基于市售重樓飲片質(zhì)量研究對(duì)重樓飲片標(biāo)準(zhǔn)的思考

賈天穎 高巖 王海麗 辛潔萍 白玉瑩 王敏 韓婷 劉夢(mèng)楠 李向日 林瑞超

摘要?目的：對(duì)重樓市售飲片進(jìn)行基于性狀鑒別、浸出物、含量測(cè)定等多方面分析，以期為重樓的質(zhì)量評(píng)價(jià)和重樓飲片市場(chǎng)的良性發(fā)展提供數(shù)據(jù)支持。方法：建立了重樓飲片浸出物測(cè)定方法，采用熱浸法測(cè)定其醇溶性浸出物，對(duì)重樓飲片炮制方法進(jìn)行了研究，測(cè)定了重樓飲片外觀性狀及重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量。結(jié)果：重樓飲片浸出物含量之間的差異性較大，云南產(chǎn)地浸出物的平均含量略小于四川產(chǎn)地浸出物含量;市售重樓飲片大部分為厚片，少數(shù)為段，均不符合《中華人民共和國(guó)藥典》（2015年版）“重樓”炮制項(xiàng)“切薄片”的規(guī)定;重樓飲片皂苷含量差異較大，四川產(chǎn)地重樓飲片皂苷含量略大于云南產(chǎn)地，多數(shù)重樓飲片所含皂苷以重樓皂苷Ⅰ，Ⅱ，Ⅶ為主，少數(shù)樣品重樓皂苷Ⅵ含量較高，可能存在摻偽現(xiàn)象。結(jié)論：為保證臨床使用需求及藥效，建議《中華人民共和國(guó)藥典》修訂飲片炮制項(xiàng)、含量測(cè)定項(xiàng)，并補(bǔ)充性狀項(xiàng)。

關(guān)鍵詞?重樓飲片;質(zhì)量研究;《中華人民共和國(guó)藥典》;標(biāo)準(zhǔn)修訂;炮制;含量測(cè)定;飲片性狀

Abstract?Objective：To conduct analysis based on character identification，extracts，content determination and other aspects of Chonglou′s commercially available Decoction pieces，with a view to providing data support for Chonglou′s quality evaluation and the benign development of Chonglou′s Decoction Pieces market.Methods：The determination method of extracts of Chonglou Decoction Pieces was established，and the alcohol-soluble extractives were determined by hot dip method.The processing method of Chonglou Decoction Pieces was studied.The appearance characteristics of Chonglou Decoction Pieces and Chonglou SaponinⅠ，Ⅱ，Ⅵ，Ⅶ content was determined.Results：The difference in extract content of Chonglou Decoction Pieces was large.The average content of extract from Yunnan origin was slightly smaller than that in Sichuan; the majority of commercially available Chonglou Decoction Pieces were thick tablets，and a few were segments，which were not in line with “Chonglou” item of cutting thin slices in The Pharmacopoeia of the People′s Republic of China（2015 edition）; the content of saponins in Chonglou Decoction Tablets is quite different，the content of saponins in Sichuan province is slightly larger than that in Yunnan，and saponins IN most of the tablets contained in Zhonglou Decoction were Chonglou saponins Ⅰ，Ⅱ，and Ⅶ.A few samples have a high content of Chonglou saponins VI，and adulteration may exist.Conclusion：In order to ensure the clinical use requirements and efficacy，it is recommended that in Chinese Pharmacopoeia we should revise the processing items and content determination items of decoction pieces，and supplement the trait items.

