冠心通絡方對糖尿病大鼠心肌缺血的干預研究

蔡智剛 唐新征 姚燦坤

【摘要】 目的 探討冠心通絡方治療糖尿病大鼠心肌缺血的藥物療效。方法 60只SD大鼠， 隨機分為正常組、造模組、冠心通絡方組、阿司匹林組， 每組15只。正常組大鼠正常喂養(yǎng)， 不追加任何干預措施;造模組施加干預措施， 制造糖尿病大鼠心肌缺血模型;冠心通絡方組在造模大鼠的基礎上予以灌服冠心通絡方湯劑治療;阿司匹林組在造模大鼠的基礎上予以灌服阿司匹林治療。1個月后比較四組大鼠的心功能參數(shù)， ST段和T波變化值， 血糖、總膽固醇變化情況， 左心室舒張末期容積（LVEDV）、左心室舒張末期內徑（LVIDd）、左心室射血分數(shù)（LVEF）。結果 模型組大鼠心電圖ST段壓低值、T波倒置值分別為（0.41±0.25）、（0.56±0.38）mV高于正常組的（0.11±0.23）、（0.13±0.58）mV， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;追加干預措施以后， 冠心通絡方組大鼠心電圖ST段壓低值（0.23±0.21）mV、T波倒置值（0.24±0.41）mV低于模型組的（0.41±0.25）、（0.56±0.38）mV及阿司匹林組的（0.35±0.24）、（0.42±0.37）mV， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;阿司匹林組和模型組ST段壓低值、T波倒置值比較， 差異無統(tǒng)計學意義 （P>0.05）。模型組總膽固醇（8.41±3.13）mmol/L、血糖（21.3±6.36）mmol/L高于正常組的（4.67±2.45）、（6.46±2.34）mmol/L， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;追加干預措施以后， 冠心通絡方組大鼠總膽固醇（6.34±2.25）mmol/L、血糖（11.35±4.44）mmol/L低于模型組的（8.41±3.13）、（21.3±6.36）mmol/L及阿司匹林組的（7.25±3.42）、（19.9±5.63）mmol/L， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;阿司匹林組和模型組總膽固醇、血糖水平比較， 差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。模型組大鼠LVEDV（0.87±0.33）ml、LVIDd（9.32±0.89）mm高于正常組的（0.51±0.23）ml、（5.82±1.13）mm， LVEF（50.34±5.35）%低于正常組的（75.97±7.56）%， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;追加干預措施以后， 冠心通絡方組LVEDV（0.58±0.39）ml、LVIDd（6.01±1.22）mm低于模型組的（0.87±0.33）ml、（9.32±0.89）mm， LVEF（64.38±6.45）%高于模型組的（50.34±5.35）%， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;阿司匹林組和模型組LVEDV、LVIDd、LVEF指標水平比較， 差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結論 冠心通絡方能有效改善糖尿病大鼠心臟微循環(huán)， 緩解心肌缺血癥狀， 其機制可能與其抑制血糖、血脂有關。

【關鍵詞】 糖尿病;心肌缺血;冠心通絡方;微循環(huán)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.25.093

