重組豬干擾素α對(duì)急性病毒性腹瀉仔豬腎臟損傷的保護(hù)作用研究

周煒，夏兵兵，吳博，何志遠(yuǎn)，蔣敏之，許智勇，趙俊,3*，王明麗,3*

(1.蕪湖英特菲爾生物制品產(chǎn)業(yè)研究院有限公司，安徽蕪湖 241000；2.安徽醫(yī)科大學(xué)科教大樓生物工程實(shí)驗(yàn)室，合肥 230032；3.蕪湖天明生物技術(shù)有限公司,安徽蕪湖 241000)

豬流行性腹瀉(porcine epidemic diarrhea，PED)是由冠狀病毒屬中的豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的仔豬以嘔吐、水樣腹瀉、脫水、厭食和迅速消瘦衰竭為臨床特征，以腸道擴(kuò)張、腸壁變薄、胃腸道出血和腸系膜淋巴結(jié)腫脹為主要病理變化的高度接觸性傳染病。1971年，英國首次報(bào)道了該病。我國于1976年首次報(bào)道，于1980年首次分離到 PEDV。2009年，韓國報(bào)道了 PEDV 毒株S基因發(fā)生變異。該病可感染所有階段的豬，7日齡內(nèi)仔豬感染后損傷最為嚴(yán)重，死亡率高達(dá)100%，育肥豬感染后出現(xiàn)腹瀉、消瘦，母豬則表現(xiàn)腹瀉、無乳等癥狀[1-2]。我國自2010年以來，PEDV感染呈現(xiàn)大面積爆發(fā)并伴有高致死率[3]，已對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重危害[4]。干擾素(interferon，IFN)作為一種常用的廣譜抗病毒藥物，刺激機(jī)體產(chǎn)生成百上千種的干擾素刺激基因(IFN-stimulated gene，ISG)產(chǎn)物，具有抗病毒、抑制增殖和免疫調(diào)節(jié)功能，但不是直接滅活病毒，而是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生多種具有抗病毒作用的蛋白質(zhì)，抑制病毒蛋白的合成，適用于病毒性傳染病的緊急預(yù)防和早期治療。

研究表明，PEDV引發(fā)的腹瀉可導(dǎo)致仔豬體內(nèi)的蛋白質(zhì)代謝紊亂，腹瀉仔豬的血清球蛋白、尿素和肌酐水平顯著升高(P<0.05)，在引起腹瀉造成哺乳仔豬的腸道損傷的同時(shí)，通過對(duì)感染PEDV病毒仔豬的小腸和肝腎組織切片對(duì)比觀察發(fā)現(xiàn)，被感染仔豬除了腸道中小腸絨毛萎縮，大量炎性細(xì)胞浸潤外，肝腎組織也出現(xiàn)了不同程度的損傷，如肝細(xì)胞局部變性壞死，腎小球充血、腎小管上皮細(xì)胞脫落壞死等[5]。

目前尚無有效藥物治療PED，臨床主要以止瀉、補(bǔ)液等對(duì)癥治療手段維持仔豬存活，但往往預(yù)后不良，常以發(fā)育遲緩的“僵豬”為結(jié)局，經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重。本研究模擬PEDV自然糞口感染途徑，建立了人工感染PEDV哺乳仔豬急性腹瀉模型。在此模型上，采用了自行研制的重組豬干擾素α(recombinant porcine interferon α，rPoIFNα)進(jìn)行抗病毒治療，以觀察評(píng)價(jià)該生物制劑對(duì)哺乳仔豬病毒性腹瀉導(dǎo)致腎臟損傷的保護(hù)性治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)仔豬購自江蘇句容康榮有限公司。選擇10日齡健康三元哺乳仔豬，體重2.75±0.25 kg，雌雄兼用。對(duì)備選試驗(yàn)仔豬采集肛拭子樣本，使用RT-PCR檢測樣本TGEV S基因、PEDV M基因和PoRV VP7基因片段；采集試驗(yàn)豬血樣，使用中和試驗(yàn)方法-固定病毒稀釋血清法對(duì)上述病毒的中和抗體進(jìn)行檢測，中和抗體≤1∶2為陰性。核酸片段和抗體檢測均為陰性的試驗(yàn)豬方可使用。

