虎掌南星生品及不同炮制品指紋圖譜和5種核苷類成分含量的比較研究

曹淼淼 朱建光 張振凌 杜莉杰 楊佳寧

摘 要 目的：建立虎掌南星生品及不同工藝炮制品的指紋圖譜，并測定其中5種核苷類成分的含量，比較生品與不同炮制品之間成分的差異。方法：分別以虎掌南星生品、河南省中藥飲片炮制規(guī)范制品（簡稱“《規(guī)范》炮制品”）和產(chǎn)地加工炮制一體化新工藝炮制品（簡稱“一體化新工藝炮制品”）（各12份）為考察樣品，采用高效液相色譜（HPLC）法進行分析[色譜柱為SymmetryShield RP18，流動相為乙腈（A）-0.1%乙酸（B）水溶液（梯度洗脫），流速為0.8 mL/min，柱溫為30 ℃，檢測波長為270 nm，進樣量為15 ?L]。應用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004A版）軟件分別建立3種虎掌南星樣品的HPLC指紋圖譜并進行相似度評價;通過與對照品圖譜比較對色譜峰進行指認。同時，對其中5種核苷類成分（腺嘌呤、次黃嘌呤、尿苷、黃嘌呤、肌苷）進行定量分析，并采用SPSS 21.0軟件對36份樣品進行聚類分析。結果：指紋圖譜及含量測定的方法學考察結果均符合相關要求。3種樣品與其各自對照指紋圖譜的相似度均大于0.990。在虎掌南星生品中確定了22個共有峰，在2種炮制品中均確定了16個共有峰（2種炮制品中消失的6個峰相同）;指認出了3種樣品中均含有的5種核苷類成分，分別為腺嘌呤（3號峰）、次黃嘌呤（7號峰）、尿苷（8號峰）、黃嘌呤（9號峰）、肌苷（11號峰）。含量測定結果顯示，2種炮制品中5種核苷類成分的總含量均降低，總含量高低排序為生品>一體化新工藝炮制品>《規(guī)范》炮制品。聚類分析結果顯示，36份樣品可聚為2類，其中生品單獨聚為一類，2種炮制品聚為另一類。結論：本研究建立的方法穩(wěn)定、可行，可用于虎掌南星生品及不同炮制品的質(zhì)量評價?；⒄颇闲墙?jīng)炮制后指紋圖譜發(fā)生了明顯變化，5種核苷類成分的總含量均降低，但一體化新工藝炮制品中總含量略高于《規(guī)范》炮制品。

關鍵詞 虎掌南星;指紋圖譜;含量測定;炮制工藝;核苷類成分;聚類分析

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish the fingerprint of raw products and different processed products of Pinellia pedatisecta， to determine the contents of 5 kinds of nucleosides， and to compare the differences of components between the raw products and processed products. METHODS： P. pedatisecta raw products， processed products by Processing Standard of Chinese Medicine in Henan Province （called “Standard processed product” for short） and processed products by new integrated processing technology in the production area （called “new integrated processed product” for short） were collected as investigation objects （12 batches of each）. The determination was performed on SymmetryShield RP18 column with mobile phase consisted of acetonitrile （A）-0.1% acetic acid aqueous water solution （B） （gradient elution） at the flow rate of 0.8 mL/min， with the column temperature of 30 ℃， the detection wavelength of 270 nm， and the injection volume of 15 ?L. HPLC fingerprints of 3 kinds of P. pedatisecta samples were established by using Similarity Evaluation System of TCM Chromatographic Fingerprints （2004 A version） ， and the similarity of fingerprints was evaluated. The chromatographic peaks were identified by comparing with the reference chromatogram. Five nucleosides （adenine， hypoxanthine， uridine， xanthine， inosine） were quantitatively analyzed. SPSS 21.0 software was used for cluster analysis of 36 batches of samples. RESULTS： The results of fingerprint and content determination met the relevant requirements. The similarity of 3 kinds of sample with their control fingerprint were all greater than 0.990. There were 22 common peaks in the raw products of P. pedatisecta， and 16 common peaks were identified in the 2 kinds of processed products （the same 6 peaks disappeared from 2 kinds of processed products）. Five components were identified in 3 kinds of samples， such as adenine （peak 3）， hypoxanthine （peak 7）， uridine （peak 8）， xanthine （peak 9） and inosine （peak 11）. Results of content determination showed that total contents of 5 kinds of nucleosides in 2 kinds of processed products were all decreased; the contents of them in descending order was raw product>new integrated processed products>Standard processed products. Results of cluster analysis showed that 36 batches of samples could be clustered into 2 categories， i.e. raw product was clustered into one category and 2 kinds of processed products into other one. CONCLUSIONS： Established method is stable， feasible and suitable for the quality evaluation of raw products and different processed products of P. pedatisecta. Fingerprints have changed significantly and the total content of 5 kinds of nucleosides in P. pedatisecta are all decreased after processing， but that of new integrated processed products is slightly higher than that of Standard processed products.

