葵花籽蛋白對慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激小鼠的抗抑郁作用

盧肖蒙，齊 策，鄭 潔，孫 美，唐 雪，金 龍*，孫 進(jìn),*

1江南大學(xué)食品學(xué)院，無錫214122；2國家堅(jiān)果加工技術(shù)研發(fā)專業(yè)中心，合肥 230601；3青島大學(xué)營養(yǎng)與健康研究院，青島 266071

抑郁癥具有情緒低落、快感缺失、興趣或愉悅感缺失、習(xí)得性無助、睡眠及認(rèn)知功能障礙等特點(diǎn)[1]。在當(dāng)今生活快節(jié)奏和高強(qiáng)度的壓力下，抑郁癥發(fā)病率正逐年上升，我國人群的抑郁癥發(fā)病率為4.2%[2]，到2020年其將成為僅次于心臟病的第二大疾患，已經(jīng)成為廣受關(guān)注的公共衛(wèi)生問題。

抑郁癥病因的單胺假說認(rèn)為，中樞神經(jīng)系統(tǒng)中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)濃度水平下降會(huì)引起抑郁癥[3]。單胺類神經(jīng)遞質(zhì)主要包括5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)、多巴胺(dopamine，DA)或去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)，它們在大腦的合成速度受大腦中前體物質(zhì)濃度的影響，通過飲食攝入某些神經(jīng)遞質(zhì)的前體可增加其在大腦中的水平。色氨酸(tryptophan，Trp)、苯丙氨酸(phenylalanine，Phe)/酪氨酸(tyrosine，Tyr)分別是5-HT和DA的前體，它們的攝入量與抑郁的發(fā)生密切相關(guān)，通過膳食補(bǔ)充富含Trp和苯丙氨酸的飲食是預(yù)防抑郁發(fā)生的有效營養(yǎng)干預(yù)措施[4]，近年來，開發(fā)富含Trp的食品資源是該領(lǐng)域的研究的熱點(diǎn)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)或應(yīng)用的主要是牛乳源蛋白或肽，包括乳清蛋白、α-乳清蛋白、β-lactolin和γ-[Glu]n-Trp(乳清蛋白水解物)，它們的神經(jīng)調(diào)節(jié)活性主要與5-HT系統(tǒng)有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)富含Trp的乳清蛋白飲食顯示對抑郁小鼠明顯的抗焦慮作用，改善小鼠的抑郁行為[5]。以蛋白百分含量計(jì)，葵花籽蛋白Trp含量高達(dá)1.75 g/100 g蛋白，且我國的葵花籽資源豐富，其大量副產(chǎn)物(如葵花籽粕)有待開發(fā)利用。因此在本研究中，我們與乳清蛋白作比較，探究葵花籽蛋白能否發(fā)揮類似乳清蛋白的抗抑郁作用。

生活壓力引起的抑郁可通過慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激(CUMS)動(dòng)物模型來研究。CUMS造成抑郁的機(jī)制之一是其引起海馬氧化應(yīng)激[6]。研究表明，除作為神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)揮作用外，5-HT也是一種強(qiáng)抗氧化劑，通過補(bǔ)充富Trp蛋白，提高大腦5-HT的產(chǎn)生可能也抑制氧化應(yīng)激，還有待驗(yàn)證。

然而目前國內(nèi)外尚未有關(guān)葵花籽蛋白抗抑郁作用的研究報(bào)道。本研究采用CUMS小鼠抑郁模型，研究葵花籽蛋白預(yù)防抑郁癥的作用。本研究可為開發(fā)基于葵花籽蛋白的食品，為其在預(yù)防抑郁發(fā)生的營養(yǎng)干預(yù)措施的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 動(dòng)物

雄性C57BL/6J小鼠40只，6周齡，體質(zhì)量17～20 g，SPF級(jí)(常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK(蘇)2016-0010，動(dòng)物合格證號(hào)：201907736)。飼養(yǎng)于江南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，自由進(jìn)食進(jìn)水，相對溫度23±2 ℃，相對濕度60%±5%，12小時(shí)晝夜交替。所有實(shí)驗(yàn)操作符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)要求(倫理審批號(hào)：JN.No20181230c0480710[281])。

