白芍總苷聯(lián)合順鉑對胃癌模型大鼠的腫瘤抑制及腎損傷的改善作用

胡波 徐穎 朱琰琰

摘 要 目的：研究白芍總苷聯(lián)合順鉑對胃癌模型大鼠的腫瘤抑制及對順鉑致腎損傷的改善作用。方法：將75只大鼠分為對照組（生理鹽水，灌胃）、模型組（生理鹽水，灌胃）、順鉑組（25 mg/kg，腹腔注射）、白芍總苷組（200 mg/kg，灌胃）、白芍總苷+順鉑組（灌胃200 mg/kg白芍總苷+腹腔注射25 mg/kg順鉑），每組15只。除對照組外，其余各組大鼠皮下接種胃癌BGC823細(xì)胞懸液復(fù)制胃癌模型。造模完成后，大鼠腹腔注射/灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥28 d。測定大鼠瘤質(zhì)量并計算腫瘤抑制率;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠腫瘤組織細(xì)胞凋亡率;采用Western blotting法檢測大鼠腫瘤組織中B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)的X蛋白（Bax）水平;采用酶聯(lián)免疫吸附法或生化分析儀測定大鼠尿液中白細(xì)胞介素18（IL-18）和腎損傷分子1（KIM-1）水平，血清中尿素氮（BUN）和血肌酐（Scr）水平，以及腎組織中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）水平;采用蘇木精-伊紅染色法檢測大鼠腎組織的病理學(xué)變化。結(jié)果：與對照組比較，模型組、白芍總苷組、白芍總苷+順鉑組大鼠尿液中IL-18、KIM-1水平，血清中BUN、Scr水平以及腎組織中SOD、MDA、GSH水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;腎組織未見明顯病理變化。與模型組比較，順鉑組大鼠瘤質(zhì)量顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高，瘤組織中Bax蛋白表達(dá)水平顯著升高、Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.05）;尿液中IL-18、KIM-1水平，血清中BUN、Scr水平以及腎組織中MDA水平均顯著升高（P<0.05）;腎組織中SOD、GSH水平顯著降低（P<0.05）;腎組織出現(xiàn)腎小管擴張，并形成基底層上皮細(xì)胞空泡及腎小管內(nèi)鑄。與順鉑組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠瘤質(zhì)量顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高，瘤組織中Bax水平顯著升高、Bcl-2水平顯著降低（P<0.05）;尿液中IL-18、KIM-1水平，血清中BUN、Scr水平以及腎組織中MDA水平均顯著降低（P<0.05）;腎組織中SOD、GSH水平顯著升高;腎組織無腎小管擴張，偶見基底層上皮細(xì)胞空泡形成，少見腎小管內(nèi)鑄形成。與白芍總苷組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠瘤質(zhì)量顯著降低，腫瘤抑制率顯著升高，細(xì)胞凋亡率顯著升高，瘤組織中Bax水平顯著升高、Bcl-2水平顯著降低（P<0.05）;尿液中IL-18、KIM-1水平，血清中BUN、Scr水平以及腎組織中SOD、MDA、GSH水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;腎組織偶見少量炎癥細(xì)胞浸潤。結(jié)論：白芍總苷聯(lián)合順鉑能抑制胃癌大鼠腫瘤增長，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，并可改善順鉑引起的腎功能損傷。