KEYWORDS? ?Pinellia pedatisecta; Fingerprint; Content determination; Processing technology; Nucleosides; Cluster analysis

虎掌南星系天南星科半夏屬植物掌葉半夏（Pinellia pedatisecta Schott）的干燥塊莖，具有燥濕化痰、祛風解痙、消痞散結的作用[1]，河南禹州、河北安國等地為其主要道地產(chǎn)地[2]?；⒄颇闲侵械闹饕瘜W成分包括生物堿類[3]、多糖類[4]、核苷類[5]、凝集素類[6-7]和氨基酸類[8]，具有祛痰[9]、抗衰老[10]、鎮(zhèn)靜[11]、鎮(zhèn)痛[12]、抗白血病[13]、抗腫瘤[14]等藥理作用，臨床上常用于治療冠心病、免疫疾病和多種癌癥。其中的核苷類成分屬于廣義的生物堿，在虎掌南星中含量較高且藥理作用明顯[15]?；⒄颇闲巧酚卸荆谥坪蟛粌H可降低其毒性、增強其祛痰作用，還可延長戊巴比妥鈉致小鼠睡眠的時間[16]，并且炮制后還具有促進凝血作用[17]。目前，2015年版《中國藥典》（一部）尚未收載此藥材或其炮制品，但在《河南省中藥飲片炮制規(guī)范》（2005年版）（以下簡稱“《規(guī)范》”）[18]中收載有制虎掌南星。按照《規(guī)范》中記載，制虎掌南星是以虎掌南星生品（鮮品經(jīng)除雜、去皮、洗凈、干燥等產(chǎn)地加工后所得）為原材料進行加工炮制，且在炮制過程中需多次用水浸泡，這可能會造成水溶性有效成分（如核苷類成分等）流失，從而影響其藥效。

目前，國內(nèi)有關制虎掌南星的報道多是由虎掌南星生品加工炮制而成，而由虎掌南星鮮品直接加工炮制的相關研究甚少，且未見不同炮制工藝對虎掌南星中核苷類成分含量影響的報道，炮制前后化學成分結構及含量的變化也未明確。本課題組前期建立了產(chǎn)地加工炮制一體化新工藝（以下簡稱“一體化新工藝”），該工藝則以虎掌南星鮮品為原材料直接進行炮制，減少了傳統(tǒng)炮制工藝中繁瑣的浸泡等水處理過程[19]。因中藥指紋圖譜是對中藥物質(zhì)群整體作用的反映，能夠成為中藥自身的“化學條形碼”，是一種綜合分析多種成分的有效手段，可為藥材的分類和飲片質(zhì)量提供參考[20]。因此，本研究在前期研究基礎上，進一步通過建立虎掌南星生品及不同工藝炮制品的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜，對其中5種共有的核苷類成分進行含量測定，并結合聚類分析，探究虎掌南星生品及不同炮制品之間的成分差異，為其炮制工藝的優(yōu)化提供參考。

1 材料

1.1 儀器

LC-20AD型HPLC儀（日本Shimadzu公司）;PS224S型萬分之一天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司）;YP10002型電子天平（上海衡際科學儀器有限公司）;GTR16-2型高速離心機（北京時代北利離心機有限公司）;KQ-500DV型數(shù)控超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）;DTC-22型隔膜真空泵（鞏義市英峽予華儀器廠）;UPT-Ⅱ-10T型優(yōu)普系列超純水器（成都超純科技有限公司）;HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海比朗儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

