液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)大蒜和蒜薹中的苯醚甲環(huán)唑

杜亭，喬琳，朱仁發(fā)

（合肥學(xué)院，安徽合肥230601）

大蒜是一種重要的農(nóng)作物，不僅可作調(diào)味品，還有很強(qiáng)的藥用價(jià)值；蒜薹是大蒜中抽出的花莖，是人們常用的蔬菜。大蒜渾身是寶，其植株從幼苗期到成熟期均可食用。作為重要的藥食同源植物，其種植歷史至今已超過(guò)5 000年。大蒜獨(dú)特的食藥價(jià)值是由于其功能成分，有機(jī)硫化物是大蒜的主要活性物質(zhì)[1]。

苯醚甲環(huán)唑是一種三唑類(lèi)殺菌劑，具有高效、廣譜、低毒的特點(diǎn)，通過(guò)抑制果蔬細(xì)胞膜中麥角甾醇的生物合成，破壞細(xì)胞膜功能結(jié)構(gòu)，從而殺除病菌，常用于防治多種作物的霉病、葉斑病、銹病、白粉病等，且不污染農(nóng)作物[2-3]。本文以大蒜和蒜薹為研究對(duì)象，采用QuEChERS前處理技術(shù)，用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)其中苯醚甲環(huán)唑含量進(jìn)行檢測(cè)，建立了一種簡(jiǎn)單、高效、快速的檢測(cè)方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與材料

LCMS-8040液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)，日本島津公司；XD-H旋渦混合器，上海漢諾儀器有限公司；AUW120D電子天平，感量為0.000 01 g，日本島津公司；LD5-2B離心機(jī)，北京雷博爾離心機(jī)有限公司；SHZ-82水浴恒溫振蕩器，常州國(guó)宇儀器制造有限公司；JK-500DB超聲波清洗器，合肥市金尼克機(jī)械制造有限公司。

乙腈、甲酸，色譜純，美國(guó)TEDIA公司；氯化鈉，分析純，天津市北辰方正試劑廠；無(wú)水硫酸鎂，分析純，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑廠；檸檬酸二鈉鹽、檸檬酸三鈉鹽，分析純，上海麥克林生化科技有限公司；N-丙基乙二胺粉末，分析純，Agela Technologies公司；3-氯-4-[4-甲基-2-(1H-1，2，4-三唑-1-基甲基)-1，3-二噁戊烷-2-基]苯基-4-氯苯基醚，CAS號(hào)：119446-68-3，純度96.3%，先正達(dá)投資有限公司。

1.2 溶液配制

稱(chēng)取苯醚甲環(huán)唑?qū)φ瘴?.020 77 g（精確至0.000 01 g）置于20 mL容量瓶中，用色譜純乙腈溶解并定容至刻度，配制成1 000 mg/L的苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。移取0.5 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于10 mL容量瓶中，用色譜乙腈稀釋至刻度，搖勻，配制成50 mg/L的苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，再逐級(jí)稀釋成5 mg/L、0.5 mg/L、0.05 mg/L標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別從5 mg/L的苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中吸取0.8 mL、0.4 mL、0.2 mL，從0.5 mg/L的苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中吸取0.4 mL，從0.05 mg/L的苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中吸取0.4 mL、0.2 mL，置于2 mL容量瓶中，用大蒜或蒜薹空白提取液稀釋至刻度，搖勻，配制成含苯醚甲環(huán)唑0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

0.1 %甲酸水溶液：吸取甲酸1.00 mL置于1 000 mL容量瓶中，用純水稀釋至刻度，搖勻，抽濾后置于超聲波清洗器中超聲30 min，備用。

1.3 樣品前處理

分別稱(chēng)取5 g（精確至0.000 01 g）粉碎混勻的大蒜、蒜薹樣品，置于50 mL離心管中，加入2 mL水、10mL乙腈振蕩2 min，加入4 g無(wú)水硫酸鎂、1 g氯化鈉、0.5 g檸檬酸二鈉鹽、1 g檸檬酸三鈉鹽，振蕩提取30 min，取出，置于離心機(jī)以3 000 r/min離心5 min。移取1 mL上清液于裝有50 mg PSA和150 mg無(wú)水硫酸鎂的2 mL離心管中，渦旋1 min，靜置5 min，取上清液經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾至進(jìn)樣瓶中，上機(jī)檢測(cè)。

1.4 液相色譜分析條件

色譜柱：Shim-pack XR-ODS Ⅱ，2.0 mm（id）×75 mm，粒徑2.2 μm；柱溫：35℃；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液/乙腈（20/80），等度洗脫；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：1 μL。根據(jù)保留時(shí)間（RT）定性，外標(biāo)法定量。

1.5 質(zhì)譜條件

離子源：ESI+；接口電壓：4.5 kV；DL管溫度：250℃；加熱塊溫度：400℃；霧化氣流量：3 L/min；干燥氣流量：15 L/min；碰撞氣：氬氣；監(jiān)測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），見(jiàn)表1。

表1 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）條件

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍、檢出限

按照試驗(yàn)方法測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，以化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明線性關(guān)系良好，其線性范圍、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及方法檢出限見(jiàn)表2，標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1、圖2、表3、表4。

表2 大蒜、蒜薹基質(zhì)中的線性參數(shù)及檢出限

圖1 大蒜基質(zhì)中苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 蒜薹基質(zhì)中苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)曲線

表3 大蒜基質(zhì)中苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)曲線

表4 蒜薹基質(zhì)中苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 苯醚甲環(huán)唑的回收率和精密度試驗(yàn)

分別將0.02 mg/L、0.2 mg/L、2 mg/L、10 mg/L的苯醚甲環(huán)唑添加到大蒜、蒜薹的空白樣品中，混勻，靜置30 min，按照試驗(yàn)方法平行測(cè)定5次，計(jì)算平均值，結(jié)果如表5。

表5結(jié)果顯示：本次試驗(yàn)苯醚甲環(huán)唑在大蒜中的加標(biāo)回收率為88.16%～104.02%，在蒜薹中加標(biāo)回收率為91.45%～103.14%，試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤3%，符合加標(biāo)回收率要求，說(shuō)明本方法準(zhǔn)確可靠。

表5 不同濃度的苯醚甲環(huán)唑回收率和精密度試驗(yàn)

3 結(jié)論

本文建立了測(cè)定大蒜和蒜薹2種基質(zhì)中苯醚甲環(huán)唑的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。該方法采用QuECh-ERS樣品前處理技術(shù)，前處理過(guò)程操作簡(jiǎn)單快速，通過(guò)對(duì)色譜以及質(zhì)譜條件的優(yōu)化，以0.1%甲酸水溶液/乙腈=20/80（V/V）為流動(dòng)相，采用ESI正離子模式檢測(cè)苯醚甲環(huán)唑，方法的靈敏度高，線性關(guān)系良好，可為類(lèi)似產(chǎn)品的殘留檢測(cè)提供參考。