ICP-MS同時測定骨折挫傷膠囊中重金屬的含量

孔令鋒，王歡，李成森，郭漢文，孫苓苓

(1.遼寧省藥品檢驗檢測院，遼寧 沈陽 110036； 2.山東泓潤健康科技有限公司，山東 濟(jì)南 250022)

骨折挫傷膠囊是由豬骨、黃瓜子(炒黃)、土鱉蟲、自然銅(煅)、乳香(制)、沒藥(制)、血竭、紅花、大黃和當(dāng)歸制成的中藥制劑，現(xiàn)收載于《中國藥典》2015年版(一部)，具有舒筋活絡(luò)、消腫散瘀、接骨止痛之功效[1-3]。處方中自然銅為礦物藥，主含二硫化鐵(FeS2)，是治療傷科骨病的常用藥物，其來源為天然礦物，發(fā)揮藥效的同時也可能產(chǎn)生重金屬積蓄,影響人體健康；處方中除豬骨制膠、黃瓜子去油處理外，其余各味藥材均為原粉入藥，由于某些植物本身可能對特定的金屬元素產(chǎn)生富集作用，在藥材本身的生產(chǎn)、加工過程中可能受到重金屬元素的污染，因此有必要對該品種的重金屬含量進(jìn)行測定，以控制其質(zhì)量[4-8]。

電感耦合等離子質(zhì)譜(ICP-MS)法作為一種元素測定方法具有靈敏、快速、高通量的特點，近年來應(yīng)用廣泛[9-12]。本研究采用人工胃液對制劑進(jìn)行樣品處理，并采用ICP-MS 法對人工胃液中重金屬及有害元素的量進(jìn)行測定，為藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定、安全性研究及臨床合理用藥提供參考依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 7700型電感耦合等離子質(zhì)譜儀;THZ-82型恒溫振蕩器；Sartorius電子天平(型號：CP225D、BSA224S-CW)。

1.2 試藥 鉛(Pb)單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，批號：GSB 04-1742-2004，濃度：1 000 μg·mL-1；鎘(Cd)單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，批號：GSB 04-1721-2004，濃度：1 000 μg·mL-1；砷(As)單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，批號：GSB 04-1714-2004，濃度：1 000 μg·mL-1；汞(Hg)單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，批號：GSB 04-1729-2004，濃度：1 000 μg·mL-1；銅(Cu)單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度：1 000 μg·mL-1，批號：GSB 04-1725-2004；鉍(Bi)元素標(biāo)準(zhǔn)液(批號：GSB 04-1719-2004，濃度：1 000 μg·mL-1；銦(In)元素標(biāo)準(zhǔn)液(批號：GSB 04-1731-2004，濃度：1 000 μg·mL-1；鍺(Ge)元素標(biāo)準(zhǔn)液(批號：GSB 04-1728-2004，濃度：1 000 μg·mL-1，以上均購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心；硝酸及鹽酸為優(yōu)級純，其他試劑為分析純，試驗用水為去離子水。骨折挫傷膠囊共20批次，均來自國家評價性抽樣樣品，由8家企業(yè)生產(chǎn)(A～G)。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定條件 ICP-MS設(shè)置條件：真空度6.6×10-7Pa；檢測器模擬級電壓-1900 V；檢測器脈沖級電壓1 000 V射頻功率1 600 W；載氣為氬氣，流量1.2 L·min-1；輔助氣為氦氣；霧化室溫度為室溫。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備 精密吸取Pb、Cd、Cu、As標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2%硝酸稀釋制成分別含各元素0、5、25、50、100、200 ng·mL-1的溶液，另精密吸取Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2%硝酸稀釋制成含Hg元素0、0.2、0.5、1、2、5 ng·mL-1的溶液，臨用配制。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液 精密量取Ge元素、In元素、Bi元素標(biāo)準(zhǔn)液各0.5 mL,置50 mL量瓶中，用2%硝酸稀釋至刻度,搖勻，作為儲備液。精密量取儲備液0.5 mL，置50 mL量瓶中，用2%硝酸稀釋至刻度,搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液 取骨折挫傷膠囊內(nèi)容物約0.5 g，精密稱定，加入人工胃液50 mL，37 ℃水浴恒溫振蕩2 h，振蕩頻率120 rpm，離心，取上清液作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 按照“2.1”項下測定條件對“2.2.1”項下各元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，以各元素的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X) ，測量值與內(nèi)標(biāo)測量值的比值為縱坐標(biāo)(Y) ，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果5種元素的相關(guān)系數(shù)均在0.999以上，表明線性關(guān)系良好。連續(xù)測定空白溶液10次，記錄信號響應(yīng)值，按響應(yīng)值的3倍標(biāo)準(zhǔn)差計算檢測限(LOD)，結(jié)果見表 1。

