殼寡糖對(duì)葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠的保護(hù)作用

陳 爽，王 斌，徐 穎，夏文水*

1江南大學(xué)食品學(xué)院 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；2江蘇省食品安全與質(zhì)量控制協(xié)同創(chuàng)新中心，無錫 214122

炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)和克羅恩癥(Crohn’s disease，CD)。潰瘍性結(jié)腸炎，于1875年由Wilk和Moxon發(fā)現(xiàn)，1903年由Boas和Wilk定義，1905年被WHO正式定為一種特殊的臨床病癥[1]。潰瘍性結(jié)腸炎，是一種非特異性結(jié)腸炎，主要位于大腸中的乙狀結(jié)腸和直腸，病灶連續(xù)性分布于黏膜及黏膜下層，并緩慢反復(fù)發(fā)作，也有少數(shù)急性發(fā)病，主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉和糞便粘稠帶膿血[2]，還伴隨有多種腸外癥狀[3]。潰瘍性結(jié)腸炎確切的病因和發(fā)病機(jī)制目前仍不明確，普遍認(rèn)為與感染、免疫系統(tǒng)失常、遺傳敏感性、環(huán)境、精神、菌群失調(diào)等多種因素有關(guān)[4，5]。其在西方國(guó)家十分常見，每105人中就有10～20人患病，其中北美和西歐發(fā)病率更高[6]。而近年來我國(guó)的UC患病率也呈上升趨勢(shì)。目前，治療結(jié)腸炎已有5-氨基水楊酸類(柳氮磺吡啶)、免疫抑制劑等對(duì)癥藥物，但具有一定副作用，因此尋找安全藥物成為研究熱點(diǎn)[7]。

殼寡糖(chitooligosaccharides，COS)，由殼聚糖(chitosan，CS)水解產(chǎn)生，聚合度2～20，且平均分子量小于3 900 Da[8-10]。其分子量小、易溶于水，可被生物機(jī)體直接吸收，具有減脂、降糖、抑菌、抗癌、抗炎等生物活性，且無毒副作用，可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化妝品、食品和農(nóng)業(yè)等多個(gè)領(lǐng)域[11,12]。其中殼聚糖可由世界上含量?jī)H次于纖維素的第二豐富的聚合物——甲殼素(常見于甲殼類動(dòng)物殼，昆蟲表皮和真菌細(xì)胞壁[10,13])脫乙?；@得。目前，已有一些殼寡糖作用腸炎的研究，如Yang等[14]發(fā)現(xiàn)殼寡糖可通過AMPK、NF-κB實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)腸炎的保護(hù)作用。但是在應(yīng)用濃度上明顯偏高(一般為500 mg/kg，換算為人體劑量約3.6 g)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過國(guó)家推薦攝入劑量0.5 g/天(參見《關(guān)于批準(zhǔn)殼寡糖等6種新食品原料的公告(2014年第6號(hào))》，換算成小鼠劑量為70 mg/kg)。而Yousef[15]利用乙酸滴注結(jié)腸炎模型、腸上皮細(xì)胞試驗(yàn)等發(fā)現(xiàn)20 mg/kg劑量下的殼寡糖也能對(duì)腸炎起到保護(hù)作用。因此本文主要通過 3% DSS 飲用水誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠模型，驗(yàn)證殼寡糖在不同劑量下(70和140 mg/kg)對(duì)結(jié)腸炎的干預(yù)情況，探究殼寡糖在調(diào)節(jié)小鼠結(jié)腸炎癥和生理狀態(tài)上的作用，為進(jìn)一步研究殼寡糖對(duì)DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠的保護(hù)作用提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

葡聚糖硫酸鈉(DSS，相對(duì)分子量36 000～50 000 Da，美國(guó)MP生物醫(yī)學(xué)公司)；殼寡糖(相對(duì)分子量約為1 299 Da，脫乙酰度85%，浙江金殼生物化學(xué)有限公司)；柳氮磺吡啶(美國(guó)Sigma公司，批號(hào)S0883-10G)；隱血測(cè)試盒、髓過氧化物酶(MPO)試劑盒(南京建成生物工程研究所)；IL-6、TNF-αELISA檢測(cè)試劑盒(美國(guó)R&D公司)；蘇木素伊紅(HE染色)試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)。