【Abstract】 Objective ? To discuss the efficacy of Guanxin Tongluo Recipe on myocardial ischemia in diabetic rats. Methods ? A total of 60 SD rats were randomly divided into normal group， model group， Guanxin Tongluo Recipe group and aspirin group， with 15 rats in each group. Normal group were fed normally without any additional interventions， model group received intervention measures to create a model of myocardial ischemia in diabetic rats， Guanxin Tongluo Recipe group received Guanxin Tongluo Recipe on the basis of the modeled group， and aspirin group received aspirin on the basis of modeled rats. 1 month later， cardiac function parameters， ST segment and T wave changes， blood glucose and total cholesterol changes， left ventricular end-diastolic volume （LVEDV）， left ventricular internal diameter at end-diastole （LVIDd） and left ventricular ejection fraction （LVEF） were compared among the four groups. Results ? ST-segment depression value and T wave inversion value of the model group were respectively （0.41±0.25） and （0.56±0.38） mV， which was higher than that of the normal group （0.11±0.23） and （0.13±0.58） mV， and the difference was statistically significant Significance （P<0.05）. After additional interventions， ST-segment depression value and T wave inversion value of Guanxin Tongluo Recipe group were respectively （0.23±0.21） mV and （0.24±0.41） mV， which was lower than that of model group [（0.41±0.25） and （0.56±0.38） mV] and aspirin group [（0.35±0.24） and （0.42±0.37） mV]， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no statistically significant difference in ST-segment depression value and T wave inversion value between aspirin group and model group （P>0.05）. The total cholesterol （8.41±3.13） mmol/L and blood glucose （21.3±6.36） mmol/L of the model group were higher than that of normal group （4.67±2.45） and （6.46±2.34） mmol/L， and the difference was statistically significant （P<0.05）. After additional interventions， total cholesterol （6.34±2.25） mmol/L and blood glucose （11.35±4.44） mmol/L was lower than that of model group [（8.41±3.13） and （21.3±6.36） mmol/L] and aspirin group [（7.25±3.42） and （19.9±5.63） mmol/L]， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no statistically significant difference in total cholesterol and blood glucose between aspirin group and model group （P>0.05）. LVEDV （0.87±0.33） ml and LVIDd （9.32±0.89） mm of the model group was higher than that of the normal group （0.51±0.23） ml， （5.82±1.13） mm， and LVEF （50.34±5.35）% was lower than that of the normal group （75.97±7.56）%， and the difference was statistically significant （P<0.05）. After additional interventions， LVEDV （0.58±0.39） ml， LVIDd （6.01±1.22） mm of Guanxin Tongluo Recipe group was lower than that of model group （0.87±0.33） ml， （9.32±0.89） mm， and LVEF （64.38±6.45）% was higher than that of model group （50.34±5.35）%， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no statistically significant difference in LVEDV， LVIDd and LVEF between aspirin group and model group （P>0.05）. Conclusion ? Guanxin Tongluo Recipe can effectively improve the cardiac microcirculation of diabetic rats and relieve the symptoms of myocardial ischemia. Its mechanism may be related to its inhibition of blood glucose and blood lipids.

【Key words】 Diabetic; Myocardial ischemia; Guanxin Tongluo Recipe; Microcirculation

隨著我國已經進入老年社會， 糖尿病合并冠心病的幾率越來越高， 冠心病的主要臨床表現(xiàn)是心肌缺血， 而心肌缺血是2型糖尿病常見的慢性并發(fā)癥之一[1， 2]。正因為糖尿病和冠心病心肌缺血之間存在密切的相關性， 故探討糖尿病和冠心病的共同發(fā)病機制， 如何利用中醫(yī)藥在防治冠心病和糖尿病方面的優(yōu)勢， 采取中西醫(yī)結合的方法， 降低糖尿病合并心肌缺血的發(fā)生率， 減少心肌梗死等嚴重的心血管事件， 具有顯著意義。基于此， 本文通過采用冠心通絡方治療糖尿病大鼠心肌缺血， 研究其藥物療效， 現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料

1. 1. 1 實驗動物 采用清潔級SD雄性大鼠120例， 購自廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心， 飼養(yǎng)于廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院清潔級動物實驗室。基礎鼠料購自廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心， 總熱量6.94 J/g， 其中蛋白質23%， 碳水化合物53%， 脂肪5%。肥甘鼠料（高熱量飼料）由基礎鼠料加蔗糖、煉豬油和雞蛋充分混勻后， 機器成型。其總熱量為21.33 J/g， 其中蛋白質15%， 碳水化合物51%， 脂肪25%。

1. 1. 2 藥物 冠心通絡方（黃芪30 g， 白參10 g， 麥冬15 g， 葛根30 g， 丹參15 g， 赤芍10 g， 瓜蔞殼30 g， 紅花10 g， 地龍10 g， 甘草5 g）， 以4倍量水浸泡2 h， 煮沸1 h后， 濾過， 藥渣再用3倍量的水煮沸1 h， 濾過， 合并兩次濾液， 濃縮至比重1.2左右;加入0.3%苯甲酸鈉防腐劑， 裝瓶， 0～4℃冰箱放置， 保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 1. 3 實驗試劑及儀器 試劑：鏈脲佐菌素（STZ）（ALEXIS公司）;阿司匹林腸溶片（德國拜耳公司， 規(guī)格：100 mg/片）， 用時用蒸餾水稀釋成0.25%濃度;去甲腎上腺素（新誼醫(yī)藥集團， 規(guī)格：2 mg/支）。儀器：Vivid 7 DimensionV彩色多普勒超聲診斷儀（通用電氣有限公司）。