1.1.2 試劑

葵花籽蛋白(洽洽食品股份有限公司，Trp：2.35 g/100 g蛋白，Phe+Tyr：14.15 g/100 g蛋白)，乳清蛋白(河南旗諾食品配料有限公司，Trp：1.22 g/100g蛋白，Phe+Tyr：6.65 g/100 g蛋白)；大豆蛋白(江蘇富盛德生物工程有限公司)；丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、過氧化氫酶(catalase，CAT)試劑盒(南京建成生物研究所)；皮質(zhì)酮(corticosterone，CORT)、5-HT、DA、NE和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)試劑盒(江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司)。

1.1.3 儀器與設(shè)備

動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)裝置(上海欣軟信息科技有限公司)；MultiskanMK3酶標(biāo)儀(美國Molecular Devices公司)；R686VLT超低溫冷凍冰箱(美國INVETRO公司)；5804R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(德國Eppendorf公司)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組

將小鼠隨機(jī)分為正常組(CON，蛋白來源大豆蛋白)、模型組(MOD，蛋白來源大豆蛋白)、葵花籽蛋白組(SFSP)、乳清蛋白組(WPC)，10只/組。各組小鼠先飼喂不同蛋白源飼料(表1)4周，從第5周開始，除正常組外，其余各組小鼠單籠飼養(yǎng)且連續(xù)進(jìn)行抑郁模型造模3周。

表1 動(dòng)物飼料組成

1.2.2 慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激模型(CUMS)

運(yùn)用多種刺激方式以每天2次的頻率交替應(yīng)激小鼠21天，應(yīng)激[7]包括籠具45°傾斜2 h、夾尾3 min、于無墊料的籠具中4 h、同籠3 h(5只)、置于大鼠墊料3 h、空籠具加水0.8 cm淹沒4 h，以及禁水、禁食12 h。

1.3 檢測指標(biāo)

1.3.1 糖水偏好實(shí)驗(yàn)

糖水偏好實(shí)驗(yàn)(sucrose preference test，SPT)參考文獻(xiàn)[8]，分為訓(xùn)練期和測試期。訓(xùn)練期：給予小鼠一瓶1%蔗糖水和一瓶純水48 h，中間交換水瓶位置，讓小鼠適應(yīng)飲用糖水。測試期：小鼠禁水禁食12 h后進(jìn)行12 h的糖水偏好測試，測試前后分別稱量每個(gè)水瓶的重量，并計(jì)算糖水偏愛指數(shù)(糖水偏愛指數(shù) = 糖水消耗量/總液體消耗量 × 100%)，造模結(jié)束后第2天進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 懸尾實(shí)驗(yàn)

懸尾實(shí)驗(yàn)(tail suspension test，TST)參考文獻(xiàn)[9]，用膠帶把小鼠尾巴(距尾尖1 cm)粘貼在固定裝置上，使小鼠倒置，頭部距水平面大約20 cm，此外小鼠間用擋板隔開阻礙其視線，保證小鼠懸空，無可接觸地方，每只小鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)間為6 min，觀察并記錄后4 min內(nèi)的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間，將小鼠除呼吸外所有肢體均不動(dòng)的時(shí)間認(rèn)定為不動(dòng)時(shí)間。

1.3.3 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

強(qiáng)迫游泳(forced swimming test，F(xiàn)ST)參考文獻(xiàn)[10]，將小鼠放于高25 cm，直徑15 cm的燒杯中，燒杯中的水深保持12 cm，溫度控制在25 ℃左右，將小鼠放置于水中6 min，觀察記錄小鼠在后4 min內(nèi)的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。將小鼠在水中停止游動(dòng)掙扎，或呈漂浮狀態(tài)，僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面，身體沒有全身運(yùn)動(dòng)的狀態(tài)認(rèn)定為不動(dòng)時(shí)間。

1.3.4 曠場實(shí)驗(yàn)

