辣木葉等配方提取物對酵母膏誘導(dǎo)小鼠高尿酸血癥的影響

勞文艷　趙建　郭豫　王一如　趙曉紅

[摘 要]探討含辣木葉等配方的袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠的作用及其機制。給正常實驗用鼠連續(xù)14 d灌胃給予20 g/kg酵母膏誘導(dǎo)高尿酸血癥，同時按人體推薦量10 g/d 的10倍、20倍、30倍，給予低（1.67 g/kg）、中（3.34 g/kg）、高（5.00 g/kg）三種劑量的袋茶水提溶液，采用試劑盒的方法分別測定血清尿酸（uric acid， UA）、黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）、肌酐（creatinine，Cre）、血尿素氮（blood urea nitrogen， BUN）、炎性因子白細胞介素（interleukin-6，IL-6）和腫瘤壞死因子（TNF-α）的含量以及肝臟XOD酶活性。與高尿酸血癥模型組比較，高劑量的袋茶提取物能顯著或極顯著降低高尿酸血癥小鼠血清UA、XOD、Cre、BUN、IL-6、TNF-α的含量（P<0.01或P<0.05），抑制肝臟中XOD水平（P<0.05）。所用袋茶提取物在三種劑量下均可極顯著降低高尿酸血癥小鼠血清UA和XOD（P<0.01）的水平，同時可抑制肝臟XOD活性、降低血清中Cre的含量（P<0.05或P<0.01）， 降低BUN含量（P<0.05）。結(jié)果表明，含辣木葉等成分的袋茶具有降尿酸作用，抑制 XOD 活性及炎性因子釋放是其降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的機制之一。

[關(guān)鍵詞]高尿酸血癥;黃嘌呤氧化酶;尿素氮;辣木葉配方

[中圖分類號]R 285.5[文獻標(biāo)志碼]A[文章編號]1005-0310（2020）03-0083-06

高尿酸血癥是以機體尿酸生成過多或尿酸排泄減少引起的血中尿酸水平增高為特征的疾病，而且它是發(fā)展成痛風(fēng)和許多其他疾病如心血管病、腎臟病、高血壓和代謝綜合癥等的關(guān)鍵病因[1]。尿酸是嘌呤核苷酸分解的最終產(chǎn)物。肝臟中的黃嘌呤氧化酶是尿酸分解生成的關(guān)鍵酶，而腎臟中的尿酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白是消除尿酸的主要轉(zhuǎn)運蛋白[2-3]。隨著人們生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯變化，以高能量、高嘌呤類食物攝入顯著增加為特征，由此引起高尿酸血癥和痛風(fēng)發(fā)病率呈逐年增加且年輕化的趨勢。2013 年的《高尿酸血癥和痛風(fēng)治療中國專家共識》中明確指出高尿酸血癥與痛風(fēng)之間密不可分，并且是糖尿病、代謝綜合征、高脂血癥、慢性腎病、心血管疾病與腦卒中的獨立危險因素[4]，高尿酸血癥被看成是繼高血壓、高血脂和糖尿病“三高”之后的第四個重要的危險因素[5]，因此，其發(fā)病機理及治療方法的研究備受世人關(guān)注。

臨床治療高尿酸血癥，可采用抑制尿酸生成的藥物或促進尿酸排泄的藥物，前者如別嘌醇（allopurinol）[6-7]，后者如苯溴馬隆（benzbromarone）[8-9]等，但長期服用這些藥物存在較為嚴(yán)重的不良反應(yīng)[10-11]。近年來，應(yīng)用天然產(chǎn)物作為補充或替代治療高尿酸血癥和痛風(fēng)的報道越來越多[12]，有研究發(fā)現(xiàn)，辣木葉、荷葉、枸杞、桑葉、蒲公英等的復(fù)方組合或單體提取物有降低血尿酸的作用[13-16]。本研究以辣木葉為主并含有白果、桑葉、枸杞子、甘草、蒲公英、菊花等組成的配方制成袋茶提取物作為研究對象，通過建立小鼠高尿酸模型，觀察袋茶提取物是否具有降低尿酸含量的作用及其作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

