舒肝解郁膠囊對(duì)心肌梗死后抑郁大鼠行為學(xué)表現(xiàn)及心室電生理的影響

武秀麗，劉 俊，陳居剛，丁玉琴，張錄平，徐文芳，許靜雯，孫可可，林 艷，史 培

抑郁與心肌梗死之間存在密切的雙向關(guān)系，大約20%的心肌梗死病人有重度抑郁障礙或抑郁狀態(tài)，而主訴抑郁癥狀可使急性心肌梗死增加1.31倍，心肌梗死后抑郁也可使24個(gè)月內(nèi)心血管功能受損風(fēng)險(xiǎn)增加1.6～2.7倍[1-2]。研究表明，抑郁與異常的心臟電生理特征有關(guān)，如QT間期延長(zhǎng)和心率變異性降低，并顯著增加室性心律失常(VA)和心臟猝死的風(fēng)險(xiǎn)，基礎(chǔ)研究也顯示，交感神經(jīng)過(guò)度激活和心肌重構(gòu)惡化可能是其不良預(yù)后的一種機(jī)制[3-4]。舒肝解郁膠囊主要由刺五加和貫葉金絲桃組成，是一種純中藥復(fù)合制劑，具有舒肝解郁、健脾安神的功效，其作用機(jī)制可能是由于抑制中樞的神經(jīng)遞質(zhì)再攝取或單胺氧化酶，使突觸間隙的單胺遞質(zhì)濃度升高而發(fā)揮抗抑郁作用[5]。有研究表明，舒肝解郁膠囊可治療冠心病經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)(PCI)后合并輕度焦慮抑郁癥病人[6]，然而舒肝解郁膠囊對(duì)心肌梗死后抑郁的行為學(xué)表現(xiàn)以及心室電生理作用的具體機(jī)制還未闡明，為此，本研究擬建立急性心肌梗死模型與慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激抑郁大鼠模型，應(yīng)用行為學(xué)評(píng)價(jià)及心臟電生理技術(shù)，探究舒肝解郁膠囊的作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD健康成年雄性大鼠65只，體重(293±13)g，購(gòu)于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.2 模型制備

1.2.1 急性心肌梗死模型 烏拉坦(800 mg/kg)與α-氯醛糖(40 mg/kg)聯(lián)合進(jìn)行腹腔注射麻醉。麻醉后固定于鼠板上進(jìn)行常規(guī)消毒、鋪巾、四肢皮下心電圖監(jiān)測(cè)(GY-6328多道生理記錄儀，河南華南醫(yī)電科技有限公司)，氣管插管連接動(dòng)物呼吸機(jī)進(jìn)行機(jī)械通氣(潮氣量3～4 mL/100 g，呼吸頻率70～80次/min)，由第4肋間入胸，鈍性分離肋間肌，撕開(kāi)心包，暴露心臟，在左心耳和肺動(dòng)脈圓錐的交界和心尖連線(xiàn)上結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支，結(jié)扎區(qū)域心臟組織變白、心臟運(yùn)動(dòng)減弱以及心電圖兩個(gè)以上肢體導(dǎo)聯(lián)出現(xiàn)ST 段上抬≥0.2 mV作為急性心肌梗死建模成功的標(biāo)準(zhǔn)。術(shù)后連續(xù)3 d腹腔注射青霉素40萬(wàn)U以預(yù)防傷口感染。

1.2.2 抑郁模型 根據(jù)文獻(xiàn)應(yīng)用慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和應(yīng)激建立抑郁模型[7]，步驟如下：鼠籠45 ℃傾斜24 h，鼠籠搖晃15 min，禁食24 h，禁水24 h，潮濕墊料24 h，行為限制2 h，4 ℃冷水游泳5 min，42 ℃熱水游泳5 min，夾尾1 min，36 h持續(xù)光照，捕食者聲音刺激30 min。將上述11種刺激隨機(jī)安排到28 d內(nèi)，每日1種刺激。同種刺激不連續(xù)出現(xiàn)，以使動(dòng)物不能預(yù)料刺激的發(fā)生。

1.3 分組與給藥方法 將大鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組(10只)，心梗組(15只)，抑郁組(10只)，心梗后抑郁組(15只)，舒肝解郁膠囊干預(yù)組(15只)。舒肝解郁膠囊干預(yù)組每日灌胃1%舒肝解郁膠囊3 mL/kg，其余各組同時(shí)灌胃3 mL/kg生理鹽水，連續(xù)28 d。

1.4 行為學(xué)評(píng)價(jià) 從心肌梗死第5周開(kāi)始對(duì)所有存活大鼠進(jìn)行行為學(xué)評(píng)價(jià)，包括糖水消耗及曠場(chǎng)試驗(yàn)。