1.1.2 病毒株 PEDV由實(shí)驗(yàn)室自行分離并測序鑒定，病毒滴度為1.0×105.5TCID50/mL。

1.1.3 重組豬干擾素α(凍干型) 安徽九川生物科技有限公司提供，批號(hào)20190301，100萬單位/頭份，用2 mL生理鹽水溶解。

1.1.4 主要試劑和耗材 痢菌凈(乙酰甲喹)、頭孢噻呋鈉、復(fù)合維生素B注射液，均購自合肥中龍神力動(dòng)物藥業(yè)有限公司；核酸提取試劑盒(9766)和逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(6110A)，均購自TaKaRa公司；5 mL無菌采血管、注射器、籠具。

1.1.5 試驗(yàn)地點(diǎn)及基本條件 飼養(yǎng)試驗(yàn)在潔凈良好的動(dòng)物房中完成(安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。仔豬采取隔離飼養(yǎng)方式，一豬一籠；試驗(yàn)期間保持通風(fēng)良好，維持室溫在為25～30 ℃，環(huán)境濕度為40%～80%。

1.2 試驗(yàn)分組及動(dòng)物飼養(yǎng)

1.2.1 動(dòng)物分組 選取試驗(yàn)仔豬15頭，隨機(jī)分組備用。一組為rPoIFNα治療組，5頭；一組為PEDV感染對(duì)照組，5頭；一組為正常對(duì)照組5頭。三組仔豬飼養(yǎng)條件均相同。

1.2.2 動(dòng)物飼養(yǎng) 將7日齡仔豬單只隔離后，使用人工配制乳(幼兒奶粉、嬰兒大米粉、葡萄糖)飼喂，適應(yīng)性喂養(yǎng)3日。在此期間，可觀察并淘汰因運(yùn)輸過程出現(xiàn)擠壓受傷、因人工配制乳不耐受出現(xiàn)嘔吐或腹瀉癥狀以及無法自主從人工自制喂乳器吸食的仔豬。每日飼喂6次，攻毒當(dāng)日飼喂5次(含10%葡萄糖溶液補(bǔ)飼)，間隔3 h飼喂一次，以自制喂養(yǎng)器(洗耳球尖端剪斷后安裝在去掉針頭的注射器頭部，可對(duì)仔豬進(jìn)食量進(jìn)行準(zhǔn)確控制并煮沸消毒。讓仔豬自行吸食。同時(shí)在人工配制乳中添加復(fù)合維生素B，每日1次，0.2 mL/頭。

1.3 攻毒及治療方案

1.3.1 人工感染PEDV的劑量與途徑 攻毒前仔豬禁食不禁水12 h，模擬自然感染途徑經(jīng)口飼喂接種病毒。rPoIFNα治療組和PEDV感染對(duì)照組仔豬接種PEDV病毒懸液4 mL，正常對(duì)照組同時(shí)經(jīng)口接種等量生理鹽水。

1.3.2 重組豬干擾素α(凍干型)治療方案 rPoIFNα治療組仔豬在飼喂接種病毒8 h后，每頭豬給予頸部肌肉注射1頭份劑量的重組豬干擾素α(凍干型)，間隔24 h再注射一次，連續(xù)注射三次，并同時(shí)給予輔助治療；PEDV感染對(duì)照組仔豬則給予rPoIFNα治療組同等的輔助治療，但不注射重組豬干擾素α(凍干型)，每頭豬給予肌肉注射等量2 mL滅菌生理鹽水，間隔24 h再注射一次，連續(xù)注射三次。

1.3.3 防治細(xì)菌繼發(fā)感染 仔豬剛出現(xiàn)嘔吐或腹瀉癥狀時(shí)，對(duì)PEDV感染對(duì)照組和rPoIFNα治療組所有仔豬同時(shí)肌肉注射痢菌凈，劑量為每次2 mg/kg，每日2次，間隔12 h；仔豬攻毒24 h后對(duì)兩組的所有仔豬增加肌肉注射頭孢噻呋鈉，每次3 mg/kg，每日2次，間隔12 h。

1.3.4 糾正脫水 仔豬中開始出現(xiàn)嘔吐或腹瀉癥狀時(shí)，即給予口服補(bǔ)液鹽水，仔豬自由飲用。

1.4 觀察、檢測指標(biāo)及方法

1.4.1 臨床觀察、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及樣本采集 逐日對(duì)每只仔豬仔細(xì)觀察和詳細(xì)記錄各種臨床癥狀出現(xiàn)的時(shí)間至接種病毒后72 h，在第72 小時(shí)進(jìn)行前腔靜脈采血2 mL/頭和膀胱穿刺取尿5 mL/頭，隨后將仔豬麻醉處死并剖檢，觀察腸道腎臟組織臟器標(biāo)本的大體外觀變化和組織病理變化，對(duì)血液和尿液樣本進(jìn)行生化指標(biāo)檢測。