曠場實(shí)驗(yàn)(open field test，OFT)在一個(gè)黑暗的房間里，放置一個(gè)無頂?shù)膶?shí)驗(yàn)箱(40 cm×40 cm×30 cm)，在箱子上方安裝有攝像頭，并連接電腦上的ANY-maze視頻追蹤系統(tǒng)，自動(dòng)跟蹤和記錄小鼠在實(shí)驗(yàn)中的活動(dòng)情況并獲得行為數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)箱的底部在電腦上被分為16個(gè)小正方形格子(10 cm×10 cm)，中央?yún)^(qū)域的四個(gè)正方形格子被定義為中央?yún)^(qū)域。將小鼠放入裝置的中央?yún)^(qū)域并允許其自由探索30 min。每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將小鼠的糞尿殘留物清理干凈，并用 75%乙醇擦拭從而清除殘留氣味，避免殘留的氣味影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.3.5 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)

高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)(elevated plus maze，EPM)將小鼠放置在長50 cm，寬5 cm的開放臂和封閉臂交叉組成的實(shí)驗(yàn)裝置中，中央是無封閉的5 cm×5 cm的平臺(tái)，封閉臂和底部平臺(tái)均為白色，整個(gè)裝置距離地面45 cm，讓小鼠在裝置中自由探索5 min，與攝像頭相連的電腦系統(tǒng)自動(dòng)記錄小鼠的活動(dòng)狀態(tài)。

1.3.6 樣品采集

行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，眼球取血并脫頸處死小鼠，收集血液并迅速分離皮層和海馬組織。將血液在4 ℃，4 000 rpm離心10 min，收集上層血漿分裝到離心管，-80 ℃保存。海馬和皮層按1∶10(W/V)用生理鹽水制備成組織勻漿液，離心-80 ℃保存。

1.3.7 氧化還原穩(wěn)態(tài)相關(guān)指標(biāo)的測定

皮層SOD、GSH-Px和CAT活性以及MDA水平的測定嚴(yán)格按照檢測試劑盒的說明進(jìn)行，活性氧自由基(ROS)測定采用化學(xué)發(fā)光法測定[11]。

1.3.8 CORT和單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的測定

血清CORT和海馬5-HT、DA、NE和BDNF的測定按照Elisa試劑盒說明書操作。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

使用IBM SPSS Statistics 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。通過單因素方差分析(ANOVA)對結(jié)果進(jìn)行分析，用Duncan檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。當(dāng)P<0.05時(shí)，差異被認(rèn)為是顯著的。通過雙變量相關(guān)性分析對結(jié)果進(jìn)行雙側(cè)顯著性檢驗(yàn)，用HemI 1.0 制作熱圖。

2 結(jié)果

2.1 SFSP對抑郁模型小鼠體重的影響

如圖1，第4周時(shí)，SFSP組體重顯著高于其余3組(P<0.05)，而CON、MOD和WPC組體重?zé)o顯著差異，可能與以SFSP配制的飼料適口性更好有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)葵花籽蛋白在促進(jìn)生長、體重增長和飲食效率比方面表現(xiàn)更有效率[12]，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致；CUMS模型施加后，第5周，除CON組外，其余各組體重出現(xiàn)下降趨勢，為小鼠初次遭受應(yīng)激的結(jié)果，其它應(yīng)激引起小鼠體重下降也曾被觀察到[13]。第6周，MOD、SFSP和WPC組小鼠體重呈現(xiàn)明顯升高的短暫時(shí)期，可能與小鼠對應(yīng)激的暫時(shí)適應(yīng)有關(guān)，這也與我們觀察到的采食量明顯增加的變化一致。與MOD相比，CON，SFSP和MOD組體重顯著增加(P<0.05)。

圖1 葵花籽蛋白對體重的影響

2.2 SFSP對抑郁模型小鼠糖水偏好的影響

如表2，與CON相比，MOD組小鼠對糖水的偏好顯著性降低(P<0.05)，表明抑郁小鼠對獎(jiǎng)賞的反應(yīng)性降低，即快感缺失；與MOD組比，SFSP組和WPC組小鼠對糖水的偏好明顯提高(P<0.05)。

表2 SFSP對抑郁模型小鼠糖水偏好的影響(n= 10)

2.3 SFSP對抑郁模型小鼠TST和FST實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響

如表3，在TST和FST實(shí)驗(yàn)中，與CON組相比，MOD組小鼠不動(dòng)時(shí)間顯著增加(P<0.05)，表明抑郁小鼠的行為絕望狀態(tài)加重；SFSP組和WPC組小鼠與MOD組相比不動(dòng)時(shí)間顯著減少(P<0.05)。