關(guān)鍵詞 白芍總苷;順鉑;胃癌;腫瘤抑制;腎損傷;大鼠

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study the improvement effects of total glucosides of Paeonia lactiflora （TGPL） combined with cisplatin on tumor inhibition and renal injury in gastric cancer model rats. METHODS： Totally 75 rats were divided into control group （normal saline， i.g.）， model group （normal saline， i.g.）， cisplatin group （25 mg/kg， i.p.）， TGPL group （200 mg/kg， i.g.）， TGPL+cisplatin group （200 mg/kg TGPL， i.g.+25 mg/kg cisplatin， i.p.）， with 15 rats in each group. Except for control group， gastric cancer rat models were established in other groups by subcutaneous inoculation of gastric cancer BGC823 cell suspension. After modeling， they were given relevant medicine intraperitoneally/intragastrically， for consecutive 28 d. The tumor weight and tumor inhibition rate were measured. The apoptosis rate in tumor tissue was detected by flow cytometry; Western blotting assay was used to detect the levels of Bcl-2 and Bax in tumor tissue; ELISA or biochemical analyzer were used to determine the levels of IL-18 and KIM-1 in urine， BUN and Scr in serum， as well as SOD， MDA and GSH in renal tissue; histopathological changes of renal tissue in rats were detected by HE staining. RESULTS： Compared with control group， there was no statistical significance in the levels of IL-18 and KIM-1 in urine， serum levels of BUN and Scr， the levels of SOD， MDA and GSH in renal tissue of model group （P>0.05）; no obvious histopathological change was found in renal tissue. Compared with model group， tumor weight in cisplatin group was decreased significantly， while cell apoptosis was increased significantly， while expression level of Bax in tumor tissue was increased significantly， the expression level of Bcl-2 was decreased significantly （P<0.05）; the levels of IL-18 and KIM-1 in urine， BUN and Scr in serum and MDA in kidney were increased significantly （P<0.05）; the levels of SOD and GSH in renal tissue were decreased significantly （P<0.05）; renal tubules were dilated， vacuoles of epithelial cells in basal layer and cast in renal tubules formed. Compared with cisplatin， tumor weight in TGPL+cisplatin group was decreased significantly， while apoptotic rate was increased significantly， while the level of Bax was increased significantly， expression level of Bcl-2 was decreased significantly （P<0.05）; the levels of IL-18 and KIM-1 in urine， BUN and Scr in serum and MDA in renal tissue were significantly reduced （P<0.05）; the levels of SOD and GSH in renal tissue were increased significantly （P<0.05）; there was no tubule dilation， but vacuoles were occasionally found in basal epithelial cells， and the cast formation in renal tubules was rare. Compared with TGPL group， tumor weight in TGPL+cisplatin group was significantly reduced， the tumor inhibition rate was significantly increased， the apoptosis rate was significantly increased， while the expression level of Bax in tumor tissue was increased significantly， expression level of Bcl-2 was decreased significantly （P<0.05）; there was no statistical significance in the levels of IL-18 and KIM-1 in urine， the levels of BUN and Scr in serum， the levels of SOD， MDA and GSH in renal tissue （P>0.05）; a small amount of inflammatory cells infiltrated occasionally in renal tissue. CONCLUSIONS： TGPL combined with cisplatin can inhibit tumor growth， promote tumor cell apoptosis and improve renal injury induced by cisplatin.

KEYWORDS? ?Total glucosides of Paeonia lactiflora; Cisplatin; Gastric cancer; Tumor inhibition; Renal injury; Rat

胃癌是常見的惡性腫瘤之一，具有惡性程度高、低分化、進(jìn)展快、預(yù)后差等特點，目前其常用治療手段為化療[1]。順鉑是常用化療藥物，但在臨床使用過程中表現(xiàn)出明顯的腎損傷副作用[1-2]。白芍總苷來源于傳統(tǒng)中藥材白芍的干燥根，具有抗炎、免疫抑制、抗腫瘤等多種藥理作用，相關(guān)研究表明，白芍總苷能夠顯著抑制胃癌BGC-823細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡[3];同時，白芍總苷對慶大霉素、阿霉素等藥物引起的腎損傷均有明顯的改善作用[4-5]。但目前對于白芍總苷是否可改善順鉑所導(dǎo)致的腎損傷尚無文獻(xiàn)報道?；诖耍P者先建立大鼠胃癌模型，然后研究白芍總苷聯(lián)合順鉑對模型大鼠的腫瘤抑制作用，并分析白芍總苷對順鉑所導(dǎo)致的大鼠腎損傷的改善作用，以期為胃癌的臨床治療提供參考。