1.4.2 糞便形態(tài)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 參考人用布里斯托大便分類法[6]，設(shè)定人工感染仔豬流行性腹瀉病毒模型腹瀉指數(shù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)(表1)，以腹瀉指數(shù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)達(dá)到2分以上(含2分)為仔豬具有流行性腹瀉發(fā)病癥狀。

表1 腹瀉指數(shù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Tab 1 Diarrhea index scoring criteria

1.4.3 治療有效率臨床判定標(biāo)準(zhǔn) 有效：觀察至攻毒后第72 小時(shí)，PEDV感染對(duì)照組3頭以上(含3頭)仔豬發(fā)病腹瀉指數(shù)達(dá)到3分，rPoIFNα治療組腹瀉指數(shù)降為2分或以下；無效：觀察至攻毒后第72 小時(shí)，PEDV感染對(duì)照組3頭以上(含3頭)仔豬腹瀉指數(shù)達(dá)到2分或以上，rPoIFNα治療組腹瀉指數(shù)較對(duì)照組不降低。有效率=(rPoIFNα治療組有效數(shù)-PEDV感染對(duì)照組未發(fā)病數(shù))/PEDV感染對(duì)照組發(fā)病數(shù)×100%。

1.5 組織病料病毒核酸檢測 剖檢rPoIFNα治療組、PEDV感染對(duì)照組和正常對(duì)照組仔豬，分別采集其小腸及腎皮質(zhì)組織，凍存于-80 ℃，備用。將組織病料剪碎后用0.01 mol/L PBS按1∶10體積稀釋后勻漿，并置-80 ℃反復(fù)凍融三次；凍融后的樣品4 ℃、12000 g離心15 min，收集上清液并用0.22 μm濾器過濾除菌后，RT-PCR檢測PEDV M基因。PEDV M基因擴(kuò)增引物序列：F1：5’-AACGGTTCTATTCCCGTTGATG-3’；R1：5’-TAAATGAAGCACTTTCTCACTATC-3’，預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物大小663 bp；內(nèi)參β-acting基因擴(kuò)增引物序列：F2：5’-CCACTGGCATTGTCATGGAC；R2：5’-GAAGAGCGCCTCTGGACAC-3’，預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物大小344 bp，以上引物序列均由大連寶生物工程(大連)有限公司合成。將PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測觀察結(jié)果，出現(xiàn)陽性條帶送深圳華大基因生物科技有限公司測序。

1.6 數(shù)據(jù)處理 采用t檢驗(yàn)對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩者差異有顯著性；P<0.01表示有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩者有極顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床觀察與腹瀉指數(shù)評(píng)分

2.1.1 臨床治療結(jié)果 rPoIFNα治療組和PEDV感染對(duì)照組仔豬均在接種病毒第24小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)嘔吐或粥樣腹瀉出現(xiàn)發(fā)病；第24～48小時(shí)間，PEDV感染對(duì)照組有3頭出現(xiàn)腹瀉指數(shù)為3，其余2頭在第48小時(shí)時(shí)腹瀉指數(shù)為2，直至第72小時(shí)，1頭仔豬腹瀉指數(shù)為2，4頭仔豬腹瀉指數(shù)為3：主要為黃色水樣腹瀉，體重快速下降表現(xiàn)外形消瘦。rPoIFNα治療組3頭在第48小時(shí)時(shí)腹瀉指數(shù)為2，至第72小時(shí)時(shí)好轉(zhuǎn)為腹瀉指數(shù)1，另2頭仔豬排便正常；正常對(duì)照組仔豬始終排便正常(表2)。

表2 哺乳仔豬人工感染PEDV 第72小時(shí)結(jié)果Tab 2 Results of artificial infection with PEDV in suckling piglets at 72 h

