蒙藥山沉香化學(xué)成分的鑒測

奧·烏力吉，王青虎，代那音臺 （華中科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，湖北 武漢430074；.內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼08000）

山沉香系木犀科植物賀蘭山丁香（Syringapinnatifolia flemsl.var.alashanensis Ma et S.Q.Zhou）除去皮的干燥根和枝干，具有鎮(zhèn)“赫依”、清熱、止痛、平喘等功效，主治心“赫依”熱、氣喘、失眠、心跳、心絞痛等癥，主要分布于我國的內(nèi)蒙古阿拉善盟賀蘭山水源涵養(yǎng)林保護(hù)區(qū)［1－2］。早在幾百年前阿拉善地區(qū)民間蒙醫(yī)藥人員就發(fā)現(xiàn)山沉香并用于防病治病，經(jīng)過歷年的蒙醫(yī)臨床實(shí)踐，表明山沉香的藥理作用與沉香十分相近，在某些方面可能還勝過沉香，作為一味名貴藥材馳名區(qū)內(nèi)外，滿足了青海、甘肅、西藏、新疆、遼寧、內(nèi)蒙古等省區(qū)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)臨床用藥的需求，并受到蒙古國等國際傳統(tǒng)醫(yī)藥界的關(guān)注。目前，山沉香化學(xué)成分研究報(bào)道較少［3－7］，從山沉香揮發(fā)油中分離出34種成分。為了充分闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，開發(fā)和利用山沉香藥用資源，本實(shí)驗(yàn)對山沉香石油醚和氯仿萃取物的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究。

1 材料

硅膠（青島海洋化工廠，200～300目）；Sephadex LH－20（Pharmacia公司）；硅膠H－TLC 薄層預(yù)制板（青島海洋化工廠）；氘代試劑為Cambridge Isotope Laboratories，InC；柱色譜試劑規(guī)格均為分析純，其中所用石油醚為中沸程（60～90℃）；色譜層析用化學(xué)試劑為沈陽化學(xué)試劑廠、天津協(xié)和公司、J.T.Baker、天津康科德科技有限公司產(chǎn)品；分析型色譜柱為Shinadzu Vp－ods 150 mm×4.6 mm7022402；制備型色譜柱為YMC C18reversed phase column5μm，10 mm×250 mm。山沉香采集于內(nèi)蒙古阿拉善盟，經(jīng)內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院蒙藥教研室布和巴特爾教授鑒定均為木犀科丁香屬植物賀蘭山丁香的根、枝干。

2 提取與分離

取山沉香2.5 kg，用10倍量95%乙醇回流提取3次，每次4 h。提取液減壓濃縮除去醇后加水制成水混懸液，分別用石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取，各萃取3次，回收溶劑得到石油醚萃取物100 g、氯仿萃取物200 g、醋酸乙酯萃取物80 g和正丁醇萃取物40 g。石油醚萃取部分（50 g）加60 g硅膠（160～200目）拌樣，充分干燥，上硅膠柱色譜分離，氯仿－醋酸乙酯梯度洗脫，經(jīng)薄層檢查合并為8 個(gè)流份。流份4（100 mg）再拌樣上硅膠柱色譜，以氯仿－醋酸乙酯（40∶1）洗脫，得化合物1（10 mg）；流份6（200 mg）以氯仿－醋酸乙酯（30∶1）洗脫，得化合物8（15 mg）和化合物9（12 mg）；氯仿萃取部分（50 g）加50 g硅膠（160～200目）拌樣，充分干燥，上硅膠柱色譜分離，氯仿－丙酮梯度洗脫，經(jīng)薄層檢查合并為12個(gè)流份。流份4（80 mg）再拌樣上硅膠柱色譜，以氯仿－丙酮（60∶1）洗脫，得化合物2（14 mg）；流份5（100 mg）以氯仿－丙酮（40∶1）洗脫，得化合物3（20 mg）和化合物4（18 mg）；流份8（150 mg）以氯仿－丙酮（30∶1）洗脫，得化合物5（23 mg）和化合物6（16 mg）。流份10經(jīng)反復(fù)LH－20柱色譜分離得化合物7（12 mg），同時(shí)母液經(jīng)反相ODS柱色譜，甲醇－水（45∶55）洗脫，得化合物10。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色針狀結(jié)晶（氯仿），紫外光365 nm 下顯藍(lán)色熒光，254 nm 下有暗斑。在1H－NMR 中δ：6.27（1H，d，J＝9.5 Hz，H－3）和7.66（1H，d，J ＝9.5 Hz，H－4）的存在，說明該化合物是一種香豆素類化合物。在δ7.39（1H，d，J ＝8.3 Hz，H－5），6.86（1H，d，J ＝8.3 Hz，H－6），6.83（1H，brs，H－8）的信號構(gòu)成ABX 偶合系統(tǒng)，說明香豆素母核苯環(huán)上是一取代結(jié)構(gòu)，δ3.88（3H，s，7－OCH3），示有一甲氧基存在。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)［8］結(jié)合分析，確定該化合物為7－甲氧基香豆素。