虎掌南星新鮮藥材購自河南華夏藥材有限公司（批號：20191017，產(chǎn)地：河南禹州），經(jīng)河南中醫(yī)藥大學藥學院生藥教研室陳隨清教授鑒定為天南星科半夏屬植物掌葉半夏（P. pedatisecta Schott）的新鮮塊莖;腺嘌呤對照品（批號：PS020156，純度：≥98%）、次黃嘌呤對照品（批號：PS020061，純度：≥98%）、尿苷對照品（批號：PS010290，純度：≥98%）、黃嘌呤對照品（批號：PS020191，純度：≥98%）、肌苷對照品（批號：PS010437，純度：≥98%）、尿嘧啶對照品（批號：PS020117，純度：≥98%）、鳥苷對照品（批號：PS020191，純度：≥98%）、腺苷對照品（批號：PS020195，純度：≥98%）、胸腺嘧啶對照品（批號：PS020196，純度：≥98%）均購自成都普思生物科技股份有限公司;乙酸、乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為雙蒸水。

2 方法與結果

2.1 虎掌南星生品及炮制品的制備

2.1.1 生品 取同一批虎掌南星鮮品12份，每份100 g，洗凈，去除外皮和須根，挖出芽點，曬干，用水潤透，切片，烘干，即為傳統(tǒng)加工生品（樣品編號為S1～S12）。

2.1.2 《規(guī)范》炮制品 取同一批虎掌南星生品12份（取鮮品，按“2.1.1”項下方法制備而得，下同），每份100 g。參照《規(guī)范》中虎掌南星項下炮制方法進行炮制[18]：用水浸泡，每日換水2～3次，泡至切開口嘗微有麻辣感時取出，再與搗碎的生姜（12 g）、白礬（12 g）同入鍋內(nèi)，加水適量煮至內(nèi)無白心，取出，晾至六成干，切薄片，干燥，即得（樣品編號為C1～C12）。

2.1.3 一體化新工藝炮制品 取同一批虎掌南星鮮品12份，每份100 g。按照前期建立的產(chǎn)地加工炮制一體化新工藝方法進行炮制[19]：先取白礬（12 g）、生姜（10 g）加水煮沸，然后趁熱加入虎掌南星鮮品，繼續(xù)煮沸60 min后，浸泡2 d，再以原汁加壓（加壓溫度為125 ℃）37 min，取出，清水洗凈，晾至七成干，切薄片，干燥，即得（樣品編號為Y1～Y12）。

2.2 虎掌南星不同炮制品指紋圖譜的研究

2.2.1 色譜條件 色譜柱：SymmetryShield RP18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相：乙腈（A）-0.1%乙酸水溶液（B），梯度洗脫（0～6 min，100%B;6～30 min，100%B→90%B;30～40 min，90%B→87%B;40～45 min，87%B→85%B;45～55 min，85%B→70%B;55～70 min，70%B→65%B;70～75 min，65%B→100%B）;流速：0.8 mL/min;柱溫：30 ℃;檢測波長：270 nm;進樣量：15 ?L。

2.2.2 供試品溶液的制備 分別取虎掌南星生品和炮制品粉末（過80目篩，下同）各約1 g，精密稱定，置于50 mL錐形瓶中，加水20 mL，稱定質(zhì)量，超聲（頻率：40 kHz，功率：500 W）45 min，放至室溫，用水補足減失的質(zhì)量，以5 000 r/min離心5 min，取上清液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 混合對照品溶液的制備 分別取各種對照品適量，置于同一量瓶中，精密稱定，加水溶解并制成含腺嘌呤0.025 g/L、次黃嘌呤0.042 g/L、尿苷0.034 g/L、黃嘌呤0.019 g/L、肌苷0.031 g/L、尿嘧啶0.041 g/L、鳥苷0.022 g/L、腺苷0.029 g/L、胸腺嘧啶0.018 g/L的混合對照品溶液。

2.2.4 精密度試驗 取虎掌南星樣品粉末（編號：Y1）約1 g，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，然后按“2.2.1”項下色譜條件進樣，連續(xù)測定6次，記錄色譜圖。以3號峰（腺嘌呤）為參照峰（該峰峰形較好，峰面積穩(wěn)定適中，且與相鄰峰的分離度良好）測得各共有峰相對保留時間的RSD為0.111%～0.712%、相對峰面積的RSD為1.173%～4.706%（n=6），表明該方法精密度良好。