1. 2 方法

1. 2. 1 糖尿病心肌缺血大鼠模型的制備及給藥SPF級SD雄性大鼠， 喂養(yǎng)高糖高脂飼料（普通飼料為64%、豬油為15%、蔗糖為20%、鹽為1%）1個月。1個月后所有大鼠禁食12 h不禁水， 腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素37 mg/kg。72 h后檢測空腹血糖（FBG）， 選擇FBG≥16.7 mmol/L為2型糖尿病模型的合格標準。再取糖尿病大鼠后肢大腿內側皮下注射異丙基腎上腺素水溶液， 1次/d， 每次劑量10 mg/kg， 連續(xù)注射5 d。每次注射后1、5、10、30、45 min……均可記錄心電圖， 觀察急性心肌缺血改變。如能連續(xù)2 d觀察到心肌缺血心電圖典型改變， 則表明建模成功。

1. 2. 2 分組 隨機把大鼠分為空白對照組、糖尿病心肌缺血模型組、冠心通絡方組、和阿司匹林組4個亞組.其中空白對照組為正常大鼠， 糖尿病心肌缺血模型組只注射STZ+去甲腎上腺素， 不采用藥物干預;冠心通絡方組給予冠心通絡方灌胃;阿司匹林組給予阿司匹林20 mg/（kg·d）劑量灌胃;各組間灌胃液體量通過補充生理鹽水方法保持一致。以上四組大鼠在藥物干預1個月后予以處死， 取左心室心肌組織。

1. 3 觀察指標 ①比較心電圖ST段壓低和T波倒置值。用乙醚輕度麻醉， 仰臥位將頭和四肢固定， 用心電圖機記錄心電圖， 觀察心電圖ST段壓低值和T波倒置值。②比較血糖、血脂水平。從下腔靜脈取血5 ml， 離心15 min后， 測定血總膽固醇、血糖濃度。③檢測LVIDd、LVEF、LVEDV。用Vivid 7 DimensionV彩色多普勒超聲診斷儀進行心臟超聲檢測， 在取得滿意的胸骨旁左心室短軸二維圖像后， 于乳頭肌水平將M型取樣線垂直于室間隔和左心室后壁獲得M型超聲心動圖， 測定LVIDd、LVEF、LVEDV， 連續(xù)取3個心動周期的平均值。

1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2. 1 四組大鼠心電圖ST段壓低值和T波倒置值比較模型組大鼠心電圖ST段壓低值、T波倒置值高于正常組， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;追加干預措施以后， 冠心通絡方組大鼠心電圖ST段壓低值、T波倒置值低于模型組及阿司匹林組， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;阿司匹林組和模型組ST段壓低、T波倒置值比較， 差異無統(tǒng)計學意義 （P>0.05）。見表1。

2. 2 四組大鼠總膽固醇、血糖水平比較 模型組大鼠總膽固醇、血糖水平高于正常組， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;追加干預措施以后， 冠心通絡方組大鼠總膽固醇、血糖水平低于模型組及阿司匹林組， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;阿司匹林組和模型組總膽固醇、血糖比較， 差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2。

2. 3 四組大鼠LVEDV、LVIDd、LVEF指標水平比較模型組大鼠LVEDV、LVIDd高于正常組， LVEF低于正常組， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;追加干預措施以后， 冠心通絡方組LVEDV、 LVIDd低于模型組， LVEF高于模型組， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;阿司匹林組和模型組LVEDV、LVIDd、LVEF指標水平比較， 差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表3。

3 討論

中國糖尿病人口已過億， 居世界首位。糖尿病主要損傷血管， 其并發(fā)癥分為微血管并發(fā)癥和大血管并發(fā)癥。防治心腦血管疾病所需的醫(yī)療支出， 占糖尿病醫(yī)療費用的最主要部分。目前， 中醫(yī)藥在防治糖尿病并發(fā)癥方面優(yōu)勢明顯， 大量循證醫(yī)學證據(jù)已證實其療效確切， 具有不可替代的作用[3， 4]。本文通過對糖尿病大血管及微血管病變的發(fā)病特點和主要證候進行了橫斷面研究， 發(fā)現(xiàn)在不同靶器官大血管及微血管病變的人群中有著相同的證候特點， 其病程發(fā)展存在一致性， 而中藥的早期干預可延緩其發(fā)展。

