鹽酸氨溴索膠囊體外溶出度試驗(yàn)和生物等效性研究

畢德忠

摘 要 目的：研究鹽酸氨溴索膠囊的體外溶出度試驗(yàn)和生物等效性相關(guān)性。方法：測(cè)定自制制劑在不同溶出介質(zhì)中的累積溶出度，并進(jìn)行生物等效性研究，考察處方工藝的合理性和溶出曲線的相似性。結(jié)果：經(jīng)過處方和工藝優(yōu)化后制得的自制制劑能夠符合既定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，空腹和餐后生物等效性與參比制劑一致。結(jié)論：鹽酸氨溴索膠囊體內(nèi)外試驗(yàn)呈現(xiàn)與參比制劑一致性，建立的制劑新工藝可適應(yīng)工業(yè)化生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞 鹽酸氨溴索 處方工藝 溶出曲線 臨床試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：R974.1； R945 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2020）15-0086-04

In vitro dissolution test and bioequivalence study of ambroxol hydrochloride capsules

BI Dezhong*

（Shanghai Xinyi Tianping Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 201108， China）

ABSTRACT Objective： To study the correlation between in vitro dissolution and bioequivalence of ambroxol hydrochloride capsules. Methods： The cumulative dissolution of the home-made preparation in different dissolution media was determined and the bioequivalence was studied to investigate the rationality of the prescription process and the similarity of the dissolution profile. Results： Home-made preparations prepared after the optimization of prescription and process were able to meet the requirements of the established quality standards and the fasting and postprandial bioequivalence was consistent with the reference preparation. Conclusion： Home-made ambroxol hydrochloride capsules showed consistency with the reference formulation in vitro and in vivo， and the new formulation process established can be adapted to industrial production.

KEY WORDS ambroxol hydrochloride； formulation process； dissolution profile； clinical trial

鹽酸氨溴索為鹽酸溴己新的體內(nèi)活性代謝物，是新一代黏痰溶解劑，臨床用于伴有痰液分泌不正常及排痰功能不良的各種急慢性呼吸道疾病的祛痰治療，特別是對(duì)慢性支氣管炎的祛痰治療，可顯著改善排痰和呼吸狀況[1]。鹽酸氨溴索可提高肺部功能指標(biāo)，病人的咳嗽、呼吸不能、肺部啰音等癥狀也有明顯好轉(zhuǎn)，它比N-乙酰半胱氨酸和鹽酸溴己新等起效快[2]。

鹽酸氨溴索在常見呼吸道疾病的化痰和排痰治療中應(yīng)用廣泛，近年來的研究又發(fā)現(xiàn)大劑量鹽酸氨溴索具有特殊的肺部保護(hù)功能，在慢性阻塞性肺疾病、呼吸窘迫綜合征尤其是新生兒呼吸窘迫綜合征等嚴(yán)重肺部疾病的治療以及危重患者術(shù)后肺部并發(fā)癥的預(yù)防中取得了較好的療效[3]。

目前，2015年版《中國藥典》收載的鹽酸氨溴索劑型有口服溶液、片劑、注射液、膠囊、緩釋膠囊和糖漿6種?，F(xiàn)今臨床使用較多是鹽酸氨溴索片，對(duì)鹽酸氨溴索膠囊及其他劑型的藥學(xué)及臨床研究相對(duì)較少。本研究采用經(jīng)過完整溶出度方法學(xué)試驗(yàn)后的標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)參比制劑和產(chǎn)業(yè)化自制品進(jìn)行了不同溶出介質(zhì)的研究，同時(shí)進(jìn)行了人體餐前、餐后生物等效性試驗(yàn)，結(jié)果表明鹽酸氨溴索膠囊和參比制劑具有相同的療效。