1 材料

1.1 儀器

ECLIPSETS100-F型倒置顯微鏡（日本Nikon公司）;MRZ14M010型高速冷凍離心機（美國Beckman公司）;SpectraMax190型多功能酶標(biāo)儀（上海美谷分子儀器有限公司）;ChemiDoc XRS型凝膠成像儀（美國Bio-Rad公司）;BX50/BX-FLA/DP70型光學(xué)/熒光顯微鏡（日本Olympus公司）;Attune NxT型流式細(xì)胞儀[賽默飛世爾科技（中國）有限公司];DYY-7C型轉(zhuǎn)印電泳儀（北京六一生物科技有限公司）;Herocell 180型CO2培養(yǎng)箱（美國Thermo Fisher Scientific公司）;Leica TP1020型自動組織脫水機（成都天威醫(yī)療設(shè)備有限公司）。

1.2 藥品與試劑

順鉑注射液（杭州民生藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號：20190523，規(guī)格：6 mL ∶ 30 mg）;阿糖胞苷注射液（輝瑞制藥有限公司，批號：20190611，規(guī)格：10 mL ∶ 0.5 g）;白芍總苷（寧波立華制藥有限公司，批號：20190528）;大鼠尿素氮（BUN）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測試劑盒（上海晶抗生物工程有限公司，批號：JK-bio-15074）;大鼠肌酐（Scr）ELISA檢測試劑盒（上海谷研實業(yè)有限公司，批號：GOY-E6418）;Annexin Ⅴ-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、碘化丙啶（PI）試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，批號分別為：1062L、ST512）;超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）ELISA檢測試劑盒（上海聯(lián)邁生物工程有限公司，批號分別為：20190508、20190822、20180327）;腎損傷分子1（KIM-1）、白細(xì)胞介素18（IL-18）檢測試劑盒（武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司，批號分別為：20180628、20180819）;兔源B淋巴細(xì)胞瘤2基因（Bcl-2）多克隆抗體（批號：60178-1-Ig）、兔源Bcl-2相關(guān)的X蛋白（Bax）單克隆抗體（批號：60267-1-Ig）、兔源甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）單克隆抗體（批號：60004-1-Ig）均購自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司;辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（批號：A0239）、TUNEL凋亡檢測試劑盒（批號：C1098）、RIPA蛋白裂解液（批號：P0013B）均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;ECL顯色液[賽默飛世爾科技（中國）有限公司，批號：2019111903];其他試劑均為實驗室常用試劑，水為純凈水。

1.3 動物

清潔級成年雄性SD大鼠，6周齡，體質(zhì)量（180±20） g，購自遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（遼）2015-0001。動物在溫度（22±2） ℃、濕度（50±10）%的條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實驗。

1.4 細(xì)胞

骨癌細(xì)胞BGC823購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。

2 方法

2.1 造模、分組與給藥

參照文獻(xiàn)方法[6-7]，將胃癌BGC823細(xì)胞加入含10%胎牛血清的RPMI1640 培養(yǎng)基（以下簡稱“培養(yǎng)基”），置于 37 ℃、5% CO2恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，定期更換新鮮培養(yǎng)基，待細(xì)胞處于對數(shù)生長期時，收集細(xì)胞，調(diào)整成密度為5×106個/mL的細(xì)胞懸液，備用。

