正交試驗(yàn)法優(yōu)選鮮切太白黃精酒蒸炮制工藝△

孫靜，宋藝君，王昌利，張祺嘉鈺，張欣，張小飛，蘇卓

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712046)

·中藥工業(yè)·

正交試驗(yàn)法優(yōu)選鮮切太白黃精酒蒸炮制工藝△

孫靜，宋藝君*，王昌利，張祺嘉鈺，張欣，張小飛，蘇卓

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712046)

目的：優(yōu)選鮮切太白黃精的最佳酒蒸工藝。方法：以黃精多糖、水浸出物、醇浸出物和外觀性狀為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法考察蒸制時(shí)間、加酒量、潤制時(shí)間、燜制時(shí)間4個(gè)因素，優(yōu)選鮮切太白黃精炮制工藝。結(jié)果：鮮切太白黃精最佳酒蒸工藝為取黃精，加30%黃酒，潤制6 h，蒸制14 h，燜制6 h，取出，切4 mm厚片，干燥。結(jié)論：優(yōu)選得到的鮮切太白黃精酒蒸炮制工藝穩(wěn)定，可為其產(chǎn)地加工炮制一體化技術(shù)提供試驗(yàn)依據(jù)。

太白黃精；多糖；正交試驗(yàn)

黃精為百合科植物滇黃精PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.、黃精PolygonatumsibiricumRed.或多花黃精PolygonatumcyrtonemaHua的干燥根莖。按形狀不同，習(xí)稱“大黃精”“雞頭黃精”“姜形黃精”。黃精具補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤肺、益腎的功能[1]，主要含有多糖、甾體皂苷、蒽醌、氨基酸等成分。生黃精具有麻味，刺人咽喉，蒸后補(bǔ)脾、潤肺、益腎的功能增強(qiáng)，并可除去麻味，同時(shí)外觀顏色也由淡黃色或黃棕色變?yōu)樽睾稚梁谏?。黃精酒制可以助其藥勢，使其滋而不膩，更好發(fā)揮補(bǔ)益作用，故臨床上多選用酒黃精。

傳統(tǒng)酒黃精是采用黃精干燥根莖作為原料來炮制，本課題研究黃精產(chǎn)地加工炮制一體化技術(shù)，故采用新鮮黃精直接切片后酒蒸。本研究在前期預(yù)實(shí)驗(yàn)和文獻(xiàn)查閱的基礎(chǔ)上，采用L9(34)正交試驗(yàn)，考察蒸制時(shí)間、加酒量、潤制時(shí)間、燜制時(shí)間4個(gè)因素，優(yōu)選新鮮黃精的最佳酒蒸工藝，為黃精產(chǎn)地加工炮制一體化技術(shù)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

U-3010紫外可見分光光度儀(日本日立公司)；Sartorius 電子天平(1/10 萬，德國)；ST-803型切片機(jī)(瑞安市賽特機(jī)電有限公司)；KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DHG-9140電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科技有限公司)。

1.2 試藥

雞頭黃精藥材采自陜西太白山，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院王繼濤教授鑒定為百合科植物黃精PolygonatumsibiricumRed.的新鮮根莖。新鮮黃精除去須根，搶水洗，稍晾，切厚片，酒蒸。

葡萄糖對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110833-200904)；黃酒(浙江紹興縣第三酒廠，批號20141202)；硫酸、0.2%蒽酮-硫酸試液、乙醇等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃精多糖的測定

2.1.1 對照品溶液的制備 取經(jīng)105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品33 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL中含無水葡萄糖0.33 mg)。

2.1.2 供試品溶液的制備 取60 ℃干燥至恒重的本品細(xì)粉約0.25 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過。殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次10 mL，將殘?jiān)盀V紙置燒瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過。殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次10 mL，合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取1 mL置10 mL具塞干燥試管中，照按2.1.3項(xiàng)下方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無水葡萄糖的重量(mg)，計(jì)算即得。

2.1.3 線性關(guān)系考察 精密量取對照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分別置10 mL具塞刻度試管中，各加水至2.0 mL，搖勻。在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，搖勻，放冷后置水浴中保溫10 min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白。照紫外-可見分光光度法(通則0401)，在582 nm波長處測定吸光度。以濃度(X)為橫坐標(biāo)，吸光度(Y)為縱坐標(biāo)作圖，得回歸方程：Y=7.518 1X+0.163 3，r=0.999 5。線性范圍為0.016 2～0.195 0 mg。

2.1.4 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按2.1.3項(xiàng)下方法顯色后測定，重復(fù)測定6次，記錄吸光度。結(jié)果吸光度RSD=0.04%，表明本方法精密度良好。

2.1.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品6份，每份0.25 g，精密稱定，按2.1.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液，每份吸取1 mL，按2.1.3項(xiàng)下方法顯色后測定，記錄吸光度。結(jié)果RSD=2.10%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按2.1.3項(xiàng)下方法顯色后，分別在0、10、20、30、40 min時(shí)測定吸光度。結(jié)果RSD=0.48%，表明供試品溶液在40 min內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.7 加樣回收率試驗(yàn) 取已知黃精多糖含量的樣品6份，每份0.25 g，精密稱定，分別加入一定量葡萄糖對照品溶液，按照2.1.2項(xiàng)下方法制備并測定，計(jì)算回收率為98.69%，RSD=1.03%，表明本法回收率良好。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)

2.2 水溶性浸出物測定

取供試品約2 g，精密稱定，置250 mL錐形瓶中，精密加水100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。

2.3 醇溶性浸出物測定

取供試品約2 g，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，精密加稀乙醇100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過。精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量(%)。