1 材料和方法

1.1 試藥和試劑

鹽酸氨溴索（山東羅欣藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司）；乳糖（上海華茂藥業(yè)有限公司）；預(yù)膠化淀粉（上?？房蛋录夹g(shù)有限公司）；聚維酮K30（BASF公司）；硬脂酸鎂（海鹽六和藥業(yè)有限公司）；鹽酸氨溴索膠囊（上海信誼天平藥業(yè)有限公司）；鹽酸氨溴索片參比制劑（Sanofi-Aventis France公司）；鹽酸氨溴索對(duì)照品（批號(hào)100599-201604，中國食品藥品檢定研究院）。

鹽酸、醋酸鈉、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、磷酸、乙腈（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 儀器

1200 series高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；FADT-801RC溶出度儀（上海富科思公司）；XPE205電子天平（梅特勒公司）；HLSG220B濕法混合制粒機(jī)（北京航空制造工程研究所）；FL-120沸騰干燥機(jī)（重慶廣廈干燥設(shè)備工程公司）；NJP2200全自動(dòng)硬膠囊填充機(jī)（浙江飛云科技有限公司）。

1.3 累積溶出度測(cè)定

根據(jù)國內(nèi)外鹽酸氨溴索制劑溶出曲線測(cè)定方法[4-7]，以及完整的方法學(xué)研究結(jié)果，確定溶出曲線測(cè)試條件：按照中國藥典2015年版四部溶出度與釋放度測(cè)定法第一法（0931），采用0.1 mol/L鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽溶液、pH 6.8磷酸鹽溶液和水四種介質(zhì)進(jìn)行溶出度試驗(yàn)，按照f2相似因子法或15 min溶出度應(yīng)均大于85%進(jìn)行判定。

1.4 HPLC測(cè)定

色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6 mm× 250 mm，5 mm）；流動(dòng)相為0.01 mol/L磷酸氫二銨（用磷酸調(diào)節(jié)pH 7.0）-乙腈（50∶50）；檢測(cè)波長248 nm；流速1.0 ml/min；柱溫25 ℃；進(jìn)樣體積20 ml。對(duì)照品溶液濃度為0.033 mg/ml，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。

1.5 處方和工藝篩選

1.5.1 原料藥的理化特性確認(rèn)

本品為口服固體制劑，濕法制粒工藝中涉及到高溫高濕條件，對(duì)可能影響制劑質(zhì)量的原藥特性進(jìn)行確認(rèn)，結(jié)合相關(guān)試驗(yàn)對(duì)本品溶解度、PKa、粒度分布和晶型等進(jìn)行確認(rèn)。

1.5.2 輔料選擇

參考參比制劑說明書、原輔料相容性試驗(yàn)及公司實(shí)際生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，確定采用稀釋劑乳糖、崩解劑預(yù)膠化淀粉和粘合劑聚維酮K30為主要輔料，并以參比制劑的溶出曲線為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行處方篩選與考察。

1.5.3 制粒正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

制劑工藝采用國內(nèi)較為常用的濕法制粒工藝，即三相攪拌制粒和沸騰干燥工藝。為確保產(chǎn)業(yè)化過程中裝量差異和含量均勻度符合藥典規(guī)定，需進(jìn)行攪拌速度、制粒速度和加漿量三者關(guān)系的進(jìn)一步試驗(yàn)。具體操作為按照正交設(shè)計(jì)要求，加入原輔料后，按照各工藝因素水平要求（表1），開啟攪拌開關(guān)，加入粘合劑后，開啟制粒開關(guān)進(jìn)行制粒，獲得合適的濕顆粒。

1.6 生物等效性試驗(yàn)

以指定的鹽酸氨溴索片為參比制劑、自制鹽酸氨溴索膠囊為受試制劑，通過單中心、隨機(jī)、開放、單次給藥、兩周期和雙交叉臨床研究方法來評(píng)價(jià)兩種制劑的人體生物等效性[8-9]，總共計(jì)劃入組48例受試者（空腹和餐后各24例）。根據(jù)相關(guān)指導(dǎo)原則[10-12]以及參比制劑與自制制劑的藥品說明書的相關(guān)內(nèi)容，采用液質(zhì)色譜聯(lián)用檢測(cè)法測(cè)定血漿中氨溴索的藥物濃度。