WTL-6K迷你離心機(jī)(湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；4K15冷凍型大容量離心機(jī)(德國(guó)Sigma公司)；UV-1800型紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司)；M5酶標(biāo)儀(美國(guó)Molecular Devices公司)；PM2245徠卡手動(dòng)轉(zhuǎn)輪切片機(jī)(德國(guó)徠卡公司)；ECLIPSE尼康顯微鏡(日本尼康公司)；DK0-8D恒溫水浴鍋(金壇市新航儀器廠)；超低溫冷凍冰箱(日本三洋電機(jī)公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

野生型SPF級(jí)的6～8周齡雄性C57BL/6小鼠50只，體重在18～20 g，購買于斯貝福(北京)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2019-0010，飼養(yǎng)于江南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(蘇)2016-0045。保持室溫20～24 ℃，濕度60%～70%，人工光照12 h/天，實(shí)驗(yàn)開始前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由飲食。

將小鼠隨機(jī)分為5組，10只/組，除空白組外，各組連續(xù)飲用3% DSS 7天建立潰瘍性結(jié)腸炎模型，同時(shí)給予相應(yīng)藥物治療：DSS組(無菌水，0.2 mL，灌胃)；陽性組(柳氮磺吡啶50 mg/kg，0.2 mL，灌胃)；殼寡糖低劑量組(殼寡糖70 mg/kg，0.2 mL，灌胃)；殼寡糖高劑量組(殼寡糖140 mg/kg，0.2 mL，灌胃)。所有藥物現(xiàn)配現(xiàn)用，小鼠自由采食。第8天，所有小鼠眼球取血，3 000 rpm離心10 min取血清-80 ℃保存。斷頸處死小鼠，迅速剪開腹腔，取出整段結(jié)腸，測(cè)定長(zhǎng)度，縱向剪開，分離結(jié)腸內(nèi)容物，用預(yù)冷PBS清洗，定性濾紙干燥，稱重。留取相同部位用4%多聚甲醛固定，做病理組織學(xué)，剩下部分液氮速凍，轉(zhuǎn)存-80 ℃冰箱待用。

1.2.2 疾病活動(dòng)指數(shù)(disease activity index，DAI)和組織病理學(xué)評(píng)分

每日觀察小鼠進(jìn)食飲水、毛發(fā)等生理狀態(tài)和體重、糞便、隱血等情況，計(jì)算體重變化率和DAI總分。參考Cooper[16]的DAI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，見表1。

體重變化率=實(shí)驗(yàn)當(dāng)天體重/起始體重×100%

DAI=大便性狀+體重丟失+便血情況

結(jié)腸經(jīng)4%多聚甲醛固定，脫水透明，石蠟包埋后，切片、脫蠟和HE染色，透明并封片，鏡檢觀察。病理組織學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)則參照Cooper標(biāo)準(zhǔn)[16]，具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：0正常腸黏膜；1黏膜層輕度炎癥和水腫，基底部1/3隱窩消失；2黏膜層中度炎癥，基底部2/3隱窩消失；3黏膜層中度炎癥，隱窩完全消失，但上皮層尚完整；4粘膜層、粘膜下層、肌層重度炎癥，隱窩和上皮層消失。

表1 DAI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1.2.3 結(jié)腸髓過氧化物酶(MPO)活性及IL-6和TNF-α含量的檢測(cè)

結(jié)腸MPO活性按照南京建成試劑盒說明書進(jìn)行測(cè)定。結(jié)腸IL-6和TNF-α含量檢測(cè)按照R&D試劑盒說明書進(jìn)行測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 小鼠體重和DAI變化