化合物2：淡黃色針狀結(jié)晶（氯仿），紫外光下顯藍(lán)色熒光，三氯化鐵－鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，表明可能會有酚羥基存在。由δ7.87（1H，d，J＝9.3 Hz，H－3），6.16（1H，d，J＝9.3 Hz，H－4）知3，4位無取代的一種香豆素類化合物，δ 6.97（1H，s，H－5），6.72（1H，s，H－8）知6，7位取代。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，確定該化合物為6，7－羥基香豆素。

化合物3：淡黃色針狀結(jié)晶（氯仿），紫外光下顯藍(lán)色熒光。在1H－NMR 中δ：6.21（1H，d，J ＝9.5 Hz，H－3），7.95（1H，d，J ＝9.5 Hz，H－4）的存在，說明該化合物是一種香豆素類化合物。在δ7.54（1H，d，J＝8.5 Hz，H－5），6.81（1H，dd，J＝8.5 Hz，J＝2.0 Hz，H－6），6.71（1H，d，J＝2.0 Hz，H－8）的信號構(gòu)成ABX 偶合系統(tǒng)，說明香豆素母核苯環(huán)上是一取代結(jié)構(gòu)，δ10.56（1H，s），示有7－羥基的存在。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)［10］結(jié)合，確定該化合物為7－羥基香豆素。

化合物4：白色針晶（丙酮），紫外光下顯暗斑。1H－NMR（600 MHz，CD3OD）δ：9.65（1H，d，J＝7.8 Hz，H－9），7.40（1H，d，J＝15.6 Hz，H－7），7.12（1H，dd，J＝8.4，1.8 Hz，H－6），7.07（1H，d，J＝1.8 Hz，H－2），6.96（1H，d，J＝8.4 Hz，H－5），6.60（1H，dd，J＝15.6，7.8 Hz，H－8），3.82（3H，s，－OCH3），13C－NMR（150 MHz，CD3OD）δ：193.6（C－9），153.0（C－4），146.9（C－7），148.9（C－3），126.6（C－8），124.0 （C－6），114.9 （C－5），109.4 （C－2），56.0（－OCH3），以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致［11］，鑒定為松柏醛。

化合物5：黃色針狀結(jié)晶（甲醇），紫外光（365 nm）下顯淡藍(lán)色熒光，254 nm 下有暗斑。在1H－NMR中δ：7.44（1H，d，J＝16 Hz）和6.19（1H，d，J＝16 Hz）的存在，提示該化合物結(jié)構(gòu)中有反式烯氫。在δ6.94（1H，d，J＝8.1 Hz），6.76（1H，d，J＝8.1 Hz），7.01（1H，brs）的 信號構(gòu)成ABX 偶合系統(tǒng)，說明苯環(huán)上是三取代結(jié)構(gòu)。δ12.6（1H，s，－COOH），示有一羧基存在。根據(jù)以上數(shù)據(jù)并經(jīng)參考文獻(xiàn)［12］與咖啡酸對照品TLC 鑒別得到證實(shí)，故推斷該化合物為咖啡酸。

化合物6：白色針晶（甲醇），紫外光（365 nm）下顯淡藍(lán)色熒光，254 nm 下有暗斑。在1H－NMR 中δ：7.51（1H，d，J＝15.9 Hz，H－7）和6.38（1H，d，J＝15.9 Hz，H－8）的存在，提示該化合物結(jié)構(gòu)中有反式烯氫。在δ6.78（1H，d，J＝8.1 Hz，H－5），7.08（1H，dd，J＝8.1，1.5 Hz，H－6），7.27（1H，d，J＝1.5 Hz，H－2）的信號構(gòu)成ABX 偶合系統(tǒng)，說明苯環(huán)上是三取代結(jié)構(gòu)。δ12.15（1H，s，－COOH），9.58（1H，s，－OH），示有一羧基和一羥基的存在。根據(jù)以上數(shù)據(jù)并經(jīng)參考文獻(xiàn)［10］與阿魏酸對照品TLC 鑒別得到證實(shí)，故推斷該化合物為阿魏酸。

化合物7：白色針狀結(jié)晶（丙酮），紫外光（365 nm）下顯淡藍(lán) 色 熒 光，254 nm 下 有 暗 斑。在1H－NMR 中δ：6.58（1H，d，J＝15.9 Hz，H－8）和7.63（1H，d，J＝15.9 Hz，H－7）的存在，提示該化合物結(jié)構(gòu)中有反式烯氫。在δ7.43（3H，t，H－3，4，5），7.72（2H，m，H－2，6，7.27）的信號的存在并結(jié)合6個(gè)芳香碳信號，說明苯環(huán)上是一取代結(jié)構(gòu)。δ 167.6（C－9），示有羧基的存在。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］與肉桂酸對照品TLC鑒別得到證實(shí)，故鑒定為肉桂酸。