2.2.5 重復性試驗 取虎掌南星樣品粉末（編號：Y1）約1 g，共6份，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，然后按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色圖譜。以3號峰（腺嘌呤）為參照峰測得各共有峰相對保留時間的RSD為0.093%～0.416%、相對峰面積的RSD為1.715%～3.855%（n=6），表明該方法重復性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗 取虎掌南星樣品粉末（編號：Y1）約1 g，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在室溫下放置0、2、4、6、8、10、12 h時，分別按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。以3號峰（腺嘌呤）為參照峰測得各共有峰相對保留時間的RSD為0.052%～0.851%、相對峰面積的RSD為0.777%～3.478%（n=6），表明樣品溶液在室溫條件下放置12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.7 虎掌南星指紋圖譜的建立及共有峰的指認 分別取虎掌南星生品和2種炮制品（各12批）約1 g，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，然后分別按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。將3種樣品的色譜數(shù)據(jù)分別導入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004A版）中，分別以樣品S1、C1、Y1的圖譜為參照圖譜，設置時間窗寬度為0.5 s，采用多點校正法進行色譜峰匹配，分別生成3種樣品的共有模式，并采用中位數(shù)法生成相應的對照指紋圖譜。此外，取“2.2.3”項下混合對照品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。通過對比樣品指紋圖譜和混合對照品圖譜中各峰的保留時間進行色譜峰指認。結果發(fā)現(xiàn)，2種炮制品的圖譜較為相似，而生品與前兩者的圖譜差異較大。其中，在生品的圖譜中共確定了22個共有峰，并指認出了9種核苷類成分，分別為腺嘌呤（3號峰）、尿嘧啶（4號峰）、次黃嘌呤（7號峰）、尿苷（8號峰）、黃嘌呤（9號峰）、肌苷（11號峰）、鳥苷（12號峰）、腺苷（13號峰）、胸腺嘧啶（15號峰）;但在《規(guī)范》炮制品和一體化新工藝炮制品中僅確定了16個共有峰（16個峰相同），均僅指認出了5種核苷類成分，分別為腺嘌呤（3號峰）、次黃嘌呤（7號峰）、尿苷（8號峰）、黃嘌呤（9號峰）、肌苷（11號峰）。虎掌南星生品及不同工藝炮制品的疊加指紋圖譜和對照指紋圖譜見圖1～圖3，混合對照品圖譜見圖4。

2.2.8 虎掌南星指紋圖譜的相似度分析 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004A版）軟件，分別以3種樣品的對照指紋圖譜為參照，進行對應炮制品的整體相似度評價，結果見表1。

表1結果顯示，3種樣品（各12批）與其各自對照指紋圖譜之間的相似度均大于0.990。這表明虎掌南星同一種樣品之間具有較高的相似性，提示其炮制程度及飲片質(zhì)量均一、穩(wěn)定。

2.3 不同樣品中5種核苷類成分含量的測定

2.3.1 色譜條件 同“2.2.1”項下色譜條件。

2.3.2 溶液的制備 （1）供試品溶液：按“2.2.2”項下方法制備。（2）混合對照品溶液：分別精密稱定腺嘌呤、次黃嘌呤、尿苷、黃嘌呤、肌苷對照品適量，置于同一10 mL量瓶中，加水溶解并定容至刻度，得到上述5種成分質(zhì)量濃度分別為2.193、1.282、0.964、1.608、1.909 mg/mL的混合對照品貯備液;分別精密量取該貯備液0.20、0.20、0.20、0.50、0.25 mL，置于不同10 mL量瓶中，加水稀釋并定容至刻度，得到混合對照品溶液①～⑤（分別用作腺嘌呤、次黃嘌呤、尿苷、黃嘌呤、肌苷線性關系考察的母液）。混合對照品溶液①中腺嘌呤質(zhì)量濃度為0.043 85 mg/mL，混合對照品溶液②中次黃嘌呤質(zhì)量濃度為0.025 64 mg/mL，混合對照品溶液③中尿苷質(zhì)量濃度為0.019 28 mg/mL，混合對照品溶液④中黃嘌呤質(zhì)量濃度為0.080 40 mg/mL，混合對照品溶液⑤中肌苷質(zhì)量濃度為0.047 72 mg/mL。（3）陰性對照溶液：以水為陰性對照。

2.3.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 取“2.3.2”項下混合對照品溶液②、供試品溶液（編號：Y1）和陰性對照溶液各適量，按“2.2.1”項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖。結果顯示，5種核苷類成分的色譜峰與其相鄰峰間的分離度均大于1.5，理論板數(shù)均不低于10 000，且陰性對照溶液對測定無干擾，詳見圖5。