2.1.2 剖檢結(jié)果 剖檢發(fā)現(xiàn)所有試驗(yàn)發(fā)病仔豬主要病理變化發(fā)生在腎臟和腸道。三組仔豬腎臟表面無出血點(diǎn)，與正常對(duì)照組相比(圖1C)，PEDV感染對(duì)照組仔豬腎臟腫大，表面腫脹呈丘壑隆起(圖1A)，其體積已超過正常對(duì)照組仔豬腎臟約30%，臟器系數(shù)高出正常對(duì)照組約15%，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；rPoIFNα治療組腎臟變化則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3)。PEDV感染對(duì)照組表現(xiàn)空腸擴(kuò)張有輕度充氣現(xiàn)象，腸壁充血、變??；結(jié)腸和盲腸充氣擴(kuò)張嚴(yán)重，腸壁變薄透明；胃部充氣擴(kuò)張嚴(yán)重(圖2A)；rPoIFNα治療組空腸無明顯擴(kuò)張，腸壁未見明顯充血及變薄，腸壁毛細(xì)血管樹枝樣充血，結(jié)腸有輕度充氣擴(kuò)張(圖2B)。

表3 各組仔豬腎臟檢測結(jié)果Tab 3 kidney related data of experimental piglets

A：PEDV感染對(duì)照組；B:rPoIFNα治療組；C：正常對(duì)照組A::PEDV control group；B：rPoIFNα treatment group；C：Negative control group圖1 試驗(yàn)仔豬腎臟外觀觀察Fig 1 Appearance of kidney in experimental piglets

A：PEDV感染對(duì)照組；B:rPoIFNα治療組；C：正常對(duì)照組A:PEDV control group；B：rPoIFNα treatment group；C：Negative control group圖2 試驗(yàn)仔豬腸道剖檢觀察Fig 2 Observation on intestinal dissection of experimental piglets

2.2 腎組織HE染色病理學(xué)鏡下觀察結(jié)果 觀察三組仔豬腎組織制作病理切片發(fā)現(xiàn)，PEDV感染對(duì)照組仔豬腎臟樣本腎間質(zhì)中每個(gè)視野內(nèi)有2個(gè)或以上嗜酸性粒細(xì)胞，同時(shí)發(fā)現(xiàn)腎小管上皮細(xì)胞大量空泡變性(圖3A)；rPoIFNα治療組則偶見腎小管空泡變性，未見嗜酸性粒細(xì)胞(圖3B)。

A：PEDV感染對(duì)照組；B：rPoIFNα治療組；C：正常對(duì)照組 黑色箭頭：空泡變性；藍(lán)色箭頭：嗜酸性粒細(xì)胞A：PEDV control group；B:Interferon treatment group；C：Negative control group Black arrows:vacuolar degeneration；Bule arrows:eosinophils圖3 仔豬腎臟病理切片(200×)Fig 3 Pathological section of kidney in piglets (200×)

2.3 病料組織病毒核酸檢測結(jié)果 RT-PCR檢測各組小腸與腎皮質(zhì)組織病料，結(jié)果顯示，PEDV感染對(duì)照組病料中檢測到的PEDV M基因核酸含量較高，可擴(kuò)增出特異性目的條帶，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為663 bp(圖4)，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序，部分峰圖(圖5)與GenBank公布的PEDV M基因序列比對(duì)分析，匹配度達(dá)到99%[8]；rPoIFNα治療組發(fā)病仔豬相應(yīng)組織提取的PEDV M基因核酸含量降低明顯，3頭發(fā)病仔豬僅1頭病料可擴(kuò)增出特異性目的條帶，陽性率約30%，與PEDV感染對(duì)照組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

M：DNA標(biāo)準(zhǔn)2000；1：PEDV M陽性對(duì)照；2-3：正常對(duì)照組仔豬病料組織；4-6：rPoIFNα治療組發(fā)病仔豬病料組織；7-10：PEDV感染對(duì)照組腹瀉指數(shù)為3的仔豬病料組織M:DNA Marker 2000;1:PEDV M positive control;2-3:Diseased tissue of normal control piglets;4-6：Diseased tissue of diseased piglets in rPoIFNα treatment group;7-10:Diseased tissue of diseased piglets with diarrhea index 3 in PEDV control group圖4 仔豬小腸組織病料PEDV M基因RT-PCR檢測結(jié)果Fig 4 RT-PCR results of PEDV M gene in piglets tissue disease material

圖5 RT-PCR擴(kuò)增PEDV M基因測序部分峰圖Fig 5 Sequencing partial peaks of PEDV M gene amplified by RT-PCR