如圖1所示，實(shí)驗(yàn)前各組間小鼠體重?zé)o顯著差異(P>0.05)，隨著DSS的飲用，除空白組體重每天緩慢增長(zhǎng)外，所有飲用DSS水的小鼠體重呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，模型組小鼠從第6天開始體重變化率與空白組相比具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，第7天開始較空白組具有極顯著差異(P<0.01)。殼寡糖低、高劑量組和陽性藥柳氮磺吡啶組，相比模型組，體重下降程度有所減小，但無顯著性差異(P>0.05)。其中殼寡糖低、高劑量組后期趨勢(shì)近乎重合，且相比陽性組，體重下降趨勢(shì)減緩。

除體重外，自由飲用DSS水的各組小鼠也出現(xiàn)飲食減少的癥狀，且第4天開始出現(xiàn)不同程度的腹瀉，第6天開始逐漸出現(xiàn)便血等癥狀。第5天開始，模型組小鼠的DAI評(píng)分顯著增加，與空白組具有極顯著差異(P<0.01)。至第8天，模型組的DAI評(píng)分達(dá)到最高。其中殼寡糖各劑量組和陽性組，相比模型組，DAI評(píng)分均有下降趨勢(shì)，與模型組無顯著區(qū)別(P>0.05)，其中殼寡糖各劑量組評(píng)分低于陽性組。

圖1 殼寡糖對(duì)結(jié)腸炎小鼠體重變化率和DAI評(píng)分的影響Fig.1 Effects of COS on the weight change and DAI score of colitis in mice注：模型組與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01。Note:Model group compared with control group,#P<0.05,##P<0.01.

2.2 結(jié)腸長(zhǎng)度、病理組織學(xué)評(píng)分

結(jié)腸長(zhǎng)度是衡量小鼠結(jié)腸炎的一個(gè)重要指標(biāo)，隨著炎癥的加重，結(jié)腸會(huì)腫脹縮短。

如圖2和表2所示，空白組小鼠結(jié)腸表面光滑，未見水腫充血癥狀，腸內(nèi)糞便成型，長(zhǎng)度最長(zhǎng)，而模型組小鼠的結(jié)腸相比空白組長(zhǎng)度極顯著縮短(P< 0.01)，且伴有明顯水腫，腸道內(nèi)糞便呈血水樣膿液。干預(yù)后，小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度縮短情況有所緩解，其中殼寡糖低劑量組的結(jié)腸縮短程度相比模型組具有極顯著差異(P< 0.01)，說明殼寡糖70 mg/kg劑量下能顯著緩解DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸縮短癥狀。而陽性組與模型組沒有明顯變化(P> 0.05)。

圖2 殼寡糖對(duì)結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度的影響 Fig.2 Effects of COS on the colon length of colitis in mice注：箭頭右邊腸道為結(jié)腸。a：空白組；b：模型組；c：陽性組；d：殼寡糖低劑量組；e：殼寡糖高劑量組，下同。Note:The right part of the arrow is the colon.a:Control group;b:Model group;c:SASP;d:COSL;e:COSH,the same below.

表2 殼寡糖對(duì)結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度和重量/長(zhǎng)度比值的影響

圖3 小鼠結(jié)腸組織HE染色病理圖(×100)及評(píng)分圖Fig.3 Histopathological microphotographs and scores of colonic mucosa of mice stained with hematoxylin and eosin (×100)注：與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01，下同。Note:Compared with control,##P<0.01;Compared with model, *P<0.05,**P<0.01,the same below.