化合物8：黃色膠狀物，10% 香草醛H2SO4乙醇溶液顯色斑 點(diǎn) 為 紅 色。在1H－NMR 中δ6.58 （2H，d，J＝1，8 Hz），6.65（2H，d，J＝7.8 Hz），6.53（2H，dd，J＝7.8，1.8 Hz）的信號構(gòu)成ABX 偶合系統(tǒng)，說明該化合物結(jié)構(gòu)中三取代對稱苯環(huán)的存在。在13C－NMR 中芳香區(qū)給出δ133.8，113.4，145.5，148.8，115.8，122.7的6個(gè)碳信號，這進(jìn)一步證實(shí)了上面結(jié)構(gòu)的存在，同時(shí)與文獻(xiàn)［14－15］報(bào)道的這類化合物波譜數(shù)據(jù)的比較確定該化合物為3，3′－二甲氧基－4，4′，9，9′－四羥基簡單木脂素。

化合物9：黃色膠狀物，10%香草醛H2SO4乙醇溶液顯色斑 點(diǎn) 為 紅 色。在1H－NMR 中δ6.59 （2H，d，J＝1，8 Hz），6.81（2H，d，J＝7.8 Hz），6.63（2H，dd，J＝7.8，1.8 Hz）的信號構(gòu)成ABX 偶合系統(tǒng)，說明該化合物結(jié)構(gòu)中三取代對稱苯環(huán)的存在。在13C－NMR 中芳香區(qū)給出δ132.4，111.3，143.8，146.4，114.1，121.7的6個(gè)碳信號，這進(jìn)一步證實(shí)了上面結(jié)構(gòu)的存在，同時(shí)與文獻(xiàn)［14－15］報(bào)道的這類化合物波譜數(shù)據(jù)的比較確定該化合物為3，4（3′，4′）－二亞甲二氧基－9，9′－二羥基簡單木脂素。

化合物10：淡黃色粉末（甲醇），紫外光365 nm 下顯藍(lán)色熒光，254 nm 下有暗斑。在1H－NMR 中δ：6.31（1H，d，J＝9.6 Hz，H－3）和7.98（1H，d，J＝9.6 Hz，H－4）的存在，說明該化合物是一種香豆素類化合物。在δ7.63（1H，d，J＝8.4 Hz，H－5），7.06（1H，dd，J＝8.4，2.4 Hz，H－6），7.03（1H，d，J ＝2.4 Hz，H－8）的信號構(gòu)成ABX 偶合系統(tǒng)，說明香豆素母核苯環(huán)上是一取代結(jié)構(gòu)。糖區(qū)給出1個(gè)葡萄糖和1個(gè)木糖的碳信號分別為）、δ68.4（C－6′）和δ104.1（C－1″）、δ73.5（C－2″）、δ76.7（C－3″）、δ69.6（δ100.1（C－1′）、δ73.2（C－2′）、δ75.8（C－3′）、δ69.5（C－4′）、δ76.4（C－5′C－4″）、δ65.8（C－5″），并且在1H－NMR 譜中給出了端基質(zhì)子信號δ4.99（1H，d，J＝7.2 Hz）和4.14（1H，d，J＝7.8 Hz），顯示為β糖苷鍵。在HMBC譜中δ4.99（1H，d，J＝7.2 Hz）與δ160.3（C－7）和4.14（，d，J＝7.8 Hz）與δ68.4（C－6′）分別相關(guān)，說明內(nèi)源糖連接在7位而外源糖連接在內(nèi)源糖6′位。將核磁數(shù)據(jù)進(jìn)行歸屬后與文獻(xiàn)［16］對照基本一致，鑒定為O－［β－D－xylopyranosyl（1－6）β－D－glucopyranosyl］－7－h(huán)ydroxycoumarin。

4 討論

目前，對山沉香化學(xué)成分有一些研究報(bào)道，主要是對其揮發(fā)油成分和其他化學(xué)成分的初步探討。本文通過對山沉香95%乙醇回流提取，提取液減壓濃縮除去醇后制成水的混懸液，然后用石油醚和氯仿萃取。對石油醚和氯仿萃取物采用不同色譜法進(jìn)行系統(tǒng)分離，通過運(yùn)用各種波譜法和標(biāo)準(zhǔn)品對照法鑒定了分離所得化合物的結(jié)構(gòu)。為該藥的進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用研究提供了科學(xué)依據(jù)。

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