硫酸氫氯吡格雷片近紅外模型建立與驗(yàn)證

趙艷秋，周子鈺，尹燕杰，張昊天

(1.哈爾濱市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，哈爾濱 150025；2.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)，哈爾濱 150001)

近紅外光譜是在可見(jiàn)光(Vis)和中紅外光(MIR)之間，光譜區(qū)間為 780 ～2 526 nm 的電磁輻射波.由于有機(jī)分子中如氧氫鍵、氮?dú)滏I、碳?xì)滏I一類(lèi)的含氫基團(tuán)的振動(dòng)的合頻和各級(jí)倍頻的吸收區(qū)間與近紅外光譜區(qū)間一致，因此，在近紅外光譜區(qū)間下對(duì)樣品進(jìn)行掃描，可以獲得樣品中有機(jī)分子的含氫基團(tuán)的特征信息[1].近紅外光譜分析技術(shù)檢驗(yàn)藥品，操作簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確、且使用成本低、環(huán)保無(wú)污染、同時(shí)還不消耗化學(xué)試劑、不損傷樣品，優(yōu)點(diǎn)繁多，并且在食品、藥品、石油和化工等行業(yè)被廣泛利用[2-4].如今，近紅外檢驗(yàn)的數(shù)據(jù)庫(kù)還不夠完善，各地藥檢所都在努力完善數(shù)據(jù)庫(kù)，為大家?guī)?lái)更大的便捷[5-6].

硫酸氫氯吡格雷片是一種有效的血小板高聚集抑制劑，是治療和預(yù)防因血小板高聚集狀態(tài)引起的動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成事件的專(zhuān)用藥.臨床上應(yīng)用于治療動(dòng)脈粥狀硬化疾病、急性冠脈綜合癥、預(yù)防冠脈內(nèi)支架植入術(shù)后支架內(nèi)再狹窄和血栓性并發(fā)癥等.與其他抗血小板藥物相比，該藥具有療效強(qiáng)、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，在臨床上有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)[7-11].目前,已上市產(chǎn)品僅有法國(guó)賽諾菲生產(chǎn)的波立維、深圳信立泰藥業(yè)生產(chǎn)的泰嘉及樂(lè)普藥業(yè)生產(chǎn)的帥泰.進(jìn)口藥品波立維曾經(jīng)在我省市場(chǎng)上出現(xiàn)過(guò)假藥，因此，本實(shí)驗(yàn)將建立進(jìn)口藥品波立維的近紅外一致性檢驗(yàn)?zāi)Ｐ停郧竽芸焖?、方便、?zhǔn)確地鑒別出假藥劣藥.

1 儀器與試藥

1.1 儀器

MATRIX—F 型傅里葉變換近紅外光譜儀(德國(guó) Bruker 公司)，OPUS 5.0 光譜分析軟件

1.2 試藥

硫酸氫氯吡格雷片(75mg)賽諾菲制藥有限公司(批號(hào) 7A658、7A583、7A453、7A626、7A665、7A540、7A543、7A406、7A622、7A710、7A644、7A719、7A523);硫酸氫氯吡格雷片(75 mg)樂(lè)普藥業(yè)股份有限公司(批號(hào) A181210A2).

2 方法與結(jié)果

2.1 參數(shù)設(shè)定

波長(zhǎng)掃描范圍為 4 000～12 000 cm-1，掃描次數(shù)為 32 次，分辨率為 8 cm-1，環(huán)境溫度 20～27 ℃，空氣濕度<70%.

2.2 光譜采集

取批號(hào)為 7A658、7A583、7A453、7A626、7A665、7A540、7A543、7A406硫酸氫氯吡格雷片8批，各取1片，放置在檢測(cè)窗上，探頭抵住藥片，按2.1項(xiàng)設(shè)定參數(shù)依法測(cè)得光譜.每一批次藥品測(cè)定六次，共得到 48張?jiān)脊庾V，如圖1所示.

圖1 硫酸氫氯吡格雷片的原始光譜

2.3 光譜的預(yù)處理

使用 OPUS5.0 分析軟件自帶功能對(duì)原始光譜進(jìn)行預(yù)處理.本實(shí)驗(yàn)分別采用一階導(dǎo)數(shù)化+矢量歸一化法以及二階導(dǎo)數(shù)化+矢量歸一化法分別對(duì)光譜進(jìn)行預(yù)處理，結(jié)果如圖2所示.

圖2 硫酸氫氯吡格雷片預(yù)處理后的光譜

2.4 一致性模型的建立

預(yù)處理的光譜分別選取譜段9 000～7 500 cm-1、6 900～5 600cm-1、5 000～4 250cm-1，平滑點(diǎn)為 l7，CI 限度值為 7[12-14]，分別建立模型I(一階導(dǎo)數(shù)化+矢量歸一化法)模型II(二階導(dǎo)數(shù)化+矢量歸一化法)，如圖3所示.