經(jīng)過石蠟包埋H&E染色后，鏡檢觀察，如圖3所示：空白組小鼠的結(jié)腸粘膜層完整，腺體排列整齊，未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。而模型組的結(jié)腸粘膜明顯水腫，腺體明顯缺失，隱窩和杯狀細(xì)胞消失大半，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況嚴(yán)重，病理評(píng)分與空白組相比極顯著增加(P<0.01)。而結(jié)腸炎小鼠給藥(陽性藥和殼寡糖)后，結(jié)腸粘膜的上皮細(xì)胞較模型組完整，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)雖至粘膜下層，但程度較輕，顯示損傷有所改善。其中陽性組和殼寡糖高劑量組病理評(píng)分與模型組相比，顯著下降(P<0.05)。殼寡糖低劑量組的杯狀細(xì)胞隱窩等結(jié)構(gòu)是所有飲用DSS水小鼠中最完整的，與模型組具有極顯著差異(P<0.01)。

2.3 髓過氧化物酶

如圖4所示，飲用DSS水后，模型組小鼠的結(jié)腸髓過氧化物酶活性(MPO)較空白組升高，且具有顯著差異(P<0.05)。給藥干預(yù)后，陽性組的MPO活性顯著下降，與模型組有顯著差異(P<0.05)，而殼寡糖低、高劑量組的MPO活性相對(duì)模型組有一定下降，但沒有顯著差異(P>0.05)。

圖4 殼寡糖對(duì)結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織MPO活性的影響Fig.4 Effects of COS on the MPO activity of colitis in mice

2.4 結(jié)腸炎癥因子

ELISA檢測(cè)結(jié)果所示圖5，與空白組相比，模型組小鼠中結(jié)腸組織的促炎因子IL-6和TNF-α水平升高，且具有極顯著差異(P<0.01)，表明DSS引起明顯結(jié)腸炎癥；給藥后，與模型組相比，殼寡糖低、高劑量組的小鼠能顯著下調(diào)結(jié)腸組織中的促炎因子(P<0.05)，其中陽性組與模型組具有極顯著差異(P<0.01)，水平接近空白組。

圖5 殼寡糖對(duì)結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織IL-6和TNF-α濃度的影響Fig.5 Effects of COS on the concentrations of IL-6 and TNF-α in colonic homogenates of colitis in mice

3 討論

DSS結(jié)腸炎模型是1990年建立的國(guó)際公認(rèn)并被廣泛應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)性UC動(dòng)物模型，其病理改變?yōu)闈冃纬?、隱窩膿腫、小血管炎癥、杯狀細(xì)胞減少以及各種炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，和人體結(jié)腸炎臨床癥狀及其相似。國(guó)家推薦殼寡糖的人體劑量為0.5 g/人，換算成小鼠劑量為70 mg/kg，因此，利用此模型，我們選用70 mg/kg和140 mg/kg兩種殼寡糖劑量探究其對(duì)DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的干預(yù)效果。韓國(guó)一篇文獻(xiàn)對(duì)殼寡糖進(jìn)行了急性毒性實(shí)驗(yàn)，認(rèn)為殼寡糖在小鼠體內(nèi)的LD50超過5.0 g/kg[17]。Zhao等[18]對(duì)殼寡糖功能食品進(jìn)行的安全性評(píng)價(jià)顯示，通過對(duì)小鼠(1.25 g/kg/天)、大鼠(1.47 g/kg/天)給藥(約臨床推薦劑量的312～368倍)，10天內(nèi)未觀察到急性毒性反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)通過讓小鼠自由飲用3% DSS 7天，建立潰瘍性結(jié)腸炎模型。在實(shí)驗(yàn)第6天可觀察到模型組小鼠出現(xiàn)典型的結(jié)腸炎生理癥狀，如體重減輕，食欲不振，毛發(fā)不光滑、腹瀉、糞便粘稠帶血甚至肛門帶血等。第八天解剖發(fā)現(xiàn)模型組小鼠結(jié)腸縮短、結(jié)腸組織充血、水腫，HE染色發(fā)現(xiàn)結(jié)腸粘膜水腫，上皮細(xì)胞不完整、隱窩腺體結(jié)構(gòu)消失、炎癥浸潤(rùn)嚴(yán)重等。而通過殼寡糖低劑量(70 mg/kg)、高劑量(140 mg/kg)干預(yù)的小鼠，上述癥狀均有所改善。和Yousef等[15]的結(jié)果一致，他指出的殼寡糖能減少腸道上皮細(xì)胞的凋亡，抑制炎癥，保護(hù)腸上皮屏障的結(jié)構(gòu)和功能完好。有研究認(rèn)為炎性腸病是由腸上皮屏障缺陷和粘膜免疫應(yīng)答失調(diào)引起的[2]，殼寡糖能保護(hù)腸上皮細(xì)胞，說明其在腸炎中起到了重要的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)中，殼寡糖70 mg/kg劑量組在改善結(jié)腸縮短程度、緩解結(jié)腸粘膜水腫、保護(hù)杯狀細(xì)胞和隱窩結(jié)構(gòu)等方面，與模型組相比具有顯著性差異，而140 mg/kg劑量組在改善結(jié)腸縮短程度方面，相比模型組沒有顯著性差異，在改善病理組織評(píng)分上僅有顯著差異，顯示殼寡糖低劑量組對(duì)DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠的保護(hù)作用更好。結(jié)果表明70 mg/kg劑量殼寡糖有一定緩解小鼠結(jié)腸縮短，保護(hù)結(jié)腸結(jié)構(gòu)的作用，有助于殼寡糖在國(guó)家推薦的劑量下進(jìn)行開發(fā)應(yīng)用。