2.3.4 線性關系考察 精密吸取“2.3.2”項下混合對照品溶液①～⑤適量，分別逐級稀釋1、2、10、20、30倍后，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。以對照品峰面積為縱坐標（y）、質(zhì)量濃度為橫坐標（x）繪制標準曲線，并計算回歸方程。結果顯示，腺嘌呤、次黃嘌呤、尿苷、黃嘌呤、肌苷分別在各自的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關系（r均不小于0.999 8），結果見表2。

2.3.5 定量限與檢測限考察 取“2.3.2（2）”項下混合對照品溶液②適量，加水倍比稀釋后，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分別計算定量限、檢測限。結果，腺嘌呤、次黃嘌呤、尿苷、黃嘌呤、肌苷的定量限分別為0.055、0.036、0.014、0.026、0.017 μg/mL，檢測限分別為0.016、0.011、0.003、0.008、0.005 μg/mL。

2.3.6 精密度試驗 取“2.3.2（2）”項下混合對照品溶液②，按“2.2.1”項下色譜條件連續(xù)測定6次，記錄峰面積。結果，腺嘌呤、次黃嘌呤、尿苷、黃嘌呤、肌苷峰面積的RSD分別為1.19%、1.16%、1.73%、1.85%、1.56%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.7 重復性試驗 取同一批虎掌南星樣品粉末（編號：Y1）6份，每份約1 g，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，然后按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并根據(jù)標準曲線計算各成分的含量。結果，腺嘌呤、次黃嘌呤、尿苷、黃嘌呤、肌苷含量的RSD分別為2.19%、1.49%、2.44%、0.76%、1.92%（n=6），表明該方法重復性良好。

2.3.8 穩(wěn)定性試驗 取同一批虎掌南星樣品粉末（編號：Y1）約1 g，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別在室溫下放置0、2、4、6、8、10、12 h時，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，腺嘌呤、次黃嘌呤、尿苷、黃嘌呤、肌苷峰面積的RSD分別為0.89%、1.57%、1.36%、1.52%、1.47%（n=7），表明樣品溶液在室溫條件下放置12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.9 加樣回收率試驗 取已知含量的虎掌南星樣品粉末（編號：Y1）6份，每份約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入5種對照品適量，按“2.2.2”項下方法制成供試品溶液后，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，腺嘌呤、次黃嘌呤、尿苷、黃嘌呤、肌苷的平均加樣回收率分別為100.49%、99.50%、101.13%、102.05%、99.35%，RSD分別為2.34%、1.19%、2.65%、1.64%、0.79%（n=6），表明該方法準確度較好，結果見表3。

2.3.10 耐用性試驗 取虎掌南星樣品粉末（編號：S1）適量，按“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，在“2.2.1”項下其他色譜條件不變的情況下，分別在不同濃度流動相B（0.08%、0.10%、0.12%乙酸水溶液）、不同流速（0.7、0.8、0.9 mL/min）、不同柱溫（25、30、35 ℃）條件下進樣測定，記錄峰面積，并根據(jù)標準曲線計算樣品中5種核苷類成分的含量。結果，在不同條件下測得的5種核苷類成分含量的RSD均小于3%（n=3），表明該方法耐用性良好，能滿足含量測定的要求。

2.3.11 樣品含量測定 分別取虎掌南星生品和2種不同炮制品（各12批）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，然后按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并根據(jù)標準曲線計算樣品中5種核苷類成分的含量。每批樣品測定3次，取平均值，結果見表4。

表4結果顯示，生品中黃嘌呤的含量最高，平均含量為0.922 5 mg/g;《規(guī)范》炮制品和一體化新工藝炮制品中黃嘌呤的平均含量分別為0.042 5、0.065 3 mg/g?！兑?guī)范》炮制品和一體化新工藝炮制品中，肌苷的平均含量分別為0.468 8、0.518 6 mg/g，約為生品的13倍;而腺嘌呤、尿苷、黃嘌呤的含量較生品明顯降低。一體化新工藝炮制品中，腺嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤、肌苷的含量均比《規(guī)范》炮制品略高，而尿苷的含量差異很小。

2.4 虎掌南星不同工藝樣品的聚類分析

以虎掌南星樣品中腺嘌呤、次黃嘌呤、尿苷、黃嘌呤、肌苷的含量為原始數(shù)據(jù)，運用 SPSS 21.0軟件中的質(zhì)心聚類法，以歐式距離為度量標準區(qū)間，對36批虎掌南星樣品進行聚類分析，結果見圖6。