Keywords?Chonglou Decoction Pieces; Quality Research; Chinese Pharmacopoeia; Standard revision; Processing; Content determination; Decoction characteristics

中圖分類號(hào)：R283;R921.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.13.007

《中華人民共和國(guó)藥典》（2015年版）規(guī)定重樓為百合科植物云南重樓Paris polyphylla Smith var.yunnanensis（Franch.）Hand.-Mazz.或七葉一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis（Franch.）Hara的干燥根莖[1]。重樓始載于漢代《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為下品，其味苦，性微寒;有小毒，歸肝經(jīng)。主要用于驚癇，搖頭弄舌，下三蟲，去蛇毒等癥[2]。其臨床應(yīng)用歷史悠久，效果顯著，具有抗腫瘤[3-4]、抗炎[5-6]、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛[7-8]和止血[9]等作用，是中醫(yī)常用藥之一，也是多種常用傳統(tǒng)復(fù)方中成藥的原料藥之一。

近年來，由于重樓需求量逐漸增加，重樓野生資源趨于枯竭，再加上重樓種植難度大、培育時(shí)間久等因素，導(dǎo)致重樓市場(chǎng)缺口不斷加大，價(jià)格急劇上升。致使重樓在市場(chǎng)流通中以劣充優(yōu)，以假充真的現(xiàn)象屢見不鮮。為此，有必要對(duì)全國(guó)范圍內(nèi)重樓飲片的質(zhì)量現(xiàn)狀進(jìn)行研究，為合理利用重樓資源、維護(hù)市場(chǎng)正常流通秩序，進(jìn)一步優(yōu)化市場(chǎng)交易的公平性提供依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?分析樣品

本實(shí)驗(yàn)的30批重樓樣品收集于全國(guó)范圍內(nèi)各重樓飲片生產(chǎn)公司、藥材流通市場(chǎng)和藥店，主要產(chǎn)地為云南、四川及其他省份，具體信息見表1。

1.1.2?對(duì)照品

重樓皂苷Ⅰ對(duì)照品（批號(hào)：111590-201604，純度為93.6%）、重樓皂苷Ⅱ?qū)φ掌罚ㄅ?hào)：111591-201604，純度為91.4%）、重樓皂苷Ⅵ對(duì)照品（批號(hào)：111592-201604，純度為97.0%）、重樓皂苷Ⅶ對(duì)照品（批號(hào)：111593-201604，純度為94.0%），以上對(duì)照品均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究所。

1.1.3?試劑與儀器

乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司，批號(hào)：387L-25962U）;乙醇（分析純，北京化工廠，批號(hào)：20190110）;甲醇（分析純，北京化工廠，批號(hào)：20190115）;娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司，批號(hào)：06GH 02685）。

高效液相色譜儀（Waters公司，型號(hào)：Waters 2489）、色譜柱（Agilent公司，Agilent Zorbax SB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm）、十萬分之一電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)公司，型號(hào)：BT25S）、電子天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：FA1104B）。

1.2?方法

1.2.1?外觀性狀測(cè)定方法

中藥飲片的外觀性狀是鑒定飲片來源真?zhèn)蔚闹匾A(chǔ)資料，也是中藥飲片加工原藥材質(zhì)量、加工方法、儲(chǔ)藏方法和周期是否得當(dāng)?shù)年P(guān)鍵判斷信息。本實(shí)驗(yàn)對(duì)重樓市售飲片的表皮顏色、斷面顏色、飲片質(zhì)地和相關(guān)片型等指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。

1.2.2?浸出物測(cè)定

1.2.2.1?浸出物測(cè)定方法的建立

浸出物測(cè)定法為水或其他適宜溶劑對(duì)藥材或飲片中可溶性物質(zhì)總量的測(cè)定方法，一般情況下，藥材浸出物可更加全面的反映藥材的內(nèi)部質(zhì)量。根據(jù)藥典規(guī)定，浸出物測(cè)定方法分為水溶性浸出物測(cè)定法，醇溶性浸出物測(cè)定法和揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定法。

重樓的主要含甾體皂苷類成分，因此對(duì)重樓浸出物測(cè)定方法的建立應(yīng)在水溶性浸出物測(cè)定法和醇溶性浸出物測(cè)定法中進(jìn)行篩選。為此，依照2015年版藥典第四部中通則2201“浸出物測(cè)定法”中的水溶性浸出物測(cè)定法和醇溶性浸出物測(cè)定法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以濾液能否完全濾過及濾液中化學(xué)成分種類為評(píng)測(cè)指標(biāo)，評(píng)價(jià)不同浸出物方法是否適用于重樓。