目前IBD的治療方向主要有氧化應(yīng)激和炎癥。其中認(rèn)為氧化應(yīng)激是IBD的致病基礎(chǔ)，其中過量的氧自由基是潰瘍性炎癥組織損傷和結(jié)腸炎形成的關(guān)鍵因素[19]。隨著MDA的產(chǎn)生，過量的NO 產(chǎn)生氧自由基，引起氧化損傷，從而導(dǎo)致組織中大量炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)[20]。中性粒細(xì)胞在UC早期是最快募集到炎癥部位的免疫細(xì)胞。其具有雙重作用，一方面在上皮隱窩和腸腔內(nèi)聚集，通過釋放活性氧(ROS)分泌IL-1、IL-6、MPO等，誘導(dǎo)進(jìn)一步的組織損傷，另一方面通過分泌抗炎因子積極維持組織環(huán)境穩(wěn)態(tài)，并可限制微生物侵襲[21]。Qiao等[22]研究發(fā)現(xiàn)殼寡糖在LPS誘導(dǎo)的敗血癥小鼠模型中能降低受損器官中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。Dou等[23]在兔體內(nèi)發(fā)現(xiàn)殼寡糖能抑制已活化的中性粒細(xì)胞產(chǎn)生活性氧、抑制其脫顆粒和黏附，從而起到抗炎作用。髓過氧化物酶值(MPO)是組織損傷和中性粒細(xì)胞(PMN)浸潤(rùn)的標(biāo)志，可導(dǎo)致粘膜破裂和潰瘍，且與IBD有重要關(guān)系[24,25]。

實(shí)驗(yàn)中結(jié)腸炎模型組小鼠MPO活性相比空白組顯著上升，表明中性粒細(xì)胞在腸道組織內(nèi)明顯增多，浸潤(rùn)嚴(yán)重。殼寡糖干預(yù)后，結(jié)腸組織MPO活性有所下降，雖然未與模型組具有顯著差異，但也有減緩中性粒細(xì)胞在腸道聚集，減少進(jìn)一步組織損傷的趨勢(shì)。這和Dou等[11]在糖原性腹膜炎小鼠中發(fā)現(xiàn)的殼寡糖能促進(jìn)中性粒細(xì)胞的凋亡，減少M(fèi)PO的釋放一致，猜測(cè)其可能通過活化PLD和PI3K，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞產(chǎn)生超氧化物等物質(zhì)有關(guān)。

