗格海棠芽分化起到了顯著抑制作用，可是在這一情況下，卻增加了麗格海棠愈傷組織的生長。

當(dāng)6-BA 濃度呈現(xiàn)值為0.5mg/L 時(shí)，麗格海棠芽分化率能夠高達(dá)91.89%，并且生長速度也是最快的。由此試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以得出，將帶有叢芽的麗格海棠愈傷組織塊切成小塊后，對(duì)這些小塊進(jìn)行繼代培養(yǎng)[4]，每間隔25d進(jìn)行1 次繼代培養(yǎng)，不僅具有較高的增值率，而且能夠有效實(shí)現(xiàn)麗格海棠培育和快速繁殖工廠化的生產(chǎn)目標(biāo)。

表3 麗格海棠愈傷組織分化增殖受6-BA 的影響

4.4 生根培養(yǎng)

隨后將麗格海棠叢芽切成2.5cm 長的單芽，在生根培養(yǎng)基上接種這些單芽，再經(jīng)過25d 的生根培養(yǎng)，觀察和分析在不同培養(yǎng)基上這些單芽的生長情況（見表4）。通過觀察試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，IBA 0.2～0.5mg/L 和NAA 能夠有效促進(jìn)麗格海棠單芽快速生根。由于NAA能夠使麗格海棠根形態(tài)變得粗短，IBA 0.2～0.5mg/L 能夠使麗格海棠根的形態(tài)變得細(xì)長，而且NAA 價(jià)格較便宜。因此，從經(jīng)濟(jì)角度上而言，通常情況下麗格海棠生根培養(yǎng)基的首選是MS+NAA0.2mg/L。

表4 麗格海棠生根受外源激素的影響

4.5 試管苗移栽

在芽株生根培養(yǎng)周期結(jié)束后，可采用20℃的水對(duì)生根比較好的麗格海棠試管苗進(jìn)行清洗，將珍珠巖和腐葉土以2∶3 的比例充分混和之后晾曬1d，將清洗干凈的試管苗移栽到配好的基質(zhì)上，澆水，其放置在陰涼處4d，之后將其移置存放在40%的遮蔭溫棚中進(jìn)行培育。遮蔭棚溫度控制在18～25℃，濕度控制在90%，2 周后試管苗移栽成活率高達(dá)93%。通過多次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，麗格海棠試管苗移栽成功的關(guān)鍵是要控制好其周圍的溫濕度，保持濕潤的栽培基質(zhì)和空氣，并要進(jìn)行良好的通風(fēng)[5]。

5 結(jié)語

綜上所述，麗格海棠適合在濕潤、溫暖、半陰的環(huán)境中生長，而且不耐高溫，對(duì)土壤的要求是微酸性和疏松肥沃。麗格海棠組織培養(yǎng)和快速繁殖是提高苗株應(yīng)用率，走向工廠化生產(chǎn)的關(guān)鍵，其中的重點(diǎn)是提高移栽成活率，該試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以為麗格海棠的組織培養(yǎng)和快速繁殖工廠化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。