FABP5在宮頸癌組織的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系*

詹銀珠， 王偉

1深圳市龍華區(qū)中心醫(yī)院婦科(廣東深圳 518110)； 2中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦科(廣東廣州 510700)

在全球范圍內(nèi)，宮頸癌在女性惡性腫瘤中的發(fā)病率和病死率均排第4位，每年約527 600新發(fā)病例，約265 000死亡病例，其中近90%發(fā)生在發(fā)展中國家。我國每年約98 900新發(fā)宮頸癌病例，約30 500死亡病例[1]。雖然多數(shù)的宮頸癌患者可經(jīng)手術(shù)或放療等治療手段而治愈，但因術(shù)后復(fù)發(fā)仍導(dǎo)致約20%的病死率，其預(yù)后在最近20年仍未得到顯著改善[2]，因此宮頸癌預(yù)后仍是不容忽視的問題。本研究前期利用定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法，在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的宮頸癌組織標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)脂肪酸結(jié)合蛋白5(fatty acid binding protein 5，F(xiàn)ABP5)與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3]；體外實(shí)驗(yàn)，通過構(gòu)建慢病毒載體，采用細(xì)胞計(jì)數(shù)盒8法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示FABP5可促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，通過裸鼠移植瘤和肺轉(zhuǎn)移瘤模型相關(guān)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示FABP5還可促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[4]。但在臨床上，F(xiàn)ABP5與宮頸癌患者預(yù)后的關(guān)系尚未見報(bào)道。本研究旨在探討臨床上FABP5在人體宮頸癌組織的表達(dá)情況及與宮頸癌患者的臨床、病理參數(shù)之間的相關(guān)性，采用多變量COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析及生存分析，評估FABP5在宮頸癌患者預(yù)后中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 組織標(biāo)本 選取2003年1月至2007年12月在中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院行廣泛性子宮切除術(shù)和系統(tǒng)性腹膜后淋巴結(jié)切除術(shù)的早期宮頸癌組織蠟塊共206例(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性41例，陰性165例)。患者年齡為27.0～68.0歲，中位年齡42.7歲。隨訪截止日期：2016年12月31日，隨訪時(shí)間均不少于60個(gè)月。

入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)術(shù)后病理類型為鱗狀細(xì)胞癌(所有組織病理診斷均由兩名副高以上的病理學(xué)專家在雙盲的情況下完成)。(2)臨床分期為Ⅰa2～Ⅱa2期(FIGO 2009)。(3)術(shù)前均未接受放療、化療及生物學(xué)治療，術(shù)后輔助治療規(guī)范，系統(tǒng)。

選取2003年1月至2007年12月相匹配年齡的40例因子宮肌瘤在中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院行全子宮切除的正常宮頸組織作為空白對照組。

1.2 免疫組化 所有病理切片均采用SP法免疫組化染色，光鏡觀察。FABP5抗體(1∶600)購于Abcam公司(Cambridge, MA, USA)。染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：陽性為細(xì)胞漿或細(xì)胞核中出現(xiàn)黃色細(xì)小顆粒。按染色強(qiáng)度及染色面積綜合計(jì)分：(1)染色強(qiáng)度：0(無色或藍(lán)色)，1(淡黃色)，2(棕黃色)，3(棕褐色)。(2)染色面積：0(0%),1(<30%),2(30%～60%)，3(60%～100%)。染色指數(shù)計(jì)算公式為：免疫組化評分=染色強(qiáng)度評分+染色面積評分(范圍從0～6)?？偡?～3分為FABP5蛋白低表達(dá)，4～6分為FABP5蛋白高表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)處理采用SPSS 13.0 (SPSSInc., Chicago, IL, USA) 和MeldCalc分析軟件(MedCalc Software, Mariakerke, Belgium)。獨(dú)立樣本組間比較采用t檢驗(yàn)。FABP5與臨床病理參數(shù)間相關(guān)性分析采用Pearson2test或Fisher′s exact test。早期宮頸癌預(yù)后因素分析采用多變量COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析分析及Kaplan-Meier生存分析，生存差別比較采用Log-rank檢驗(yàn)。P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌組織中FABP5的表達(dá) 206例宮頸癌樣本(其中41例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，165例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)和40例正常宮頸組織樣本中，免疫組化結(jié)果顯示FABP5高表達(dá)主要集中在細(xì)胞核和細(xì)胞漿中；宮頸癌組織中FABP5的表達(dá)較正常宮頸組織顯著升高(P<0.05)；且在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組較陰性組表達(dá)顯著升高(P<0.05)。而在正常宮頸組織中，F(xiàn)ABP5僅在宮頸上皮層低表達(dá)(圖1)。

2.2 FABP5與宮頸癌的臨床病理參數(shù)的相關(guān)性 FABP5與臨床參數(shù)中的FIGO分期(P<0.001)和腫瘤大小(P=0.011)顯著相關(guān)；與病理參數(shù)中的宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移(P<0.001)、淋巴脈管浸潤(P<0.001)顯著相關(guān)，而與其他的臨床參數(shù)(年齡)、病理參數(shù)(宮頸間質(zhì)浸潤、腫瘤分化程度、宮旁轉(zhuǎn)移和陰道轉(zhuǎn)移)無關(guān)(P>0.05)(表1)。

2.3 FABP5與生存預(yù)后的相關(guān)性研究 隨訪期間內(nèi)宮頸癌復(fù)發(fā)有54例(26.21%)；因?qū)m頸癌死亡的有49例(23.79%)。應(yīng)用多變量COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果顯示：年齡、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小和FABP5為宮頸癌的獨(dú)立預(yù)后因素(表2)。Kaplan-Meier生存曲線顯示：隨著FABP5的上調(diào)，復(fù)發(fā)率顯著提高(圖2-A)；且FABP5高表達(dá)組的總體生存率顯著低(圖2-B)。