圖3 硫酸氫氯吡格雷片一致性檢驗(yàn)

2.5 模型的驗(yàn)證

2.5.1 同廠(chǎng)家驗(yàn)證

取批號(hào)7A622、7A710、7A644、7A719、7A523的硫酸氫氯吡格雷片各1片，放置在檢測(cè)窗上，探頭抵住藥片，按2.1項(xiàng)設(shè)定參數(shù)依法測(cè)得光譜.經(jīng)2.3項(xiàng)預(yù)處理后分別代入模型I及模型II，結(jié)果如圖4所示，CI 限度值均小于 7，同廠(chǎng)家5批次產(chǎn)品均通過(guò)模型I及模型II驗(yàn)證.

圖4 同廠(chǎng)家硫酸氫氯吡格雷片驗(yàn)證結(jié)果

2.5.2 不同人員驗(yàn)證

另取2.5.1項(xiàng)下5批樣品，換不同人員進(jìn)行光譜采集，經(jīng)2.3項(xiàng)預(yù)處理后分別代入模型I及模型II，結(jié)果如圖5所示，CI 限度值均小于 7，不同人員采集結(jié)果均通過(guò)模型I及模型II的驗(yàn)證.

圖5 不同人員驗(yàn)證硫酸氫氯吡格雷片結(jié)果

2.5.3 不同儀器驗(yàn)證

另取2.5.1項(xiàng)下5批樣品，用本實(shí)驗(yàn)室同型號(hào)近紅外光譜儀進(jìn)行光譜采集，經(jīng)2.3項(xiàng)預(yù)處理后分別代入模型I及模型II，結(jié)果如圖6所示，CI 限度值均小于 7，不同儀器采集結(jié)果均通過(guò)模型I及模型II的驗(yàn)證.

圖6 不同儀器驗(yàn)證硫酸氫氯吡格雷片結(jié)果

2.5.4 不同廠(chǎng)家驗(yàn)證

取樂(lè)普藥業(yè)生產(chǎn)的相同規(guī)格的硫酸氫氯吡格雷片1片，放置在檢測(cè)窗上，探頭抵住藥片，按2.1項(xiàng)設(shè)定參數(shù)依法測(cè)得光譜.經(jīng)2.3項(xiàng)預(yù)處理后分別代入模型I及模型II，結(jié)果如圖7所示，CI 限度值遠(yuǎn)大于 7，因此模型I及模型II通過(guò)驗(yàn)證.

圖7 不同廠(chǎng)家硫酸氫氯吡格雷片驗(yàn)證結(jié)果

3 討 論

原始光譜中包含信息繁雜，既有主成分及輔料的有用信息，也有背景、噪音、光散射效應(yīng)等干擾信息.適當(dāng)處理頻譜可以減少或消除各種干擾因素對(duì)頻譜的影響.使用 OPUS5.0 分析軟件自帶功能對(duì)原始光譜進(jìn)行預(yù)處理.預(yù)處理的方法有很多，常見(jiàn)的如光譜數(shù)據(jù)平滑、求導(dǎo)、歸一化和基線(xiàn)校正.光譜數(shù)據(jù)平滑是消除噪聲的最常用方法之一.用于平滑數(shù)據(jù)的常用方法包括鄰域比較方法，移動(dòng)平均方法，指數(shù)平均方法等.在近紅外分析中，樣品中的不同組分之間會(huì)相互干擾從而導(dǎo)致吸收光譜的譜線(xiàn)出現(xiàn)重疊的現(xiàn)象.當(dāng)出現(xiàn)譜線(xiàn)重疊的現(xiàn)象時(shí)，可采用求導(dǎo)的方法進(jìn)行處理，通常使用的是一階求導(dǎo)和二階求導(dǎo).當(dāng)樣品稀釋或光程變化等變化影響光譜時(shí)，可以通過(guò)歸一化方法對(duì)圖譜進(jìn)行處理，其中包括最小/最大歸一化、矢量歸一化、回零校正，其中最常使用的是矢量歸一化.因此本次實(shí)驗(yàn)中，我們分別采用一階導(dǎo)數(shù)化+矢量歸一化以及二階導(dǎo)數(shù)化+矢量歸一化分別對(duì)光譜進(jìn)行預(yù)處理并各自建立模型[15].

經(jīng)不同廠(chǎng)家同規(guī)格的樣品驗(yàn)證模型I及模型II后，二者比較結(jié)果顯示，用二階導(dǎo)數(shù)化和矢量歸一化預(yù)處理的光譜比用一階導(dǎo)數(shù)化和矢量歸一化預(yù)處理的光譜更為偏離 CI限度值.推測(cè)模型II對(duì)于硫酸氫氯吡格雷片的鑒別更靈敏.

4 結(jié) 語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)成功建立進(jìn)口藥品硫酸氫氯吡格雷片的近紅外一致性檢驗(yàn)?zāi)Ｐ?，并通過(guò)驗(yàn)證，該方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，適用于進(jìn)口藥品硫酸氫氯吡格雷片的一致性快速檢驗(yàn)，大大提高稽查檢驗(yàn)人員工作效率.