2.4 各組仔豬血液腎功能檢測 攻毒后72 h所有仔豬無菌采集全血后，分離血清進(jìn)行腎臟生化指標(biāo)檢測。結(jié)果顯示，仔豬血肌酐雖然均在參考值以內(nèi)，但rPoIFNα治療組與PEDV感染對(duì)照組存在顯著差異，與正常對(duì)照組無明顯差異；三組仔豬的尿素氮和尿酸數(shù)據(jù)均無明顯差異(表4)。

表4 各組仔豬腎功能檢測結(jié)果Tab 4 Renal function test of experimental piglets

2.5 尿常規(guī)檢測結(jié)果 攻毒后72 h所有仔豬從膀胱直接抽取尿液進(jìn)行尿常規(guī)檢測，表5檢測結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，rPoIFNα治療組和PEDV感染對(duì)照組尿液pH均有所降低，尿比重增加，其中PEDV感染對(duì)照組尿比重上升明顯，提示仔豬脫水狀態(tài)較rPoIFNα治療組更為嚴(yán)重，并且PEDV感染對(duì)照組仔豬尿液中出現(xiàn)蛋白尿，尿沉渣鏡檢出顆粒管型，表明重度腹瀉的仔豬腎臟功能嚴(yán)重受損。

表5 各組仔豬尿常規(guī)主要檢測結(jié)果Tab 5 The main results of urine routine test of experimental piglets

3 討論與結(jié)論

現(xiàn)有研究已發(fā)現(xiàn)，2019新型冠狀病毒引起的新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)，除了呼吸系統(tǒng)典型癥狀外，腎臟也是新型冠狀病毒感染的主要靶點(diǎn)之一，病毒入侵誘發(fā)的細(xì)胞因子風(fēng)暴、炎癥細(xì)胞浸潤和病毒直接攻擊腎臟均可以引起腎臟損傷，并且臨床證據(jù)也表明，腎臟損傷比例較高[9]。糖皮質(zhì)激素是腎病綜合征等腎臟疾病的常用藥物，但從已有統(tǒng)計(jì)結(jié)果來看，SARS治療中激素類藥物是引起不良反應(yīng)的主要因素[10]，而目前臨床專家對(duì)糖皮質(zhì)激素在COVID-19 的治療過程中的作用仍有較大爭議[11]。因此需要對(duì)抗病毒藥物能否同時(shí)對(duì)腎臟起到保護(hù)作用做進(jìn)一步研究。本研究所采用的PEDV同為冠狀病毒科冠狀病毒屬成員之一，基因組是單股正鏈RNA，對(duì)易感者感染性極強(qiáng)。雖然PEDV主要臨床癥狀表現(xiàn)為腹瀉，但其對(duì)腎臟損傷的病理表現(xiàn)與COVID-19相類似，均表現(xiàn)出炎性細(xì)胞浸潤、腎小管壞死、空泡變性等[12-13]，可利用該病毒的人工感染模型來研究干擾素及新型藥物對(duì)冠狀病毒造成的腎臟損傷所起到保護(hù)作用的分子機(jī)制。

PEDV主要利用其S蛋白與仔豬腸道細(xì)胞表面受體結(jié)合，通過膜融合侵入易感的小腸絨毛上皮細(xì)胞并大量復(fù)制[14]，與SARS、MERS等冠狀病毒感染機(jī)制基本相同。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，這些高致病性病毒的致病機(jī)制與病毒感染宿主后大量上調(diào)炎癥因子分泌而抑制干擾素通路有關(guān)[15]。但隨著近年來對(duì)IFN抗病毒相關(guān)機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn)，IFN主要是通過激活下游干擾素信號(hào)通路，轉(zhuǎn)錄多種ISG，啟動(dòng)宿主對(duì)病毒等的防御反應(yīng)。ISG根據(jù)其功能主要有3類，第一類是具有直接抗病毒功能的 ISG；第二類是增強(qiáng)宿主對(duì)病毒的識(shí)別和反應(yīng)的正調(diào)控因子；第三類是 IFN 誘導(dǎo)產(chǎn)生的負(fù)調(diào)控分子[16]。如干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白(interferon-inducedtransmembrane protein，IFITM)是一種具有廣泛抑制病毒感染的ISG，可通過抑制病毒與宿主細(xì)胞間的膜融合，有效抑制冠狀病毒感染[17]；細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子(suppressor of cytokine signaling，SOCS)是重要的 IFN負(fù)調(diào)控因子，通過負(fù)反饋方式調(diào)節(jié)細(xì)胞因子啟動(dòng)的 JAK/STAT 信號(hào)傳導(dǎo)通路[18]，從而可抑制炎性細(xì)胞因子的表達(dá)而減少炎癥損傷。綜上所述，給予外源性IFNα從理論上可以有效抑制PEDV感染以及減輕因病毒感染導(dǎo)致的各重要器官炎癥損傷。