表3 SFSP對TST和FST實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響(n= 10)

2.4 SFSP對抑郁模型小鼠自主活動(dòng)性的影響

如表4，各組小鼠總路程無顯著性差異，但其余各組小鼠總的運(yùn)動(dòng)路程大于MOD組；與CON相比，MOD組小鼠進(jìn)入中央?yún)^(qū)域的時(shí)間、路程和次數(shù)顯著減少(P<0.05)，表明抑郁小鼠對新環(huán)境的好奇程自主活動(dòng)性降低；與MOD相比，SFSP組小鼠進(jìn)入中央?yún)^(qū)域的時(shí)間、路程和次數(shù)顯著增加(P<0.05)，WPC組小鼠進(jìn)入中央?yún)^(qū)域的時(shí)間和路程顯著增加(P<0.05)，進(jìn)入中央?yún)^(qū)域次數(shù)無顯著性差異。

表4 SFSP對OFT實(shí)驗(yàn)自主活動(dòng)性的影響(n= 10)

2.5 SFSP對抑郁模型小鼠焦慮情緒的影響

如表5，與CON組相比，MOD組小鼠進(jìn)入開臂的次數(shù)、停留時(shí)間和進(jìn)入時(shí)間百分比顯著減少(P<0.05)，進(jìn)入總次數(shù)與其無顯著性差異，驗(yàn)證了抑郁小鼠的焦慮狀態(tài)加??；與MOD組相比，SFSP組和WPC組小鼠進(jìn)入總次數(shù)、開臂的次數(shù)、停留時(shí)間和進(jìn)入時(shí)間百分比均顯著增加(P<0.05)。

表5 SFSP對高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)自主活動(dòng)性的影響(n= 10)

2.6 SFSP對抑郁模型小鼠皮層氧化還原穩(wěn)態(tài)的影響

如表6，與CON組相比，MOD組小鼠皮層內(nèi)GSH-Px、SOD和CAT活性顯著降低(P<0.05)，而MDA和ROS水平顯著升高(P<0.05)，說明氧化應(yīng)激引起了抑郁小鼠體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)耗竭；與MOD組相比，SFSP組和WPC組小鼠皮層內(nèi)GSH-Px、SOD、CAT活性顯著提升(P<0.05)，MDA和ROS水平顯著降低(P<0.05)，且SFSP組小鼠GSH-Px和SOD活性比WPC組提升更顯著(P<0.05)。

表6 SFSP對皮層氧化應(yīng)激的影響(n= 10)

2.7 SFSP對抑郁模型小鼠血清CORT和海馬神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響

如表7，與CON組相比，抑郁小鼠血漿中CORT含量顯著升高(P<0.05)；SFSP組和WPC組小鼠血漿中CORT含量比MOD組顯著降低(P<0.05)。

表7 SFSP對抑郁模型小鼠皮質(zhì)酮和神經(jīng)遞質(zhì)的影響(n= 10)

與CON組相比，抑郁小鼠海馬中5-HT、DA、NE和BDNF含量顯著降低(P<0.05)；與MOD組相比，SFSP組和WPC組小鼠海馬中5-HT、DA、NE和BDNF含量顯著升高(P<0.05)，且SFSP組海馬內(nèi)BDNF含量顯著高于WPC組(P<0.05)。

2.8 SFSP對抑郁模型小鼠血清氨基酸含量的影響

如表8，與CON組相比，抑郁小鼠血漿中Trp、Phe、Tyr和支鏈氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸)濃度以及色氨酸與中性氨基酸(large neutral amino acids，LNAA)比值顯著降低(P<0.05)；與MOD組相比，SFSP組和WPC組小鼠血漿內(nèi)Trp、Phe、Tyr和支鏈氨基酸濃度及Trp/LNAA 比值顯著提升(P<0.05)。

表8 SFSP對抑郁模型小鼠皮質(zhì)酮和神經(jīng)遞質(zhì)的影響(n= 10)

