桂枝茯苓丸等劑型揮發(fā)性成分的對(duì)比分析

馬銀宇 盧金清 羅貝貝

摘要：利用頂空固相微萃?。℉S-SPME）結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS）技術(shù)對(duì)桂枝茯苓丸、桂枝茯苓片、桂枝茯苓膠囊3種不同劑型的揮發(fā)性成分進(jìn)行了分析，并且計(jì)算了各成分相對(duì)百分含量。結(jié)果表明，從桂枝茯苓丸中檢測(cè)出22個(gè)峰，鑒定出17種成分，占揮發(fā)性成分的98.41;從桂枝茯苓片中檢測(cè)出15個(gè)峰，鑒定出12種成分，占揮發(fā)性成分的89.12%;從桂枝茯苓膠囊中檢測(cè)出30個(gè)峰，鑒定出26種成分，占揮發(fā)性成分的99.46%。桂枝茯苓丸及其他劑型之間揮發(fā)性成分的組成和含量均發(fā)生了變化。

關(guān)鍵詞：桂枝茯苓丸;桂枝茯苓膠囊;桂枝茯苓片;頂空固相微萃取;氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù);揮發(fā)性成分

中圖分類號(hào)：O657.7⁺1;5567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2020）09-0155-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.09.033

桂枝的供藥有兩種，一種是菌桂，又稱小桂，其皮為肉桂，或簡(jiǎn)稱筒桂;另一種是牡桂，又稱大桂，或單稱桂，其皮為官桂，嫩枝為桂枝。桂枝首見(jiàn)于《神農(nóng)本草經(jīng)》，“其味辛溫，主治上氣咳逆。結(jié)氣喉痹吐吸，通利關(guān)節(jié)，補(bǔ)中益氣，久服可以通神輕身不老。”桂枝產(chǎn)于中國(guó)云南及廣東、廣西等地，性溫?zé)o毒，為解肌發(fā)表的要藥。主要能溫經(jīng)通脈，治療表虛中風(fēng)，手足痛風(fēng)，傷寒頭痛，無(wú)汗時(shí)能發(fā)，有汗時(shí)能止，通行肺氣，散寒祛邪，調(diào)和營(yíng)衛(wèi)，橫通肢節(jié)。臨床上多以桂枝與其他藥物一起配合治療疾病。桂枝茯苓丸首次載于《金匱要略》[1]，“婦人宿有癓病，經(jīng)斷未及三月，而得漏下不止，胎動(dòng)在臍上者，為癥痼害。妊娠六月動(dòng)者，前三月經(jīng)水利時(shí)，胎下血者，后斷三月下血也。所以血不止者，其癓不去故也。當(dāng)下其癓，桂枝茯苓丸主之?！蹦壳笆忻嫔狭魍ㄖ怨鹬Α④蜍?、牡丹皮、桃仁、白芍/赤芍為主要成分，以不同工藝制成的丸劑、片劑、膠囊3種劑型，但三者功效均為活血、化瘀、消癓。因處方中的藥都含有揮發(fā)性成分，其中也有發(fā)揮藥效的成分。本研究從揮發(fā)性成分的角度，首次采用HS-SPME-GC-MS技術(shù)對(duì)桂枝茯苓丸及其他劑型的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，并對(duì)比其不同劑型中的揮發(fā)性成分種類及相對(duì)百分含量，主要考察不同制劑工藝對(duì)其揮發(fā)性成分種類和含量的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器

手動(dòng)固相微萃取裝置，IKA公司;Agilent6890/5973型氣-質(zhì)聯(lián)用儀，Hewlett-Packard公司;頂空瓶（15mL）;65μm PDMS/OVB萃取纖維頭，Supelco公司;JY1002型電子夭平，上海浦春計(jì)量?jī)x器有限公司，d=0.01g。

1.2 試藥

桂枝茯苓丸購(gòu)于益豐大藥房，桂枝茯苓膠囊購(gòu)于國(guó)大藥房，桂枝茯苓片購(gòu)于濟(jì)德大藥房。

1.3 方法

1.3.1 GC-MS色譜與質(zhì)譜條件

1）GC條件。HP-SMS石英毛細(xì)管柱（30m×0.25mm，0.25μm）;程序升溫：50℃^10℃/min130℃^2℃/min185℃^10℃/min230℃;載氣為高純He，流速0.8mL/min，進(jìn)樣口溫度230℃。

2）MS條件。E1源;離子源溫度230℃，電離能70eV;四級(jí)桿溫度150℃;掃描質(zhì)量范圍35～550m/z。

1.3.2 頂空固相微萃取條件經(jīng)過(guò)綜合考察樣品進(jìn)樣量、平衡時(shí)間、平衡溫度、萃取時(shí)間、萃取溫度、解吸時(shí)間，最終確定頂空固相微萃取最佳條件為：稱取桂枝茯苓丸粉末（過(guò)16目篩）樣品0.6g，置于15mL頂空瓶中，插入裝有65μm PDMS/DVB萃取纖維頭的手動(dòng)進(jìn)樣器，在100℃下預(yù)平衡10min后，再壓縮手柄伸出萃取頭萃取15min，取出進(jìn)樣器，立即插入氣相色譜儀進(jìn)樣口（進(jìn)樣口溫度230℃）解吸3min，不分流進(jìn)樣;桂枝茯苓片和桂枝茯苓膠囊的試驗(yàn)條件同上。