實驗動物：選用北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司（許可證號：SCXK（京）2016-0011）繁殖的18～22 g SPF級KM種健康雄性小鼠，飼養(yǎng)于北京聯(lián)合大學(xué)應(yīng)用文理學(xué)院保健食品功能檢測中心SPF級動物室。實驗動物使用許可證號：SYXK（京）2017-0038。維持飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司（許可證號：SCXK（京）2014-0010）生產(chǎn)。

1.1.2 實驗樣品及制備

袋茶（深圳松樂生物科技有限公司提供），配方組成：辣木葉、白果、桑葉、枸杞子、甘草、蒲公英、菊花。

袋茶提取物的制備：常壓條件下，用溫度80 ℃～90 ℃的純水浸泡袋茶60 min，水量為受試樣品體積的10倍以上，提取2次，將其合并加熱蒸發(fā)濃縮至0.5 g/mL，冷卻后置4 ℃冰箱儲存。

1.1.3 主要儀器與試劑

主要儀器：多功能酶標(biāo)儀（美國 Thermo）、5840R 冷凍離心機 （德國 Eppendorf）、生化分析儀（美國Beckman）、BS223S電子天平（德國 Sartorius）、UV-2450 型紫外可見分光光度計（日本島津）。

主要試劑：苯溴馬?。╞enzbromarone，BBR，日本東京化成株式會社）;小鼠黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）試劑盒（南京建成生物工程研究所），尿酸（uric acid，UA）試劑盒（南京建成生物工程研究所），小鼠黃嘌呤氧化酶XOD試劑盒（ELISA）（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）、TNF-α試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）、IL-6試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）、肌酐（creatinine，Cre）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司）、血尿素氮（blood urea nitrogen， BUN）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司）、尿酸（UA）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 動物分組與給藥

動物分組：在動物房適應(yīng)性喂養(yǎng)1周左右的KM小鼠按體重隨機分6組，每組10只，分別為空白對照組（control），模型組（model），受試物按人體推薦量的10倍、20倍、30倍設(shè)3個劑量組（1.67 g/kg（LD組）、3.34 g/kg（MD組）、5.00 g/kg（HD組））和陽性對照組（苯溴馬隆BBR，40 mg/kg）。

受試物配制：儲存的0.5 g/mL的袋茶提取物原液為HD組受試物，取原液10.0 mL稀釋成15.0 mL為MD組受試物，取原液5.0 mL稀釋成15.0 mL為LD組受試物。

造模及給藥：模型組、各受試物組及陽性對照（BBR） 組連續(xù)灌胃（ig）給予酵母膏（20 g/kg）造模，每日造模后1 h灌胃（ig）給予各受試物?？瞻讓φ战M同時給予無菌水，灌胃體積為10.0 mL/kg。實驗期間所有小鼠均正常飲食。給藥14天后進行取材，取血前12 h禁食不禁水。

1.2.2 動物處理與樣本采集

實驗最后一次灌胃1 h后，摘眼球取血后處死小鼠。3 000 r/min離心15 min分離血清，測定相關(guān)指標(biāo)。同時，冰浴取肝臟，稱重、剪碎，加入5倍體積的80 mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.4），在冰浴中充分勻漿，4 ℃下3 000 r/min，離心10 min取上清液用于測定相關(guān)指標(biāo)。

1.2.3 相關(guān)指標(biāo)檢測

小鼠血清UA、血清XOD 活性水平、Cre和BUN，用相應(yīng)試劑盒檢測;血清中IL-6、TNF-α以及肝臟勻漿中的XOD用相應(yīng)的ELISA試劑盒檢測。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)處理采用IBM SPSS Statistics 19.0 軟件，結(jié)果用mean±SE表示，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間比較方差齊時選用One-way LSD 法，方差不齊時選擇 Dunnetts T3 法。