1.4.1 糖水消耗試驗(yàn) 在正式試驗(yàn)進(jìn)行前，對(duì)所有大鼠進(jìn)行訓(xùn)練，適應(yīng)含糖飲水。安靜房間，第1個(gè)24 h先將2瓶均裝1%蔗糖水同時(shí)放置于每籠，第2個(gè)24 h改換為1瓶1%蔗糖水和1瓶純凈水。隨后禁水24 h開(kāi)始正式試驗(yàn)，定量放置1瓶1%蔗糖水和1瓶純凈水，1 h后調(diào)換二者位置，2 h后實(shí)驗(yàn)結(jié)束。動(dòng)物糖水消耗百分比=糖水消耗量/總液體消耗量×100%。

1.4.2 曠場(chǎng)試驗(yàn) 所有動(dòng)物在每天相同時(shí)間點(diǎn)放置于75 cm×75 cm×40 cm的曠場(chǎng)中心內(nèi)，使用自動(dòng)跟蹤系統(tǒng)記錄并分析大鼠在曠場(chǎng)內(nèi)10 min的總行程、平均運(yùn)動(dòng)速度以及直立次數(shù)。每只大鼠依此單獨(dú)試驗(yàn)，每只結(jié)束后將曠場(chǎng)清理干凈。

1.5 血漿去甲腎上腺素(NE)水平檢測(cè) NE是評(píng)價(jià)交感神經(jīng)活性的重要指標(biāo)，在進(jìn)行行為學(xué)評(píng)價(jià)后采集主動(dòng)脈血液，血漿NE測(cè)定根據(jù)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELASA)試劑盒(武漢華美生物)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.6 心室電生理 實(shí)驗(yàn)最后所有存活的動(dòng)物利用心臟程序性刺激測(cè)定梗死周邊區(qū)及遠(yuǎn)離梗死區(qū)的心室有效不應(yīng)期(VERP)及心室顫動(dòng)閾值(VFT)。SlS2負(fù)向掃描法，8個(gè)連續(xù)起搏周長(zhǎng)S1S1 120 ms，S1S2 100 mm以2 mm的幅度遞減法測(cè)定VERP，VERP為S2不能引起心室除極的最長(zhǎng)S1S2間期。而以右心室心尖部為起搏(500次/min)部位采用S1S1程序刺激測(cè)定VFT，刺激周長(zhǎng)60 ms，脈寬10 ms，每次刺激持續(xù)30 s，間斷1 min進(jìn)行下次刺激，刺激電壓從起搏閾值開(kāi)始，每次以1 V遞增直至誘發(fā)心室顫動(dòng)，心室顫動(dòng)閾值定義為能誘發(fā)持續(xù)性心室顫動(dòng)的最小刺激電壓。

2 結(jié) 果

2.1 動(dòng)物模型 至心肌梗死28 d后，共53只大鼠存活，其中正常對(duì)照組10只，心梗組11只，抑郁組10只，心梗后抑郁組10只；舒肝解郁膠囊干預(yù)組12只。舒肝解郁膠囊干預(yù)組的生存率(80%，12/15)稍高于心梗后抑郁組(67%，10/15)和心梗組(73%，11/15)。

2.2 各組行為學(xué)表現(xiàn)結(jié)果比較 與正常對(duì)照組比較，心梗組、抑郁組、心梗后抑郁組糖水消耗量、運(yùn)動(dòng)量及直立次數(shù)明顯減少(P<0.05)，提示這3組大鼠快感降低、活動(dòng)度及空間探索減少；與心梗組及抑郁組比較，心梗后抑郁組糖水消耗量、運(yùn)動(dòng)量明顯減少(P<0.05)。舒肝解郁膠囊干預(yù)組糖水消耗量、運(yùn)動(dòng)量、直立次數(shù)較心梗后抑郁組明顯升高(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 各組行為學(xué)表現(xiàn)結(jié)果比較 (±s)

2.3 各組血漿NE水平比較 與正常對(duì)照組比較，心梗組、抑郁組及心梗后抑郁組血漿NE水平明顯增加(P<0.05)，提示交感神經(jīng)活性增加。心梗后抑郁組NE水平高于心梗組及抑郁組(P<0.05)。舒肝解郁膠囊干預(yù)組血漿NE水平較心梗后抑郁組明顯下降(P<0.05)。詳見(jiàn)圖1。

與正常對(duì)照組比較，＊P<0.05；與心梗后抑郁組比較，#P<0.05。

2.4 各組心室電生理結(jié)果比較 心室ERP和VFT是評(píng)價(jià)心室電不穩(wěn)定性的重要指標(biāo)，對(duì)預(yù)測(cè)惡性室性心律失常發(fā)生有重要意義。與正常對(duì)照組比較，心梗組、抑郁組及心梗后抑郁組大鼠梗死周邊區(qū)VERP明顯增加，而VFT明顯降低(P<0.05)；心梗后抑郁組梗死周邊區(qū)VERP高于心梗組與抑郁組，VFT低于心梗組與抑郁組(P<0.05)；舒肝解郁膠囊干預(yù)組梗死周邊區(qū)VERP及VFT較心梗后抑郁組均明顯改善(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 各組心室電生理結(jié)果比較 (±s)