2.4 外觀性狀評分標(biāo)準(zhǔn)

參照2015版《中華人民共和國藥典》一部黃精性狀項(xiàng)下規(guī)定，確定評分。黑色，計(jì)1.0分；棕褐色，計(jì)0.8分；棕色，計(jì)0.5分。嚼之黏性足，微有酒香氣，計(jì)1.0分；嚼之有黏性，酒香氣若有若無，計(jì)0.8分；嚼之無黏性，無酒香氣，計(jì)0.5分。味甜、無口舌麻木感，計(jì)1.0分；稍甜、稍有口舌麻木感，計(jì)0.8分；甜味淡、有口舌麻木感，計(jì)0.5分。

2.5 酒蒸太白黃精正交試驗(yàn)

在單因素考察和文獻(xiàn)查閱的基礎(chǔ)上，采用L9(34)正交試驗(yàn)考察蒸制時(shí)間(A)、加酒量(B)、潤制時(shí)間(C)、燜制時(shí)間(D)4個(gè)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，以飲片外觀性狀、多糖、浸出物的綜合評分為評價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選太白黃精酒蒸工藝。因素水平見表2。

表2 因素水平表

綜合評分標(biāo)準(zhǔn)：為客觀反映酒蒸黃精工藝中各因素對黃精質(zhì)量的影響，本試驗(yàn)將外觀性狀及黃精功能相關(guān)成分(黃精多糖)以及浸出物含量作為評價(jià)指標(biāo)，采用綜合評分法評定。因黃精多糖是黃精的主要有效成分，且為2015版《中華人民共和國藥典》一部規(guī)定的黃精的指標(biāo)成分，又因外觀性狀、浸出物含量也對黃精的質(zhì)量評價(jià)具有重要意義，因而暫定綜合評分=(外觀性狀評分/最高外觀性狀評分)×20+(黃精多糖含量/黃精多糖最高含量)×50+(水浸出物含量/水浸出物最高含量)×15+(醇浸出物含量/醇浸出物最高含量)×15。結(jié)果分別見表3和表4。

由極差R值分析可知，各因素作用主次順序?yàn)锳>D>B>C，蒸制時(shí)間影響最大，燜制時(shí)間次之，其次是加酒量，最后是潤制時(shí)間。最佳工藝為A2B3C1D2。方差分析結(jié)果顯示，P值均小于0.01，4個(gè)因素均為主要影響因素。因而初步認(rèn)為最佳炮制工藝：取黃精，加30%黃酒潤6 h，蒸10 h，燜6 h，取出，切4 mm厚片，干燥。

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果(n=2)

表4 方差分析表

注：F0.01(2，9)=8.02。

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)

按照上述最佳的炮制工藝，取黃精10 kg，平行制備3份黃精樣品。取樣測定蒸制品中黃精多糖的含量、浸出物含量，并對外觀性狀進(jìn)行評分。見表5。

表5 酒黃精最佳炮制工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

結(jié)果表明，確定的工藝操作簡便，合理可控。

3 討論

黃精由于含有大量的粘液質(zhì)和糖分，在炮制過程中，除了一般的潔凈處理外，要防止用水浸泡，以防有效成分流失。因此，藥材的軟化以燜潤為宜。不管采用何種輔料炮制，都必須使輔料全部被吸盡，內(nèi)無干心，以便最大限度地發(fā)揮藥物的治療作用[2]。

外觀質(zhì)量評價(jià)是傳統(tǒng)意義上的中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)是目前單一化學(xué)成分和化學(xué)部位不能替代的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[3]，因此將其作為正交試驗(yàn)的指標(biāo)之一。黃精多糖是黃精的主要藥效成分，具有延緩衰老、降血糖、降血脂、調(diào)節(jié)免疫、防止動(dòng)脈粥樣硬化、抗腫瘤等藥理作用[4-8]，故將其作為評價(jià)指標(biāo)之一。

本試驗(yàn)僅從外觀性狀、化學(xué)成分和浸出物的角度優(yōu)選太白黃精酒蒸炮制工藝，在以后的研究中，還應(yīng)該采用聯(lián)合化學(xué)成分、指紋圖譜、藥效等多指標(biāo)來綜合評價(jià)炮制工藝，以便更好地適用于臨床。

[1] 國家藥典委員會(huì).《中華人民共和國藥典》：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

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OptimizationofWine-steamingProcessingTechnologyofFreshCutTaiBaiPolygonatiRhizomabyOrthogonalDesign

SUNJing，SONGYijun*，WANGChangli，ZHANGQijiayu，ZHANGXin，ZHANGXiaofei，SUZhuo

(ShaanxiUniversityofChineseMedicine，Xianyang712046，China)

Objective：To optimize the best wine-steaming processing for Tai Bai Polygonati Rhizoma.Methods：The orthogonal test was used to investigate the effects of steaming time，wine volume，infiltration time，stuffy time on the polysaccharide，water extract，alcohol extract and appearance，the process was optimized accordingly.Results：The optimal wine-steaming process for Polygonati Rhizoma was as follows：Polygonati Rhizoma was subjected to covered moistening 6 h with 30% yellow wine，steaming 14 h，stewing 6 h，and then taken out，cut into 4 mm thick slices，and dried.Conclusion：The optimized wine-steaming process of Polygonati Rhizoma is stable，it can provide the experimental basis for its origin processing and integration technology.

Tai Bai Polygonati Rhizoma；polysaccharide；orthogonal test

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.022

2015-07-24)

陜西省教育廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室科研計(jì)劃項(xiàng)目(No.14JS023)

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宋藝君，講師，研究方向：中藥飲片規(guī)范化研究；E-mail：songyijun200506@126.com