2 結(jié)果與分析

2.1 袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠血清尿酸和黃嘌呤氧化酶的影響

袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠血清尿酸和黃嘌呤氧化酶的影響

分別見圖1、圖2。

由圖1、圖2結(jié)果可見，與空白對照組相比，模型組小鼠血清UA和XOD 水平極顯著增高（P<0.01），表明造模成功。與模型組比較，袋茶提取物低、中、高劑量組和陽性對照組的小鼠血清UA和XOD 水平均極顯著降低（P<0.01），說明試驗劑量的提取物具有降低小鼠血清尿酸及黃嘌呤氧化酶的作用。

2.2 袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠肝臟黃嘌呤氧化酶的影響

袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠肝臟黃嘌呤氧化酶的影響見圖3。

由圖3結(jié)果可知，與空白對照組相比，模型組小鼠肝臟XOD 活性極顯著增高（P<0.01），表明造模成功。與模型組比較，配方提取物低、中劑量組小鼠肝臟XOD 活性極顯著降低（P<0.01），高劑量組的顯著降低（P<0.05），說明提取物在低、中、高劑量下均能降低小鼠肝臟XOD 的活性。

2.3 袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠血清BUN的影響

袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠血清BUN的影響結(jié)果如圖4所示。

由圖4 可知，與對照組比較，模型組BUN含量極顯著增加（P<0.01）;與模型組比較，提取物中、高劑量組血清BUN顯著降低（P<0.05）;陽性對照組與模型組比較，血清BUN含量極顯著降低（P<0.01）。結(jié)果說明提取物在中、高劑量下可以降低小鼠血清中BUN的含量。

2.4 袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠血清Cre的影響

袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠血清Cre的影響如圖5所示。

與對照組比較，模型組血清Cre含量無明顯變化;與模型組比較，提取物中劑量組血清Cre極顯著降低（P<0.01），高劑量組血清Cre顯著降低（P<0.05），沒有呈現(xiàn)劑量的相關(guān)性;陽性對照組與模型組比較，血清Cre無明顯變化。推測中、高劑量組的提取物增強了腎臟清除Cre的功能。

2.5 袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠血清IL-6的影響

袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠血清IL-6的影響如圖6所示。

由圖6可見，與對照組比較，模型組IL-6含量明顯增加（P< 0.05）;與模型組比較，提取物僅高劑量組血清中IL-6含量明顯降低（P<0.05），而中、低劑量組血清中IL-6含量無明顯變化;陽性對照組與模型組比較，血清中IL-6含量極顯著降低（P<0.01）。結(jié)果說明高劑量組提取物能夠降低血清中IL-6含量。

2.6 袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠血清TNF-α含量的影響

袋茶提取物對高尿酸血癥小鼠血清TNF-α含量的影響結(jié)果見圖7所示。

由圖7可見，與對照組比較，模型組TNF-α含量極顯著增加（P<0.01）;與模型組比較，提取物中、高劑量組血清中TNF-α含量明顯降低 （P<0.05）;陽性對照組與模型組比較，血清TNF-α含量極顯著降低（P<0.01）。此結(jié)果說明中、高劑量組提取物能使血清中TNF-α含量降低。

3 討論

人類體內(nèi)并無尿酸酶，而嚙齒類動物體內(nèi)存在的尿酸酶極易將尿酸分解為尿囊素排出體外，高尿酸血癥動物模型的制備比較困難。酵母膏是尿酸的前體物質(zhì)，酵母膏可誘導(dǎo)小鼠高尿酸血癥，也可一定程度上引起血清肌酐、尿素氮水平顯著升高[17]。參考陳光亮[18]等的研究，通過飼喂酵母膏建立的高尿酸血癥模型，造模組小鼠血清UA水平和XOD水平與空白對照組相比較有統(tǒng)計學(xué)差異，說明造模成功。與空白對照組相比，造模組血清BUN升高，說明酵母膏造模對小鼠腎功能產(chǎn)生了一定影響。炎癥反應(yīng)是臨床上高尿酸血癥引起損傷的主要病理特點，本研究模型組小鼠血清中的炎性標(biāo)志物IL-6和TNF-α含量與空白對照組相比較有統(tǒng)計學(xué)差異，與Chi-Chang Huang[19]等的研究結(jié)果一致。

