三種檢測(cè)方法在陰道分泌物真菌感染中應(yīng)用分析

劉宗哲 翁茂婷 張善弟

【摘?要】?目的：比較常規(guī)鏡檢法、熒光PCR核酸擴(kuò)增法（PCR法）和念珠菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)鑒定（真菌顯色培養(yǎng)法）三種方法對(duì)陰道分泌物真菌檢測(cè)結(jié)果的差異。方法：選取2017年1月至2017年12月就診于本院的婦科陰道炎患者，收集常規(guī)鏡檢法真菌陽(yáng)性和陰性標(biāo)本各50例。用PCR法鑒定陽(yáng)性標(biāo)本念珠菌類型，陰性標(biāo)本用熒光PCR核酸擴(kuò)增法重新鑒定。同時(shí)將35例PCR法檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行真菌顯色培養(yǎng)法培養(yǎng)鑒定，比較三者的結(jié)果。結(jié)果：50例常規(guī)鏡檢法陽(yáng)性的標(biāo)本，采用PCR法鑒定陽(yáng)性47例，以白色念珠菌為主，占37例，光滑假絲酵母菌次之，占5例，熱帶假絲酵母菌2例，白色念珠菌合并光滑假絲酵母菌1例，其他真菌2例。50例常規(guī)鏡檢法陰性標(biāo)本中，采用PCR法鑒定陽(yáng)性15例，其中白色念珠菌13例，光滑假絲酵母菌1例，熱帶假絲酵母菌1例。常規(guī)鏡檢法和PCR法陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;35例樣本中，有1份樣本經(jīng)PCR法鑒定為熱帶假絲酵母菌，而顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)未鑒定出，真菌顯色培養(yǎng)法與PCR法陽(yáng)性率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。結(jié)論：三種檢測(cè)方法各有利弊，常規(guī)鏡檢法應(yīng)為門診常規(guī)檢驗(yàn)中的首選。對(duì)于臨床上有典型癥狀而常規(guī)鏡檢法陰性的患者，建議采用PCR法或真菌顯色培養(yǎng)法培養(yǎng)檢測(cè)，以提高檢測(cè)準(zhǔn)確性和陽(yáng)性率。

【關(guān)鍵詞】?陰道分泌物;念珠菌;常規(guī)鏡檢法;熒光PCR核酸擴(kuò)增法;念珠菌顯色培養(yǎng)法

文章編號(hào)：WHR201910165

陰道炎是臨床上常見的婦科疾病，可由陰道細(xì)菌、念珠菌、陰道毛滴蟲等病原體引起。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[1]，由真菌引起的陰道炎約占20%～45%。隨著廣譜抗生素的廣泛應(yīng)用、各種婦科有創(chuàng)無創(chuàng)治療器械的使用，真菌性陰道炎的患病率也呈逐年上升狀態(tài)。目前臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)陰道念珠菌的檢查主要通過取陰道分泌物生理鹽水涂片進(jìn)行濕片鏡檢革蘭染色，得出結(jié)果[2]。存在鏡檢結(jié)果與患者臨床癥狀不符，不利于臨床醫(yī)生作出準(zhǔn)確診斷。真菌培養(yǎng)鑒定用時(shí)較長(zhǎng)，需一周才能出結(jié)果，限制了其在臨床門診中的應(yīng)用。本文對(duì)100例常規(guī)法陰道分泌物進(jìn)行PCR法和真菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)鑒定，通過比較三者的檢測(cè)結(jié)果，分析三種檢測(cè)方法的差異性。

1?資料與方法

1.1?一般資料

選取2017年1月至2017年12月就診于本院的陰道炎患者，陰道分泌物由本院婦科臨床醫(yī)生用無菌棉拭子按常規(guī)采集。密封后立即送至本科進(jìn)行檢驗(yàn)。收集常規(guī)鏡檢法真菌陽(yáng)性和陰性標(biāo)本各50例。

1.2?方法

1）常規(guī)鏡檢法：嚴(yán)格操作規(guī)程，在潔凈的載玻片上加一滴無菌生理鹽水，將陰道分泌物樣本均勻涂抹于載玻片上，再滴加2滴5%的氫氧化鈉溶液，高倍鏡下觀察，找到孢子或發(fā)芽體或假菌絲者，判斷為陽(yáng)性結(jié)果。

2）熒光PCR核酸擴(kuò)增法：提取陰道分泌物DNA，分半吸取5μL提取液加入含有白色念珠菌、光滑假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌核酸特異性Taqman的探針PCR反應(yīng)液管中，進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增后分析數(shù)據(jù)。

3）科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)鑒定：將PCR法檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的陰道分泌物標(biāo)本35例接種于沙保羅培養(yǎng)基，25℃培養(yǎng)24～48h，挑選單個(gè)菌落，接種于真菌顯色培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)24～48h，根據(jù)菌落顏色鑒定念珠菌類型。其中菌落為綠色至翠綠色為白色念珠菌，紫色為光滑念珠菌，熱帶假絲酵母菌為藍(lán)灰色，白色至粉紅色為其他念珠菌。

1.3?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS?22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用配對(duì)卡方檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?常規(guī)鏡檢法與PCR法檢測(cè)結(jié)果比較