表1 FABP5與宮頸癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性 例

3 討論

隨著防癌篩查普及，宮頸癌的早診率逐漸增高，晚期患者有所減少，且病死率逐年下降，但總的5年生存率僅有50%，改善預(yù)后的最大障礙是初治后復(fù)發(fā)病例的治療[5]。我們前期研究應(yīng)用雙向熒光差異凝膠電泳(two-dimensional fluorescence difference in gel electrophoresis, 2D-DIGE)聯(lián)合MALDI-TOF/TOF MS定量比較分析了不同淋巴結(jié)狀態(tài)的宮頸癌灶的蛋白質(zhì)組學(xué)，發(fā)現(xiàn)FABP5在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的宮頸癌灶中表達(dá)顯著上調(diào)，F(xiàn)ABP5為宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測標(biāo)志物[3]。且在前期的體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)中顯示FABP5可促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[4]。但FABP5在預(yù)測宮頸癌患者的預(yù)后中價(jià)值尚不清楚。

FABP5為脂肪酸結(jié)合蛋白家族重要成員，分子量大小為15KD，位于胞漿。FABP5可與跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)載體、脂粒、過氧化物酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、CD36等相互結(jié)合，參與脂肪酸的攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝，為細(xì)胞生長提供能量和原材料[6]。FABP5作為維甲酸(retinotic acid, RA)的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，結(jié)合并轉(zhuǎn)運(yùn)RA，活化過氧化物酶體增殖物激活受體β/δ(peroxisome proliferator-activated receptorβ/δ, PPARβ/δ)，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞的凋亡[7]。近來一些研究發(fā)現(xiàn)FABP5在肝內(nèi)膽管癌[8]、前列腺癌[9]、星形神經(jīng)膠質(zhì)瘤[10]和乳腺癌[11]等腫瘤中高表達(dá)。而目前有關(guān)FABP5在宮頸癌中表達(dá)

表2 多變量COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析總體生存和無復(fù)發(fā)生存

注：A：FABP5的表達(dá)和無復(fù)發(fā)生存率(Log-rank檢驗(yàn)，P<0.000 1);B：FABP5的表達(dá)和總體生存率(Log-rank檢驗(yàn)， P=0.000 3)

情況尚未見報(bào)道。本研究中我們發(fā)現(xiàn)在206例宮頸癌組織標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)FABP5的表達(dá)較正常宮頸組織顯著高(P<0.05)；且在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組較陰性組表達(dá)顯著高(P<0.05)。通過相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)FABP5與臨床參數(shù)中的FIGO分期(P<0.001)和腫瘤大小(P=0.011)顯著相關(guān)；與病理參數(shù)中的宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移(P<0.001)、淋巴脈管浸潤(P<0.001)顯著相關(guān)。Jeong等[8]報(bào)道的肝內(nèi)膽管癌中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，F(xiàn)ABP5呈高表達(dá)，且通過單變量分析發(fā)現(xiàn)FABP5的表達(dá)與腫瘤的大小P=0.047)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.013)、淋巴管浸潤(P=0.032)和腫瘤分期(P=0.007)密切相關(guān)。本研究結(jié)果提示FABP5在宮頸癌組織中的表達(dá)情況與上述研究一致。且Kaplan-Meier生存曲線顯示隨著FABP5的上調(diào)，復(fù)發(fā)率顯著提高；總體生存率顯著低。Campos 等[10]通過生存曲線顯示隨著FABP5的表達(dá)越高，星形神經(jīng)膠質(zhì)瘤的惡性程度越高，患者總體生存率更短。這一結(jié)果與我們的數(shù)據(jù)相一致。從以上結(jié)果可見FABP5與腫瘤的不良預(yù)后相關(guān)。

我們進(jìn)一步行多變量COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示FABP5、年齡、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小為宮頸癌的獨(dú)立預(yù)后因素。章文華等[12]早年報(bào)道影響早期宮頸癌預(yù)后的相關(guān)因素有腫瘤大小、肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴血管間隙受侵、分期、年齡、組織學(xué)類型和分化等；其中腫瘤大小、深肌層浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響預(yù)后的重要因素，對預(yù)后和生存的影響最大。而本研究結(jié)果提示FABP5與宮頸癌患者的FIGO分期(P<0.001)、腫瘤大小(P=0.011)、宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移(P<0.001)、淋巴脈管浸潤(P<0.001)顯著相關(guān)，由此可見，F(xiàn)ABP5可在一定程度上可預(yù)測患者的預(yù)后。那么在臨床上，對宮頸癌癌癥組織進(jìn)行活檢時(shí)，同時(shí)行免疫組化檢測癌組織的FABP5表達(dá)情況，以達(dá)到術(shù)前、無創(chuàng)的方式明確患者的預(yù)后，且可作為患者術(shù)后的隨訪指標(biāo)，明確術(shù)后有無復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的高危因素，對指導(dǎo)患者下一步治療方案具有重要的臨床價(jià)值。

綜上所述，F(xiàn)ABP5在宮頸癌中高表達(dá)，且與宮頸癌患者FIGO分期、腫瘤大小、宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移、淋巴脈管浸潤顯著相關(guān)，可作為宮頸癌不良預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)。臨床上，在行宮頸癌組織活檢時(shí)，同時(shí)檢測FABP5的表達(dá)情況，有助于臨床醫(yī)生明確患者預(yù)后情況，指導(dǎo)相關(guān)治療。本研究仍是單中心回顧性研究，下一步仍需擴(kuò)大樣本、多中心、前瞻性研究加以證實(shí)。