2.9 行為學(xué)指標(biāo)與生化指標(biāo)相關(guān)性分析

圖2顯示，根據(jù)不同指標(biāo)的相關(guān)系數(shù)聚類分析，行為學(xué)和生化指標(biāo)分別都被分為4類。生化指標(biāo)分類中G1以神經(jīng)遞質(zhì)為主、G2主要應(yīng)激介質(zhì)、G3主要為血清中性氨基酸，而G4為神經(jīng)遞質(zhì)前體氨基酸及其總量與中性氨基酸的比值。在行為學(xué)指標(biāo)中，糖水偏好指數(shù)與其它指標(biāo)明顯分離，與單胺、抗氧化指標(biāo)和芳香族氨基酸都存在顯著相關(guān)，說明該指標(biāo)是反映抑郁行為的最敏感指標(biāo)。此外，懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果屬于II群與G1-G3關(guān)系密切。懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果也與G4相關(guān)性密切。因此，這三種行為學(xué)指標(biāo)最適合于評(píng)價(jià)單胺前體的利用效率及神經(jīng)調(diào)節(jié)作用。

圖2 行為學(xué)指標(biāo)與生化指標(biāo)相關(guān)性熱圖

3 討論

CUMS模型近年來已經(jīng)成為研究嚙齒動(dòng)物抑郁病理機(jī)制的經(jīng)典模型之一。動(dòng)物暴露于CUMS一段時(shí)間后，其抑郁行為的發(fā)展接近于人類抑郁癥臨床癥狀，如對獎(jiǎng)賞的反應(yīng)性降低(快感缺乏)，身體活動(dòng)和行為發(fā)生改變(習(xí)得性無助)，毛發(fā)修飾和性行為改變[14]。目前，行為學(xué)是判定抑郁模型的主要標(biāo)準(zhǔn)，以判斷CUMS模型是否造模成功及干預(yù)是否有效。本實(shí)驗(yàn)顯示CUMS誘導(dǎo)的小鼠體重和糖水偏好率顯著下降，SFSP和WPC顯著提升了抑郁小鼠體重和糖水偏好率。Orosco等[15]發(fā)現(xiàn)長期食用α-乳清蛋白的小鼠相比富含酪蛋白的飲食，對糖水的偏好明顯增加，與本研究一致。葵花籽蛋白和乳清蛋白顯著減少了懸尾和強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間，預(yù)防抑郁小鼠在礦場和高架十字迷宮的焦慮行為，二者效果相當(dāng)。Ahmed等[16]發(fā)現(xiàn)暴露于壓力源中的小鼠在懸尾和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間顯著增加，給予乳清蛋白分離物的小鼠不動(dòng)時(shí)間顯著減少。研究報(bào)道[15,17]，給予富含乳清蛋白飲食的小鼠在曠場實(shí)驗(yàn)中進(jìn)入中央?yún)^(qū)域次數(shù)和高架十字迷宮中進(jìn)入總次數(shù)，開臂次數(shù)和開臂時(shí)間百分比顯著增加，顯示抗焦慮效果。本實(shí)驗(yàn)中與模型組相比，乳清蛋白組小鼠進(jìn)入中央?yún)^(qū)域次數(shù)雖無顯著性差異，但進(jìn)入次數(shù)多于抑郁小鼠。表明葵花籽蛋白可改善小鼠抑郁行為。

抑郁癥的發(fā)展伴隨氧化應(yīng)激的發(fā)生，抑郁癥患者血漿中SOD等抗氧化因子水平顯著降低，而MDA水平顯著升高[18]。ROS在某些神經(jīng)精神疾病如重度抑郁中起作用，如果ROS的濃度超過人體中和能力，會(huì)改變氧化劑和抗氧化因子之間的平衡而造成氧化損傷[19]。本研究顯示葵花籽蛋白能夠顯著提升抑郁小鼠皮層內(nèi)GSH-Px、SOD和CAT活性，降低MDA和ROS濃度，其與乳清蛋白抗抑郁效果相當(dāng)。研究[20]報(bào)道WPC可下調(diào)大鼠體內(nèi)ROS和NO水平，防止氧化損傷的發(fā)展。表明葵花籽蛋白能夠發(fā)揮類似乳清蛋白的抗抑郁作用，通過改善小鼠皮層內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)，減少自由基的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)體內(nèi)氧化因子與抗氧化子的平衡起到改善抑郁的作用。