3 討 論

根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，目前全世界抑郁癥病人達(dá)3.5億人，抑郁癥可能成為僅次于心腦血管病的第二大疾病[8]。有薈萃分析顯示：心肌梗死后抑郁與不良預(yù)后獨(dú)立相關(guān)，在調(diào)整心臟病嚴(yán)重程度后，全因死亡率增加22%，心血管事件風(fēng)險(xiǎn)增加13%[9]。抑郁癥容易誘發(fā)室性心律失常，是心臟性猝死(sudden cardiac death，SCD)的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。有研究顯示，交感神經(jīng)過(guò)度激活可能是抑郁癥發(fā)生的主要機(jī)制[4]。

本研究旨在探討舒肝解郁膠囊對(duì)心肌梗死后抑郁大鼠交感神經(jīng)和心室電生理的作用，以明確舒肝解郁膠囊治療心肌梗死后抑郁的機(jī)制。本研究通過(guò)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎及慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激誘導(dǎo)來(lái)構(gòu)建心肌梗死抑郁模型，結(jié)果顯示，心梗后抑郁組大鼠糖水消耗量、運(yùn)動(dòng)量及直立次數(shù)均降低，上述結(jié)果被用來(lái)模擬經(jīng)典的抑郁核心癥狀，這與既往研究一致，4周慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激程序可誘導(dǎo)出穩(wěn)定的抑郁樣行為[4，7]；而舒肝解郁膠囊干預(yù)后上述抑郁癥狀明顯改善，提示舒肝解郁膠囊可改善心肌梗死后抑郁大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)。抑郁組和心梗后抑郁組大鼠血漿NE明顯增加，表明抑郁狀態(tài)下交感神經(jīng)過(guò)度激活，而在體心臟電生理結(jié)果表明，抑郁組、心梗組及心梗后抑郁組大鼠梗死周邊區(qū)VERP明顯增加，而VFT明顯降低，提示心肌梗死抑郁大鼠交感神經(jīng)活性明顯增加，心室電不穩(wěn)定性升高，這與既往抑郁模型大鼠心臟交感神經(jīng)活性和心室電生理的研究[4，10]類(lèi)似。給予舒肝解郁膠囊干預(yù)后，心肌梗死抑郁大鼠交感神經(jīng)活性明顯降低，心室電不穩(wěn)定性明顯改善，表明舒肝解郁膠囊可改善心肌梗死抑郁大鼠抑郁狀態(tài)及心室電不穩(wěn)定性。

近年來(lái)，基礎(chǔ)與臨床研究發(fā)現(xiàn)，抑郁癥與冠心病有許多共同發(fā)病機(jī)制，如應(yīng)激機(jī)制、血小板活性與5-羥色胺的影響、炎癥反應(yīng)、社會(huì)心理以及生物行為[11-13]。交感神經(jīng)激活是心肌梗死后惡性室性心律失常和心源性猝死的重要原因之一，目前干預(yù)交感神經(jīng)已成為防治心源性猝死的重要靶點(diǎn)，本研究結(jié)果提示，抑郁癥可進(jìn)一步增加心肌梗死大鼠交感神經(jīng)活性。

目前，冠心病合并抑郁的治療主要有3種：藥物治療、心理干預(yù)治療以及物理治療，其中藥物治療是基礎(chǔ)和關(guān)鍵，包括三環(huán)類(lèi)抗抑郁藥、5-羥色胺再攝取抑制劑，但其副作用較大，病人耐受性差；而中藥在抑郁治療方面也發(fā)揮著一定作用，包括疏肝解郁、化痰解郁、補(bǔ)氣活血等[14-15]。舒肝解郁膠囊主要由刺五加和貫葉金絲桃組成，是一種純中藥復(fù)合制劑，具有舒肝解郁、健脾安神的功效，其作用機(jī)制可能是由于抑制中樞的神經(jīng)遞質(zhì)再攝取或單胺氧化酶，使突觸間隙的單胺遞質(zhì)濃度升高而發(fā)揮抗抑郁作用[5]。有研究表明，舒肝解郁膠囊可治療冠心病PCI術(shù)后合并輕度焦慮抑郁癥，相對(duì)安全，不良反應(yīng)少，病人易于接受[6]，本研究也表明，舒肝解郁膠囊可改善心肌梗死后抑郁狀態(tài)及心室電不穩(wěn)定性，為舒肝解郁膠囊防治心肌梗死后抑郁狀態(tài)以及室性心律失常提供了理論支持。

綜上所述，心肌梗死后抑郁可通過(guò)增加交感神經(jīng)活性，進(jìn)而增加心室電不穩(wěn)定，而舒肝解郁膠囊可通過(guò)調(diào)節(jié)抑郁樣行為及交感神經(jīng)活性，改善心室電不穩(wěn)定性及預(yù)后。