2 結(jié)果

2.1 處方和工藝篩選

2.1.1 原料藥的理化特性確認(rèn)

鹽酸氨溴索BCS分類為Ⅰ類，PKa為8.03，在水中略溶解，在pH 1.0～8.0范圍內(nèi)其溶解度為17～30 mg/ml，無明顯pH依賴性。按最大規(guī)格30 mg計(jì)算，屬于高溶解性藥物。基于相關(guān)試驗(yàn)及特性，鹽酸氨溴索原料藥的粒徑分布在74～245 mm對(duì)制劑無直接影響。經(jīng)X射線-粉末衍射測(cè)定，確認(rèn)本品原料藥晶型與參比制劑完全一致，且多批次原料藥晶型相同。通過影響因素試驗(yàn)，確認(rèn)原料藥晶型具有良好的穩(wěn)定性，在制劑生產(chǎn)過程中不會(huì)發(fā)生晶型變化。

2.1.2 輔料選擇

乳糖在本品中用作稀釋劑，其粒度分布可能對(duì)制劑的含量均勻度與溶出產(chǎn)生影響，通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)于粒徑245 mm粉碎后的乳糖，對(duì)制劑含量均勻度與溶出無較大影響；預(yù)膠化淀粉采用直接內(nèi)加法，聚維酮K30水溶液作為粘合劑時(shí)，加入速度不宜過快；考慮到硬脂酸鎂具有較強(qiáng)疏水性的特點(diǎn)，對(duì)用量在0.25%～1.0%范圍內(nèi)進(jìn)行了溶出度研究，結(jié)果表明該用量范圍對(duì)溶出度影響不明顯，同時(shí)硬脂酸鎂用量在0.5%時(shí)，顆粒流動(dòng)性已可滿足膠囊灌裝的需要，故擬定硬脂酸鎂的用量為0.5%。

2.1.3 制粒工藝

以與參比制劑溶出曲線相似性為目標(biāo)，同時(shí)為確保產(chǎn)業(yè)化過程中裝量差異和含量均勻度符合藥典規(guī)定，產(chǎn)業(yè)化過程中進(jìn)行了攪拌速度、制粒速度和加漿量的正交試驗(yàn)。正交試驗(yàn)初步溶出度（pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液）結(jié)果顯示，當(dāng)采用2.5%的聚維酮K30漿液、攪拌轉(zhuǎn)速設(shè)定為120 r/min、制粒轉(zhuǎn)速設(shè)定為1 400 r/min的樣品溶出度與原研制劑最為接近。粘合劑用量在7.5%時(shí)，制粒得的顆粒偏濕，對(duì)溶出度有較大影響（表2）。

綜合上述試驗(yàn)結(jié)果，確定A3B1C3為最佳方案，新處方為乳糖（稀釋劑）、預(yù)膠化淀粉（崩解劑）、聚維酮K30（粘合劑漿液濃度為2.5%）、硬脂酸鎂（潤滑劑）。確定的新工藝采用三相濕法制粒（攪拌轉(zhuǎn)速：120 r/min；切割轉(zhuǎn)速：1 400 r/min）進(jìn)行制備三批樣品（批號(hào)：Z180501、Z180502、Z180503），質(zhì)量評(píng)價(jià)表明均符合相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求（表3）。

2.2 自制和參比制劑累積溶出曲線比較

5 min時(shí)間點(diǎn)自制制劑在四種介質(zhì)中的累積溶出度均略低于參比制劑，原因是自制制劑為膠囊劑，膠囊殼的溶解需約2～3 min，相對(duì)參比片劑的快速崩解有一定延遲；但15 min時(shí)兩者在四種介質(zhì)中的累積溶出度均大于85%（圖1）。根據(jù)有關(guān)要求[13]，判定自制和參比制劑體外溶出行為相似。