3例陰道分泌物標(biāo)本常規(guī)鏡檢法檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，熒光PCR核酸擴(kuò)增法檢測(cè)結(jié)果卻為陰性;15例陰道分泌物標(biāo)本常規(guī)鏡檢法檢測(cè)結(jié)果為陰性，熒光PCR核酸擴(kuò)增法檢測(cè)結(jié)果卻為陽(yáng)性;兩種方法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2?PCR法真菌鑒定結(jié)果

50例常規(guī)鏡檢法陽(yáng)性的陰道分泌物標(biāo)本中，采用PCR法鑒定其真菌類型，在47例陽(yáng)性標(biāo)本中，白色念珠菌37例（78.7%），光滑假絲酵母菌5例（13.5%），熱帶假絲酵母菌2例（4.3%），白色念珠菌合并光滑假絲酵母菌1例（2.1%），其他真菌2例（4.3%）。50例常規(guī)鏡檢法真菌陰性的標(biāo)本，采用PCR法鑒定陽(yáng)性15例，分型為：白色念珠菌13例（86.7%），光滑假絲酵母菌例1（6.7%），熱帶假絲酵母菌1例（6.7%）。

2.3?PCR法與真菌顯色培養(yǎng)法結(jié)果比較

35例樣本中，有1份樣本經(jīng)PCR法鑒定為熱帶假絲酵母菌，而顯色培養(yǎng)法未鑒定出結(jié)果，兩種方法陽(yáng)性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

3?討論

念珠菌是人體正常定居菌之一。目前，真菌感染引起霉菌陰道病呈逐年上升趨勢(shì)，為陰道病第二大病因[3]。白色黏稠豆渣樣陰道分泌物是其典型特征。陰道分泌物涂片鏡下可觀察到典型的孢子、發(fā)芽體和假菌絲，通過臨床癥狀結(jié)合常規(guī)鏡檢法不難診斷。本文結(jié)果顯示，15例陰道分泌物標(biāo)本常規(guī)鏡檢法檢測(cè)結(jié)果為陰性，熒光PCR核酸擴(kuò)增法檢測(cè)結(jié)果卻為陽(yáng)性，提示常規(guī)鏡檢法可能導(dǎo)致部分念珠菌性陰道炎患者漏診。當(dāng)患者臨床癥狀與鏡檢不符，而常規(guī)鏡檢法未觀察到真菌的患者，有必要采用熒光PCR核酸擴(kuò)增法或真菌培養(yǎng)進(jìn)行明確診斷。本文中，3例常規(guī)鏡檢法檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的標(biāo)本，熒光PCR核酸擴(kuò)增法檢測(cè)結(jié)果卻為陰性，原因可能是這3例常規(guī)鏡檢法陽(yáng)性標(biāo)本所感染的真菌非本文監(jiān)測(cè)的3種真菌，從而導(dǎo)致兩者檢測(cè)結(jié)果不一致。因此，方法互補(bǔ)極為重要。

盡早為臨床提供診斷，解除患者痛苦，快速鑒定方法顯得尤為重要。本文結(jié)果顯示，白色念珠菌在真菌陰道炎中占比較大，其次為光滑假絲酵母菌，這與Martens等[4]和吳允暉[5]研究結(jié)果一致?？片敿文钪榫@色培養(yǎng)基培養(yǎng)鑒定可通過菌落的不同顏色和不同形態(tài)對(duì)念珠菌進(jìn)行分離和快速鑒定，使用方便，但檢測(cè)過程較為費(fèi)時(shí)，且手工通過沙保羅培養(yǎng)基培養(yǎng)，易遺漏對(duì)念珠菌的診斷[6-7]。而采用熒光PCR核酸擴(kuò)增法真菌鑒定無需進(jìn)行菌落培養(yǎng)，直接提取陰道分泌物DNA進(jìn)行熒光PCR擴(kuò)增，可快速鑒定出常見的致病念珠菌菌種，有利于快速、準(zhǔn)確診斷念珠菌性陰道炎[8]。本文結(jié)果顯示，PCR法真菌鑒定與顯色培養(yǎng)法結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示熒光PCR核酸擴(kuò)增法真菌鑒定結(jié)果準(zhǔn)確。

由此可見，常規(guī)鏡檢法、熒光PCR核酸擴(kuò)增法和真菌顯色培養(yǎng)法在陰道分泌物念珠菌感染檢測(cè)中各有利弊[9-10]。常規(guī)鏡檢法操作簡(jiǎn)單、快速，有利于早期診斷，但由于陰道分泌物標(biāo)本成分復(fù)雜，易造成假陰性和假陽(yáng)性。熒光PCR法可快速準(zhǔn)確得到結(jié)果，并鑒定出念珠菌菌型。念珠菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)鑒定陽(yáng)性率和準(zhǔn)確度與PCR法相似，同時(shí)能提供藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果，為臨床合理用藥提供依據(jù)[11]，但檢測(cè)過程較為繁瑣，間時(shí)要求較長(zhǎng)，不利于早期診斷大規(guī)模檢查[12]。因此，應(yīng)根據(jù)臨床要求，采用不同的檢測(cè)方法。常規(guī)鏡檢法應(yīng)為門診常規(guī)檢驗(yàn)中的首選。與臨床癥狀不符，而常規(guī)鏡檢法為陰性或陽(yáng)性的患者，建議采用熒光PCR核酸擴(kuò)增法或念珠菌顯色培養(yǎng)法進(jìn)行鑒定。

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