實(shí)驗(yàn)表明不同產(chǎn)地的重樓飲片和藥材的水溶性浸出物不能完全濾過，以乙醇、80%乙醇、稀乙醇為溶劑分別對(duì)重樓進(jìn)行醇溶性浸出物冷浸法預(yù)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)以上浸出液均難以濾過或不能完全濾過。造成該問題的原因可能是重樓中淀粉等多糖類成分含量較高，黏度較高堵住濾紙，因此放棄應(yīng)用水溶性浸出物法和醇溶性浸出物冷浸法對(duì)重樓質(zhì)量的評(píng)定。

對(duì)醇溶性浸提物所使用的乙醇濃度進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選：95%、80%、75%、70%、60%、50%，見表2。

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，50%、60%、70%乙醇的浸提液不能完全濾過，75%、80%、95%乙醇浸提液能過濾完全，但80%和95%乙醇成分溶出率較低，故選擇75%乙醇為溶劑對(duì)樣品進(jìn)行熱醇溶性浸出物含量測(cè)定。

1.2.2.2?樣品浸出物測(cè)定方法

以75%乙醇為溶劑對(duì)樣品進(jìn)行醇溶性浸出物熱浸法測(cè)定。

1.2.3?HPLC含量測(cè)定方法

根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》（2015年版）中重樓含量測(cè)定項(xiàng)對(duì)市售飲片進(jìn)行含量測(cè)定。

2?結(jié)果

2.1?外觀性狀測(cè)定結(jié)果

性狀鑒別具體信息見圖1、表3。

樣品多為近圓形、橢圓形，表面多為白色、黃白色，少數(shù)為淺棕色，周邊表皮黃棕色至棕褐色，兼有粉性和角質(zhì)。

2.2?市售重樓飲片浸出物測(cè)定結(jié)果?結(jié)果見表4。

重樓飲片浸出物最大值為32.0%，最小值為9.0%，極差為23.0%，均值為17.4%。其中云南產(chǎn)地重樓飲片浸出物最大值為32.0%，最小值為9.0%，極差為23.0%，均值為16.7%。四川產(chǎn)地重樓飲片浸出物最大值為26.9%，最小值為9.6%，極差為17.3%，均值為17.8%。

從以上結(jié)果可知，重樓飲片浸出物之間的差異性較大，云南產(chǎn)地浸出物的平均值略小于四川產(chǎn)地浸出物含量，如圖2。

2.3?樣品含量測(cè)定結(jié)果

具體結(jié)果見表5。

重樓飲片皂苷含量差異較大，四川產(chǎn)地重樓飲片皂苷含量略大于云南產(chǎn)地，見圖3。多數(shù)重樓飲片重樓皂苷Ⅵ檢出含量對(duì)其限度標(biāo)準(zhǔn)是否合格并未造成影響，少數(shù)樣品出現(xiàn)重樓皂苷Ⅵ含量較高現(xiàn)象。

3?討論

3.1?對(duì)《中華人民共和國(guó)藥典》重樓藥材含量測(cè)定項(xiàng)的思考

含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，多數(shù)重樓飲片重樓皂苷Ⅵ檢出含量對(duì)其限度標(biāo)準(zhǔn)是否合格并未造成影響，少數(shù)樣品重樓皂苷Ⅵ含量較高，課題組前期研究可知，重樓易混淆品延齡草中重樓皂苷Ⅵ含量較高，對(duì)重樓藥材及飲片真?zhèn)伪孀R(shí)影響較大[10]，因而樣品2、5、13、22、30可能存在摻偽現(xiàn)象。

3.2?重樓飲片厚度研究及對(duì)《中華人民共和國(guó)藥典》重樓飲片炮制項(xiàng)的思考

2015年版藥典中規(guī)定重樓飲片為薄片，其中第四部0213炮制總則規(guī)定，薄片為1～2 mm。通過對(duì)重樓飲片片厚相關(guān)信息進(jìn)行測(cè)定和整理后，結(jié)果表明，30批飲片的片厚均超出2015年版藥典對(duì)重樓飲片的規(guī)定，其中大部分為厚片，少數(shù)為段，因此對(duì)重樓飲片切片厚度進(jìn)行研究。