2.3 生物等效試驗(yàn)

在空腹條件下共篩選68例受試者，入選24例受試者，23例參與研究給藥，1例受試者未參與給藥。23例受試者完成兩個(gè)周期給藥研究。

在餐后條件下共篩選68例受試者，入選24例受試者參與給藥研究，2例受試者在第2周期入住當(dāng)天自行退出研究，共22例受試者完成兩個(gè)周期給藥研究。

結(jié)果表明，口服氨溴索膠囊與參比制劑在空腹和餐后給藥時(shí)具有生物等效性（表4～5，圖2）。

3 討論

采用經(jīng)過優(yōu)化的處方和工藝制備的三批樣品，從根本上改善了原處方中采用淀粉漿為粘合劑制得顆粒，對(duì)產(chǎn)品溶出曲線的影響，改變了原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用單一介質(zhì)、單一時(shí)間溶出度測(cè)定法，來判斷產(chǎn)品溶出行為的優(yōu)劣，對(duì)改進(jìn)的樣品進(jìn)行了多種溶出介質(zhì)的全面研究，并通過體內(nèi)生物利用度進(jìn)行了驗(yàn)證。后續(xù)還將對(duì)制劑處方和工藝進(jìn)一步進(jìn)行深入研究，提高自制品與參比制劑在空腹生物等效性試驗(yàn)中Cmax值的接近程度。未來上市后的產(chǎn)品也可采用溶出曲線來評(píng)價(jià)工藝執(zhí)行和偏離程度，以進(jìn)一步保證人民用藥安全和用藥有效。

參考文獻(xiàn)

[1] 何杰， 高永良.鹽酸氨溴索的制劑學(xué)研究新進(jìn)展[J]. 中國藥業(yè)， 2010， 19（2）： 15-17.

[2] 張倫. 鹽酸氨溴索市場分析[J]. 中國制藥信息， 2006， 22（11）： 23-26.

[3] 楊靜， 宋超. 鹽酸氨溴索的臨床合理使用[J]. 中國藥房， 2012， 23（28）： 2683-2685.

[4] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典2015年版二部[M]. 北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2015： 1508.

[5] 醫(yī)薬品インタビューフォーム[EB/OL]. [2020-04-24]. https：//www.info.pmda.go.jp/go/interview/1/470310_2239001 G2027_1_004_1F.pdf.

[6] 塩酸アンブロキソール15 mg/g細(xì)粒[EB/OL]. [2020-04-24] http：//www2.jp-orangebook.gr.jp/data/04/04_01/04_01_ Ambroxol_Hcl.pdf.

[7] 鹽酸氨溴索片一致性評(píng)價(jià)參比制劑/溶出曲線測(cè)定（草案）[EB/OL]. （2013-12-31）[2020-04-24]. https：//db.yaozh.com/ policies/11466.html.

[8] 陳萍. 呼吸系統(tǒng)疾病鑒別診斷學(xué)[M]. 北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社， 2008： 16-23.

[9] 周向東. 常用祛痰藥的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J]. 中國藥業(yè)， 2005， 14（7）： 16-18.

[10] 國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心. 化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[EB/OL]. （2007-08-23）[2020-04-24]. http：//www.cde.org.cn/zdyz.do？method= largePage&id=e2e040c3cf4bae6b.

[11] 國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心. 以藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[EB/OL]. （2015-11-27）[2020-04-24]. http：//www.cde. org.cn/zdyz.do？method=largePage&id=353342c97683d4fb.

[12] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典2015年版四部[M]. 北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2015： 363-368.

[13] 國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心. 普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則[EB/OL]. （2015-02-05）[2020-04-24]. http：//www.cde.org.cn/zdyz.do？method=largePage&id=c 560ae7462430d5f.