本次研究使用rPoIFNα治療PEDV感染引發(fā)的仔豬急性病毒性腹瀉，從試驗(yàn)結(jié)果上來看，rPoIFNα對(duì)于PEDV感染仔豬具有明顯治療效果，PEDV感染對(duì)照組出現(xiàn)的臨床較典型的腸道擴(kuò)張充血等病理變化與rPoIFNα治療組相比，后者已明顯減輕或與正常對(duì)照組類同。雖然沒有可供參考的14日齡仔豬(攻毒72 h后仔豬日齡)腎臟生化指標(biāo)，但三組試驗(yàn)仔豬血肌酐數(shù)值與腹瀉指數(shù)相關(guān)，腹瀉指數(shù)越高，血肌酐數(shù)值越高。rPoIFNα治療組的仔豬肌酐指標(biāo)明顯降低并且與正常對(duì)照組無明顯差異；同時(shí)因?yàn)檠◆挥性谀I小球?yàn)V過率下降比例較大時(shí)(超過50%)，其數(shù)值才會(huì)超出正常值范圍，因此本研究的三組試驗(yàn)仔豬血肌酐指數(shù)雖均在參考值范圍內(nèi)，但由于造成急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)的因素多樣，單純基于肌酐水平變化的診斷容易對(duì)真實(shí)腎功能造成誤判[19]。綜合尿常規(guī)檢測結(jié)果，rPoIFNα治療組仔豬從生化指標(biāo)上已基本恢復(fù)，與正常對(duì)照組仔豬無顯著差異。

許慧瑩等[20]報(bào)道嗜酸性粒細(xì)胞胃腸炎的發(fā)病機(jī)制常與過敏原引起的機(jī)體產(chǎn)生的超敏反應(yīng)有關(guān)。本研究在光鏡下觀察了經(jīng)HE染色的病理切片發(fā)現(xiàn)，PEDV感染對(duì)照組仔豬腸、腎臟組織內(nèi)均發(fā)現(xiàn)數(shù)量不等的嗜酸性粒細(xì)胞，提示PEDV感染仔豬導(dǎo)致的腸、腎臟損傷的發(fā)生與發(fā)展確與機(jī)體的超敏反應(yīng)有關(guān)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，rPoIFNα治療組仔豬腎組織未見嗜酸性粒細(xì)胞，提示使用rPoIFNα治療后，因干擾素誘導(dǎo)的ISG的負(fù)調(diào)控作用，可降低機(jī)體的超敏反應(yīng)，從而一定程度上減輕或消除因超敏反應(yīng)導(dǎo)致的腎臟損傷。此外PEDV感染導(dǎo)致的典型腎小管上皮細(xì)胞空泡變性在rPoIFNα治療組偶見，同樣說明IFNα對(duì)于治療急性腎小管損傷具有一定的保護(hù)作用。

本次研究發(fā)現(xiàn)，使用rPoIFNα治療可明顯保護(hù)感染PEDV仔豬的腎臟及其功能，但使用時(shí)機(jī)為早期、足量才能達(dá)到明顯臨床效果。對(duì)于腎臟損傷各個(gè)時(shí)間段的病理變化尚缺少完整研究，并缺乏對(duì)于感染組與治療組仔豬臟器中發(fā)病各階段的病毒核酸定量檢測，只能提示rPoIFNα早期治療效果。下一步研究的主要方向之一是對(duì)病毒感染量與腎臟損傷程度之間的關(guān)聯(lián)觀察及分析。同時(shí)需要考慮的是，rPoIFNα同樣也可能因ISG的正調(diào)控作用導(dǎo)致細(xì)胞因子風(fēng)暴從而加重病情[21]。此研究為今后指導(dǎo)臨床采用IFNα治療新冠病毒等感染，減輕對(duì)腎臟損傷提供了試驗(yàn)基礎(chǔ)，也為病毒感染導(dǎo)致的AKI提供新治療思路。