將潤(rùn)制完全（潤(rùn)制48～72 h，至藥材完全軟化）的重樓藥材，置于切藥機(jī)上，分別切制為薄片（1～2 mm）和厚片（2～4 mm）2種規(guī)格。結(jié)果表明：薄片的翹片率和敗片率要高于厚片。

切制飲片厚度的篩選評(píng)價(jià)指標(biāo)為飲片收率、敗片率。

重樓藥材粉性較強(qiáng)、直徑較大，根據(jù)飲片切制原則“質(zhì)堅(jiān)宜薄，質(zhì)松宜厚”，粉性強(qiáng)、直徑大的藥材如山藥、防己、天花粉等均為切厚片。經(jīng)實(shí)驗(yàn)可得，重樓手工切薄片敗片率達(dá)到24.15%，損耗過大。因而認(rèn)為重樓適宜切厚片，重樓厚片于切制、運(yùn)輸、貯藏等過程中不易破碎，敗片率降低。

同時(shí)根據(jù)重樓在各版藥典中的演變過程可知，1977年版《中華人民共和國(guó)藥典》中重樓藥材炮制項(xiàng)為“除去雜質(zhì)，洗凈，潤(rùn)透，切片，曬干”。

因此建議藥典更改飲片規(guī)格，對(duì)重樓飲片片厚不作要求，改切薄片為切片。

3.3?對(duì)《中華人民共和國(guó)藥典》重樓飲片性狀項(xiàng)的思考

2015年版藥典中未對(duì)重樓飲片的外觀性狀進(jìn)行規(guī)定，因此借鑒重樓藥材外觀性狀對(duì)其飲片進(jìn)行規(guī)范，具體規(guī)定如下：“本品為近圓形、橢圓形或不規(guī)則片狀。表面白色、黃白色或淺棕色，周邊表皮黃棕色或棕褐色，粉性或角質(zhì)”。對(duì)重樓飲片表皮顏色、斷面顏色和質(zhì)地相關(guān)信息進(jìn)行整理，所有批次飲片基本與上述規(guī)定相一致。

2015年版藥典中未對(duì)重樓飲片的直徑進(jìn)行規(guī)定，通過采集和測(cè)定重樓飲片的外觀性狀相關(guān)指標(biāo)，結(jié)果表明其中橫切片有16批，縱切片14批，樣品4、10、11、19、22、30飲片直徑整體小于1.0 cm，因此擬不對(duì)其飲片直徑進(jìn)行規(guī)范。

綜上所述，建議《中華人民共和國(guó)藥典》修訂飲片炮制項(xiàng)，改切薄片為切片;修訂含量測(cè)定項(xiàng)，去掉建議藥典重樓標(biāo)準(zhǔn)去掉重樓皂苷Ⅵ，保留重樓皂苷Ⅰ，Ⅱ，Ⅶ，但限度不變，仍為“總量不得少于0.60%”;并補(bǔ)充飲片性狀項(xiàng)。

近年來，隨著重樓的臨床需求量不斷增大，市場(chǎng)流通中的摻偽現(xiàn)象也愈發(fā)嚴(yán)重。該研究對(duì)市售重樓飲片的質(zhì)量進(jìn)行了分析研究，為重樓飲片的質(zhì)量評(píng)價(jià)及《中華人民共和國(guó)藥典》重樓標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供了理論依據(jù)。中藥飲片質(zhì)量是影響臨床療效的關(guān)鍵，中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是否合理關(guān)系著飲片市場(chǎng)的發(fā)展和臨床用藥的安全性、有效性。多年生的藥用植物的根及根莖部位入藥，常面臨野生資源不能滿足藥用的情況，如人參、三七、重樓、防風(fēng)[11]等，更應(yīng)充分考慮其市場(chǎng)流通中的實(shí)際情況，對(duì)其標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行合理地修訂和完善。

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（2020-06-10收稿?責(zé)任編輯：徐穎）