黃嘌呤氧化酶（XOD） 是嘌呤核苷代謝途徑的限速酶， 是調(diào)控尿酸生成的最終環(huán)節(jié)，在高尿酸血癥的發(fā)病中占主導(dǎo)地位。經(jīng)口飼喂高、中、低劑量袋茶提取物，可使小鼠血尿酸水平降低，同時血清XOD和肝臟XOD活性水平也顯著降低，說明袋茶具有抗高尿酸血癥的作用，與其中的活性物質(zhì)降低了血清和肝臟中的XOD水平有關(guān)[20-22]。

腎臟在尿酸排泄過程中起著重要作用，因此高尿酸血癥常伴有腎功能損傷，血肌酐和尿素氮是檢驗?zāi)I功能的重要指標(biāo)。袋茶提取物可使小鼠Cre和BUN含量顯著降低，說明其有效減少腎臟因高濃度尿酸帶來的病理損傷，對腎臟功能有一定的保護作用。而陽性對照物苯溴馬隆也只能降低尿素氮的含量，對于Cre沒有明顯的抑制作用，即苯溴馬隆對于血尿酸過高引起的腎損傷不能達到有效控制。據(jù)此推測，與用藥物治療相比較，袋茶提取物可通過早期干預(yù)降低血尿酸水平并達到保護腎臟功能的目的。

尿酸及其結(jié)晶產(chǎn)物可以誘導(dǎo)血管管壁發(fā)生炎癥反應(yīng)，刺激單核細胞生成IL-1β、IL-6以及TNF-α[23-24]。袋茶提取物可有效控制尿酸引起的IL-6以及TNF-α 的含量增加，從而減輕機體的炎性反應(yīng)。由此可見，機體通過攝入一定量的袋茶提取物，在有效降低血尿酸水平的同時，達到了抗炎的目的。

以辣木葉、白果、桑葉、甘草[13-16，20-22]等為主成分組成的袋茶提取物在一定劑量下可以有效降低小鼠血清UA、血清XOD，對單一酵母膏誘發(fā)的高尿酸血癥有一定療效，從而達到保護機體的目的，通過降低肌酐、尿素氮的含量和IL-6、TNF-α的含量得到體現(xiàn)。但是，因其成分、作用機制復(fù)雜，對于起抑制作用的具體有效成分的分析及作用機理還有待進一步研究。

本研究過程中所用袋茶提取物可以有效降低高尿酸血癥大鼠的血尿酸水平，作為改善高尿酸血癥患者健康狀況的保健食品，用于早期干預(yù)機體尿酸水平具有進一步研發(fā)的潛力和利用價值。

[參考文獻]

[1]陳松婷，戴輝，林愛華. 中老年人群高尿酸血癥與心血管危險因素關(guān)系[J]. 中國公共衛(wèi)生， 2014， 30（2）：144-148.

[2]HOU C W， LEE Y C， HUNG H F， et al. Longan seed extract reduces hyperuricemia via modulating urate transporters and suppressing xanthine oxidase activity[J]. The American Journal of Chinese Medicine，2012（40）：979-991.

[3]ZHAO R， CHEN D， WU H. Pu-erh ripened tea resists to hyperuricemia through xanthine oxidase and renal urate transporters in hyperuricemic mice[J]. J Funct Foods， 2017（29）：201-207.

[4]中華醫(yī)學(xué)會內(nèi)分泌學(xué)分會.高尿酸血癥和痛風(fēng)治療中國專家共識[J].中華內(nèi)分泌雜志，2013，29（11）：913-920.

[5]郭立新.從《高尿酸血癥和痛風(fēng)治療中國專家共識》談高尿酸血癥的治療[J].藥物與臨床： 藥品評價，2014，11（1）：21-31.