表1 5種元素的線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及檢測限結(jié)果

2.3.2 精密度考察 取批號為201504002的骨折挫傷膠囊樣品，連續(xù)分析6次，計算吸收值，結(jié)果Pb、Cd、Cu、As、Hg的RSD分別為1.1%、0.6%、2.0%、0.9%、2.2%(n=6)。

2.3.3 重復(fù)性試驗 取批號為201504002的骨折挫傷膠囊，按“2.2.3”項下方法平行制備6份樣品測定，結(jié)果Pb、Cd、Cu、As、Hg的RSD分為1.7%、2.4%、2.2%、1.3%、3.1%(n=6)，表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.4 穩(wěn)定性考察 取批號為201504002的骨折挫傷膠囊樣品按照“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h測定，計算Pb、Cd、Cu、Hg、As的RSD，分別為1.98%、2.25%、2.03%、3.32%、2.41%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5 回收率試驗 精密稱取批號為201504002的骨折挫傷膠囊的樣品0.25 g，分別精密加入Pb、Cd、Cu、As標(biāo)準(zhǔn)溶液和Hg單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.2.3”項下的方法制備加樣回收樣品溶液，平行制備6份，并按“2.1”項下條件分析，分別計算各元素的回收率及RSD，結(jié)果Pb、Cd、Cu、As、Hg的加樣回收率分別為102.7%、101.0%、97.4%、99.7%、102.2%(n=6)，RSD分別為1.4%、2.6%、1.4%、3.5%、1.7%(n=6)。

2.4 樣品測定 按“2.2”項下方法制備供試品溶液，“2.1”項下條件測定，每個樣品重復(fù)測定3次，取平均值，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法分別計算20批樣品中5種元素的含量，結(jié)果見表2。

表2 20批骨折挫傷膠囊檢測結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 現(xiàn)行版《中國藥典》收錄的原子吸收法(AAS法)、電感耦合等離子光譜法(ICP-OES法)、電感耦合等離子質(zhì)譜法(ICP-MS法)均可用于元素的測定。在實際應(yīng)用過程中，因ICP-MS法具有靈敏度高，可同時測定多種元素等特點，實現(xiàn)金屬元素的高通量快速檢測，其與HPLC聯(lián)用更可用于元素價態(tài)的分析，其應(yīng)用前景最為廣泛。

3.2 考慮到礦物藥其本身的結(jié)構(gòu)特性，僅少量可被胃液溶解吸收,大部分隨糞便被排出體外，雖然骨折挫傷膠囊中含有自然銅、土鱉蟲等礦物、動物藥，其重金屬含量較植物藥更高，但其可被人體吸收的量可能很少。本研究采用的方法更接近于人體真實用藥情況，可以更加客觀的評價藥品的安全性?！吨袊幍洹?015年版中并未限定中成藥中重金屬的殘留限量，隨著藥物安全性要求的不斷提高，重金屬元素的殘留限量也成為關(guān)注的熱點，建議在其限量標(biāo)準(zhǔn)的制定過程中，充分考慮處方組成、制備工藝、劑型、服用方式等影響因素，制定更加科學(xué)、合理的限度標(biāo)準(zhǔn)。