“久病入絡”是糖尿病血管病變的共同病機。糖尿病血管病變屬于中醫(yī)“絡病”范疇， 其病位在脈絡， 病邪久客不去以致脈絡瘀滯為核心病機。脈絡為血液運行的通路， 廣泛散布于肌肉、皮膚及臟腑之間?！熬貌∪虢j” 思想在《內經》中就有論述， 《素問·痹論》“病久入深， 營衛(wèi)之行澀， 經絡時疏， 故不通”;至明代葉天士得以完善：“經主氣、絡主血”， “初為氣結在經、久則血傷入絡”。清晰的描述了糖尿病微血管病變的發(fā)展過程：疾病遷延， 經氣之傷， 日漸入血， 脈絡不利， 內生血瘀， 氣血并阻， 進而發(fā)展為出血、生濁， 先有脈絡瘀滯不利， 后生臟腑氣血不調。雖病變損傷部位不同， 然病理趨同， 可同理而治。臨床實踐中發(fā)現(xiàn)糖尿病血管病變患者常有舌下絡脈青紫， 甚則粗張或瘀曲如臥蠶， 為典型的血瘀證特點， 且瘀的證候常先于癥狀出現(xiàn)， 并隨疾病的進展呈現(xiàn)逐漸加重之象。

冠心通絡方是防治糖尿病血管病變的有效方劑。中醫(yī)理論認為， 糖尿病心肌病在臨床上多以胸悶、胸痛為主證， 其病機多為本虛標實。本病本虛是以氣陰兩虛為主， 標實則以心脈瘀阻多見， 臨床治療當以益氣養(yǎng)陰扶其本， 活血化瘀治其標。冠心通絡方是本院研制已應用于臨床多年的中藥制劑， 無論是基礎研究還是在臨床應用方面都具有堅實的基礎。方中以黃芪、人參補益心氣;麥冬、葛根養(yǎng)陰生津， 共治其本虛;丹參、赤芍、地龍、紅花活血化瘀， 瓜萎理氣寬胸， 共治其標實;甘草調和諸藥。全方有益氣養(yǎng)陰， 活血化瘀， 疏通心脈之功效。黃芪可減少心率， 減少心肌能量消耗;人參、生地、麥冬能增強心肌收縮力， 增加心輸出量和冠脈血流量;葛根、水蛭解除血管平滑肌痙攣， 減少冠脈阻力， 增加冠脈流量;丹參、紅花改善血液流變性和心肌微循環(huán)， 改善心肌血流量;丹參、瓜萎可提高心肌對缺氧的耐受力。冠心通絡方能擴張冠狀血管， 抑制血小板聚集、粘附， 顯著抑制血漿內皮素和血清丙二醛水平的升高， 明顯提高血漿降鈣素基因相關肽和血清超氧化物歧化酶的水平;該方尚有較好抗體外血栓形成和改善血液流變學作用， 改善心臟舒縮功能、調整心臟血管順應性和降低心肌氧耗作用[5]。該方能明顯降低球囊損傷動脈粥樣硬化（AS）兔腹主動脈組織單核細胞趨化蛋白（MCP-1）、蛋白激酶Cα受體（PKC-α）表達， 通過抑制炎癥增殖而減少血管再生組織， 輕血管內膜增生和血管平滑肌增殖， 從而防止血管再狹窄， 提示該方對缺血性心血管疾病治療作用的多面性[6]。臨床上廣泛應用于糖尿病并發(fā)冠心病患者， 對緩解患者臨床癥狀、改善預后、改善生存質量具有顯著療效。

綜上所述， 冠心通絡方能有效改善糖尿病大鼠心臟微循環(huán)， 緩解心肌缺血癥狀， 其機制可能與其抑制血糖、血脂有關。

參考文獻

[1] 孟艷霞， 鄧立普. 硫化氫對糖尿病大鼠心肌纖維化及基質金屬蛋白酶7和縫隙連接蛋白43表達的影響. 中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志， 2018， 28 （1）：21-24.

[2] 向家培， 王賢恩， 張復貴. 穩(wěn)心顆粒對于心肌缺血性疾病大鼠模型的影響. 中西醫(yī)結合心腦血管病雜志， 2015， 13（15）：1728-1729.

[3] 韓安邦， 張健， 路迎冬， 等. 芪藶強心膠囊對心肌梗死大鼠心肌纖維化及TGF-β1 /Smad3信號通路的影響. 北京中醫(yī)藥大學學報， 2017， 40（1）：41-47.

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[5] 吳以嶺. 脈絡論. 北京：中國科學技術出版社， 2010：921-967.

[6] 吳以嶺. “脈絡-血管系統(tǒng)病”新概念及其治療探討. 疑難病雜志， 2005（5）：285-287.

[收稿日期：2020-07-07]