2 結(jié)果與分析

通過(guò)化學(xué)工作站對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，再利用面積歸一法對(duì)桂枝茯苓丸、桂枝茯苓片及桂枝茯苓膠囊的總離子流分別計(jì)算出3個(gè)樣品中各成分的相對(duì)百分含量。然后通過(guò)NIST08質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)各樣品的質(zhì)譜峰進(jìn)行檢索并確定各成分。從桂枝茯苓丸樣品中檢測(cè)出22個(gè)峰，鑒定出17種成分，占揮發(fā)性成分的98.41%，其中含量最高的為肉桂醛（58.37%）;從桂枝茯苓片中檢測(cè)出15個(gè)峰，鑒定出12種成分，占揮發(fā)性成分的89.12%，其中含量最高的為丹皮酚（60.15%）;從桂枝茯苓膠囊樣品中檢測(cè)出30個(gè)峰，鑒定出26種成分，占揮發(fā)性成分的99.46%，其中含量最高的也為丹皮酚（59.43%）。具體結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2、圖3和表1。

3 小結(jié)與討論

研究結(jié)果表明，桂枝茯苓丸、桂枝茯苓片和桂枝茯苓膠囊揮發(fā)性成分的種類和含量均發(fā)生了不同程度的變化。3種劑型共有揮發(fā)性成分為7種，其中肉桂醛和丹皮酚相對(duì)百分含量最高。桂枝茯苓丸中含量最高的是肉桂醛（58.37%），其次是丹皮酚（27.61%）。在桂枝茯苓片中含量最高的是丹皮酚（60.15%），其次是肉桂醛（22.18%）。在桂枝茯苓膠囊中含量最高的是丹皮酚（59.43%），其次是肉桂醛（28.58%）。桂枝茯苓丸中肉桂醛含量最高（58.37%），遠(yuǎn)大于桂枝茯苓片（22.18%）和桂枝茯苓膠囊（28.58%）的含量。研究[2-7]表明，肉桂醛在代謝疾病和循環(huán)系統(tǒng)疾病方面具有抗糖尿病、抗肥胖作用，可用于心肌疾病、缺血性心臟病等，還具有抗菌、抗寄生蟲(chóng)和抗腫瘤的作用，可促進(jìn)血管的形成、保護(hù)神經(jīng)等。丹皮酚在桂枝茯苓片中的含量最高（60.15%）、其次是桂枝茯苓膠囊中（59.43%），遠(yuǎn)高于在桂枝茯苓丸中的含量（27.61%）。丹皮酚具有抗腫瘤、抗菌消炎、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫等作用[8-10]。市面上售賣(mài)的桂枝茯苓丸、桂枝茯苓片及桂枝茯苓膠囊3種劑型的主要功效都是活血、化瘀、消癥。

從3種不同劑型的制法角度探索其差異的來(lái)源。桂枝茯苓丸的制法：桂枝、茯苓、牡丹皮、赤芍、桃仁，以上五味1：1粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，每100g粉末加煉蜜90～110g制成大蜜丸，即得。桂枝茯苓片的制法：桂枝、茯苓、牡丹皮、桃仁、白芍，以上五味1：1，牡丹皮用水蒸氣蒸餾法提取丹皮酚備用。桂枝、白芍、桃仁及茯苓粉碎成粗粉，混勻，加入提取過(guò)的牡丹皮藥渣，再加90%乙醇，提取兩次合并濾液;藥渣加水提取兩次合并濾液，把兩種提取液分別減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25（80～85℃）的清膏。合并兩濃縮液，加入剩余的茯苓細(xì)粉，混勻，干燥，粉碎，加70%糖漿適量，制粒，加入丹皮酚細(xì)粉，混勻，壓片，包薄膜衣即得。桂枝茯苓膠囊的制法：桂枝、茯苓、牡丹皮、桃仁、白芍，以上五味1：1，取適量茯苓粉碎成細(xì)粉。牡丹皮用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)性成分備用。藥渣與桂枝、白芍、桃仁及剩余的茯苓用90%乙醇提取二次，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，減壓濃縮至適量。藥渣再加水煎煮二次合并提取液，減壓濃縮至適量，上述二種濃縮液，與茯苓細(xì)粉混勻，干燥，粉碎，加入適量的糊精，制顆粒，干燥，加入牡丹皮揮發(fā)性成分，混勻，裝入膠囊即得。由以上制法可知，桂枝茯苓丸是各味藥直接粉碎制得，其中肉桂醛在生藥中的含量最高，桂枝茯苓片和膠囊是先用水蒸氣蒸餾提取丹皮酚再與其他藥加熱提取物混合而得，桂枝中的肉桂醛在加熱情況下部分揮發(fā)或者熱分解，片劑和膠囊劑中丹皮酚的檢測(cè)含量較丸劑高。如果按此處方比例，桂枝藥材粉碎備用，牡丹皮提取丹皮酚備用，其他各味按照膠囊劑制法制備，所得制劑各主要有效成分含量保持在較高水平，其活血、化瘀、消癥功效可能會(huì)更好，但有待進(jìn)一步研究。

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收稿日期：2020-03-05

基金項(xiàng)目：湖北省技術(shù)創(chuàng)新專項(xiàng)重大項(xiàng)目（2016ACA146）

作者簡(jiǎn)介：馬銀宇（1994-），男，河南新鄉(xiāng)人，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幖捌涮烊划a(chǎn)物活性成分，（電話）18064113331（電子信箱）996343549@qq.com;通信作者，盧金清，男，教授，主要從事中藥及其天然產(chǎn)物活性成分的研究，（電話）027-68890101（電子信箱）ljq59169@sohu.com。