由圖6可知，36批虎掌南星樣品共聚為2類：虎掌南星生品聚為一類;2種炮制品聚為另一類。以上結果提示，虎掌南星生品與不同炮制品之間的核苷類成含量存在差異，也提示2種工藝所炮制的飲片質(zhì)量較接近。

3 討論

據(jù)文獻報道，虎掌南星水提物中富含核苷類成分，而核苷類成分可參與DNA代謝過程，具有抗腫瘤、抗病毒、抗心律失常等多種生物活性，是生物細胞維持生命活動的基本組成元素[15]，其含量的升高或降低對于糖代謝、酶活性改變、受損肝臟的恢復有顯著影響[21]。目前，虎掌南星多采用水浸泡加熱的方式炮制，而核苷類為水溶性成分，且性質(zhì)不穩(wěn)定，在炮制過程中易發(fā)生水解[22]。筆者通過前期預試驗發(fā)現(xiàn)，加熱溫度、加熱時間和浸泡天數(shù)是影響水溶性成分含量的主要因素。由本研究結果中不同樣品的色譜圖也可知，虎掌南星中核苷類成分的色譜峰出峰時間多集中于前15 min，此時水相的比例較大，且生品中該時段的色譜峰多而高，而炮制品中該時段色譜峰峰面積減小甚至部分峰消失。這提示虎掌南星炮制后的化學成分不僅發(fā)生了量的改變，同時其種類也發(fā)生了顯著的變化。對比生品和不同炮制品的色譜圖，發(fā)現(xiàn)炮制品中除肌苷的含量有大幅度升高外，腺嘌呤、尿苷、黃嘌呤的含量均明顯降低，且尿嘧啶、鳥苷、腺苷和胸腺嘧啶在炮制后幾乎檢測不到。針對此現(xiàn)象，筆者推測可能有以下兩個方面的原因：一方面可能與煎煮時間及煎煮方式有關;另一方面可能是由于白礬溶液呈酸性，而核苷呈堿性，炮制過程中兩者發(fā)生了化學反應。此外，由于傳統(tǒng)工藝是由生品加水浸泡至內(nèi)無干心后與輔料常壓煮沸，在反復換水浸泡的過程中，溶于水的核苷類成分會隨之流失。而本課題組建立的一體化新工藝是將藥材鮮品直接進行加壓蒸煮，避免了藥材重復換水處理的過程，最大程度地減少了有效成分的流失，故而采用該法炮制的樣品中核苷類成分的總含量比《規(guī)范》炮制品高。與生品比較，不同工藝炮制品中肌苷的含量有明顯升高的趨勢，這可能是加熱過程中發(fā)生了降解或形成了新的聚合物引起的。

聚類分析結果顯示，虎掌南星生品與不同工藝炮制品中核苷類成分有顯著差異，可將兩者有效區(qū)分開，說明生品在炮制過程中成分發(fā)生了顯著變化。將2種炮制品HPLC指紋圖譜進行對比分析發(fā)現(xiàn)，兩者相似度較高，表明2種不同工藝虎掌南星制品的質(zhì)量總體差異不明顯。但是結合核苷類成分的含量來看，一體化新工藝炮制品比《規(guī)范》炮制品中核苷類成分含量略高，并且前者不僅縮短了炮制時間，減少了干燥次數(shù)，同時降低了資源消耗成本，穩(wěn)定了飲片質(zhì)量，更加適用于虎掌南星的炮制以及產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展需求。

綜上所述，本研究建立的方法穩(wěn)定、可行，可用于虎掌南星生品及不同炮制品的質(zhì)量評價?；⒄颇闲墙?jīng)炮制后指紋圖譜發(fā)生了明顯變化，5種核苷類成分的總含量均降低，但一體化新工藝炮制品中上述成分總含量略高于《規(guī)范》炮制品。然而，本研究僅通過指紋圖譜和聚類分析的方法比較了虎掌南星生品及不同炮制品成分的不同，關于炮制前后其化學成分具體發(fā)生了何種轉變，以及是否產(chǎn)生了新的藥理活性等問題還有待進一步研究。

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（收稿日期：2020-03-13 修回日期：2020-05-20）

（編輯：林 靜）