而UC是多種因素共同作用的結(jié)果，其中細(xì)胞因子在其中也發(fā)揮著重要作用。IL-6在低濃度時(shí)可刺激T細(xì)胞的增殖，活化B細(xì)胞的增殖，分泌抗體，高濃度時(shí)參與機(jī)體炎癥反應(yīng)。TNF-α，又稱腫瘤壞死因子-α，由活化后的巨噬細(xì)胞Ⅱ單核細(xì)胞活化產(chǎn)生，促進(jìn)凋亡。IL-6和TNF-α作為兩種重要的炎癥細(xì)胞因子，是機(jī)體受到致病刺激后，反應(yīng)最快速且顯著的炎癥因子，常見于各種免疫病、炎癥反應(yīng)、腫瘤免疫等病理過程[26]。在UC患者結(jié)腸粘膜組織中，IL-6和TNF-α在活動(dòng)期的表達(dá)遠(yuǎn)高于緩解期，在腸道粘膜的炎癥和免疫反應(yīng)中也起到重要作用,被認(rèn)為是介導(dǎo)IBD的關(guān)鍵細(xì)胞因子[27]。核因子-κB(NF-κB)是一種有關(guān)炎癥細(xì)胞因子表達(dá)的重要轉(zhuǎn)錄因子，機(jī)體受到刺激后，IκB可被激活降解，激活胞漿內(nèi)NF-κB并進(jìn)入細(xì)胞核，誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄，生成各種炎癥因子或趨化因子，如 IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α等，通過反饋放大進(jìn)一步加劇。Youself等[15]認(rèn)為殼寡糖通過抑制NF-κB通路緩解機(jī)體炎性反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)中潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織中的IL-6和TNF-α表達(dá)顯著升高，而殼寡糖低、高劑量組干預(yù)后能顯著降低其表達(dá)水平，與Yang[14]和Youself等[15]結(jié)果一致。表明殼寡糖可通過緩解炎性反應(yīng)有效改善結(jié)腸炎癥狀。

通過殼寡糖兩個(gè)劑量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，兩組劑量的殼寡糖均有減緩DSS誘導(dǎo)的體重?fù)p失、結(jié)腸縮短和抑制疾病活動(dòng)指數(shù)、MPO活性上升的趨勢(shì)，能顯著改善病理組織學(xué)變化、組織TNF-α、IL-6含量的增加，其中低劑量組較高劑量組在緩解結(jié)腸長(zhǎng)度、病理組織學(xué)變化中具有更優(yōu)作用。表明低劑量組COS在緩解結(jié)腸炎癥上具有更好的效果。Yousef等[15]用1、5、10、20、50、100 mg/kg劑量COS處理結(jié)腸炎小鼠，發(fā)現(xiàn)10和20 mg/kg COS具有最好效果，在之后的LPS、TNF-α誘導(dǎo)的T84細(xì)胞中，也發(fā)現(xiàn)了類似的COS劑量-效果之間的鐘形關(guān)系，猜測(cè)可能與COS能刺激兩種不同的信號(hào)通路，產(chǎn)生相反效應(yīng)，引起功能拮抗有關(guān)。此劑量-效果之間的聯(lián)系在本實(shí)驗(yàn)室之前的研究中也有發(fā)現(xiàn)，Ding[28]將35、70、140、210 mg/kg劑量COS應(yīng)用于酒精性脂肪肝小鼠，發(fā)現(xiàn)70和140 mg/kg組的保護(hù)效果較好。本文所選70和140 mg/kg COS可能正好處于鐘形的中后部分，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示低劑量組效果略好于高劑量組。

綜上所述，殼寡糖能有效緩解DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎癥狀，其中70 mg/kg的殼寡糖在緩解結(jié)腸長(zhǎng)度、結(jié)腸病理組織學(xué)變化上，相比140 mg/kg更有效，且在人體推薦劑量?jī)?nèi)，更適合作為應(yīng)用劑量。同時(shí)，殼寡糖可能通過緩解中性粒浸潤(rùn)程度和抑制促炎因子的釋放，起到降低炎癥、緩解IBD癥狀的作用。然而，殼寡糖在抑制炎性細(xì)胞因子釋放中的具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。