長期應(yīng)激壓力會(huì)激活下丘腦-垂體-腎上腺軸，從而導(dǎo)致循環(huán)中的糖皮質(zhì)激素(如嚙齒類動(dòng)物的CORT或靈長類動(dòng)物的皮質(zhì)醇)增加，皮質(zhì)醇異常升高可能導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)展[21]。本結(jié)果顯示CUMS誘導(dǎo)小鼠血漿CORT含量顯著降低，葵花籽蛋白可以逆轉(zhuǎn)其含量降低。單胺類神經(jīng)遞質(zhì)在抑郁癥中起著重要作用，5-HT、NE和DA等參與調(diào)節(jié)精神活動(dòng)、情緒反應(yīng)、睡眠和性欲等與神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)的生理反應(yīng)。BDNF是一種BDNF-TrkB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的突觸功能和神經(jīng)可塑性的調(diào)節(jié)因子，其和神經(jīng)元形成、快感缺乏癥以及學(xué)習(xí)記憶障礙等方面有關(guān)[22]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)抑郁小鼠海馬中5-HT、DA、NE和BDNF含量顯著降低，葵花籽蛋白可明顯抑制CUMS誘導(dǎo)的小鼠海馬中神經(jīng)遞質(zhì)和BDNF水平降低，其效果與乳清蛋白效果相當(dāng)。研究報(bào)道乳清蛋白分離物顯著提高抑郁小鼠體內(nèi)5-HT、DA、NE，其效果與氟西汀相當(dāng)[16]，這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。研究發(fā)現(xiàn)5-HT具有抗氧化性，是氧化應(yīng)激信號(hào)通路的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑之一，5-HT的產(chǎn)生會(huì)影響ROS水平，從而來調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激[23]，這與我們的相關(guān)性分析一致，表明5-HT與氧化應(yīng)激存在相關(guān)性。表明葵花籽蛋白可能通過調(diào)節(jié)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)減少和改善單胺能神經(jīng)元功能不足，增強(qiáng)大腦神經(jīng)可塑性而發(fā)揮抗抑郁作用。

Trp進(jìn)入大腦的轉(zhuǎn)運(yùn)是由亮氨酸偏愛的L型氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體1系統(tǒng)介導(dǎo)的，Trp/LNAA的比例決定了Trp進(jìn)入大腦的流量，從而決定5-HT的生物合成，被認(rèn)為是腦Trp可用性的敏感指數(shù)[24]，增大Trp/LNAA 比率，可以促進(jìn)Trp穿過血腦屏障進(jìn)入大腦，合成神經(jīng)遞質(zhì)5-HT，參與情緒調(diào)節(jié)。本結(jié)果顯示抑郁小鼠血清中Trp、Phe、Tyr濃度及Trp/LNAA比值明顯低于正常組，給予葵花籽蛋白和乳清蛋白可顯著抑制CUMS誘導(dǎo)的小鼠血清中Trp濃度和Trp/LNAA比值的降低。Markus等[25]報(bào)道，受試者服用α-乳清蛋白可增加血漿中Trp及Trp/LNAA的比例，并可能通過改變腦內(nèi)血清素的含量來提高應(yīng)對能力。提示葵花籽蛋白可能通過調(diào)節(jié)Trp濃度以及Trp/LNAA比值，促進(jìn)Trp進(jìn)入大腦，增強(qiáng)5-HT的合成和釋放而發(fā)揮抗抑郁作用。

綜上，葵花籽蛋白可顯著改善抑郁，活性與乳清蛋白相當(dāng)，主要通過改善抑郁模型小鼠大腦氧化應(yīng)激損傷和提高單胺類神經(jīng)遞質(zhì)濃度而實(shí)現(xiàn)。但是，以葵花籽蛋白為主要食物蛋白來源在在現(xiàn)實(shí)中難以實(shí)現(xiàn)，目前國外市場主要的富含葵花籽蛋白的產(chǎn)品是葵花籽醬，但我國消費(fèi)比較少。有研究顯示，蛋白水解物比完整或純Trp能更明顯、更快和更持久的增加大腦Trp[26]。因此，下一步研究需要集中于葵花籽富含Trp的水解物組分的鑒定，開發(fā)相應(yīng)的食品配料，用于少量攝取即可發(fā)揮預(yù)防抑郁的作用。