[6]CHAO J，TERKELTAUB R. A critical reappraisal of allopurinol dosing， safety， and efficacy for hyperuricemia in gout [J]. Curr Rheumatol Rep， 2009，11 （2）：135-140.

[7]CHOHAN S， BECKER M A， MACDONALD P A， et al. Women with gout： efficacy and safety of urate-lowering with febuxostat and allopurinol [J]. Arthritis Care Res（Hoboken），2012，64 （2）： 256-261.

[8]KURAJOH M， KOYAMA H， SHOJI T， et al. Relationship between serum allantoin and urate in healthy subjects and effects of benzbromarone in gout patients [J]. International Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics， 2012， 50 （4）： 265-271.

[9]宋艷玲.苯溴馬隆治療高尿酸血癥和痛風(fēng)的療效觀察[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊， 2014， 16（5）： 858-859.

[10]王春輝， 李松.黃嘌呤氧化酶抑制劑的研究進展 [J]. 國外醫(yī)學(xué)（藥學(xué)分冊）， 2006， 33（5）： 351-353， 357.

[11]梁華玉， 王育琴. 苯溴馬隆肝毒性機制的研究進展 [J].藥物不良反應(yīng)雜志， 2016， 18（4）： 286-289.

[12]張雪， 周英， 管靜， 等.5種中藥材提取物對黃嘌呤氧化酶的抑制作用[J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報， 2015， 34（4）： 51-54.

[13]梁文娟， 和勁松， 田洋， 等. 辣木葉提取物降低高尿酸血癥小鼠尿酸水平及機理研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2017， 45（17）： 108-109.

[14]孫維華， 趙新芳， 甘霞. 參荷脂肝湯對非酒精性脂肪肝糖、脂、尿酸代謝的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2015， 21（1）： 186-190.

[15]王珂， 王瑞坡， 李姣，等. 桑葉黃酮對腺嘌呤誘導(dǎo)大鼠高尿酸血癥腎損傷的防治作用[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)， 2012， 24（2）： 172-175+202.

[16]鄒傳宗，王紅娟，李紀(jì)綱，等.蒲公英對急性高尿酸血癥大鼠的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2020，38（4）：170-172.

[17]肖為， 陶葉杏， 谷毅鵬，等. 全緣馬尾藻提取物對酵母膏誘導(dǎo)小鼠高尿酸血癥的拮抗效應(yīng)[J].食品工業(yè)科技，2015，36（17）：339-342.

[18]陳光亮， 張清林， 馬曉芹， 等. 酵母致小鼠高尿酸血癥模型 [J]. 中國藥理學(xué)通報， 2003，19（4）： 467-469.

[19]HUANG C C， LOU B S， HSU F L. Use of urinary metaboiomics to evaluate the effect of hyperuricemia on the kidney[J]. Food and Chemical Toxicology， 2014（74）： 35-44.

[20]孫銘，劉春雨， 傅文綺， 等. 枸杞提取物對慢性高尿酸血癥的治療作用及機制研究[J]. 中國民族民間醫(yī)藥， 2017， 26（24）： 35-37.

[21]唐夏莉， 陳素紅， 呂圭源. 復(fù)方菊明提取物對高血壓伴高尿酸血癥模型大鼠尿酸的影響 [J]. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012，36（12）： 1321-1324.

[22]程虹毓，朱繼孝. 銀杏葉提取物降尿酸及對黃嘌呤氧化酶抑制作用研究 [J].中藥通報， 2013， 12（2）： 61-63.

[23]余斌， 張亦工. 急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中白細胞介素類細胞因子的研究進展 [J]. 中國中醫(yī)骨傷科雜志， 2005， 13（4）： 56-58.

[24]王紅梅， 楊中華， 張明， 等.急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的炎癥機制研究進展 [J].國外醫(yī)學(xué)（老年學(xué)分冊）， 2005， 26（3）： 124-127.

（責(zé)任編輯 李亞青）