取75只大鼠分為對照組、模型組、順鉑組、白芍總苷組、白芍總苷+順鉑組，每組15只。除對照組大鼠于腹部皮下注射生理鹽水外，其余各組大鼠于腹部皮下注射阿糖胞苷（200 mg/kg），48 h后對大鼠進(jìn)行60Co全身照射（劑量為10 Gy/只），照射后第2天于大鼠內(nèi)側(cè)近腹股溝處皮下接種上述BGC823細(xì)胞懸液（0.8 mL/只），建立大鼠胃癌模型[6-7]。每天觀察記錄大鼠的生理和精神情況，若皮下出現(xiàn)米粒大小質(zhì)硬結(jié)節(jié)則視為模型建立成功。造模成功后，順鉑組大鼠腹腔注射順鉑（25 mg/kg，劑量參考相關(guān)文獻(xiàn)[8]設(shè)置），每7 d給藥1次，共給藥5次;白芍總苷組大鼠灌胃白芍總苷（200 mg/kg，劑量參考相關(guān)文獻(xiàn)[9]設(shè)置，臨用時用水溶解），每天給藥1次，連續(xù)給藥28 d;白芍總苷+順鉑組大鼠腹腔注射順鉑并灌胃白芍總苷，給藥劑量和時間同單藥組;對照組及模型組大鼠灌胃等量生理鹽水，連續(xù)給藥28 d。

2.2 取材

末次給藥后，收集各組大鼠24 h尿液;尿液采集結(jié)束后，對大鼠腹腔注射10%水合氯醛進(jìn)行麻醉，腹主動脈取血至離心管中，于4 ℃靜置4 h后，在4 ℃條件下以3 500 r/min離心10 min，取上層血清;血清采集結(jié)束后，將大鼠頸椎脫臼處死，在無菌條件下迅速分離腫瘤組織（對照組大鼠未發(fā)現(xiàn)腫瘤）和腎組織。

2.3 各組大鼠瘤質(zhì)量及腫瘤抑制率測定

取“2.2”項下分離的各組大鼠腫瘤組織適量，用4 ℃預(yù)冷的生理鹽水洗去腫瘤組織表面血液，再用濾紙吸干表面水分，稱質(zhì)量，并計算腫瘤抑制率[腫瘤抑制率（%）=（模型組大鼠瘤質(zhì)量-給藥組大鼠瘤質(zhì)量）/模型組大鼠瘤質(zhì)量×100%]。

2.4 各組大鼠腫瘤組織的細(xì)胞凋亡率檢測

采用流式細(xì)胞術(shù)檢測。取“2.2”項下分離的大鼠腫瘤組織（每組分別取5份）適量，在無菌條件下用D-Hanks液沖洗3次后，制成約1 mm3的小塊，用吸管吸取數(shù)小塊腫瘤組織，均勻排列在培養(yǎng)皿上，置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7h，使其貼壁;取出培養(yǎng)皿后，加入培養(yǎng)基4 mL，再按上述條件繼續(xù)培養(yǎng);每隔24 h更換1次培養(yǎng)基，待細(xì)胞長出后，棄去組織塊，繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞融合度達(dá)90%;用胰蛋白酶消化細(xì)胞，進(jìn)行3次傳代培養(yǎng)[10]。取傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞，用胰蛋白酶消化，以1 000 r/min離心5 min，棄上清，加入適量培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，以2 000 r/min離心5 min，棄上清液，然后加入Annexin Ⅴ-FITC結(jié)合液200 μL混勻，室溫避光孵育15 min，再加入PI染液10 μL，混勻，室溫避光孵育10～20 min，然后采用流式細(xì)胞儀檢測腫瘤細(xì)胞凋亡率。

2.5 各組大鼠腫瘤組織中Bax、Bcl-2水平檢測

采用Western blotting法檢測。取“2.2”項下分離的大鼠腫瘤組織（每組分別取5份）適量，放入玻璃勻漿器，加入RIPA蛋白裂解液裂解，于4 ℃條件下以12 000 r/min離心10 min后，采用BCA法測定上清液中的蛋白濃度，并進(jìn)行變性處理。取變性后的蛋白樣品進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺電泳（SDS-PAGE）分離，轉(zhuǎn)膜;加入封閉液室溫封閉1 h后，加入Bax、Bcl-2、GAPDH抗體（稀釋度均為1 ∶ 1 000），4 ℃孵育過夜;以PBST清洗3次，加入二抗（稀釋度為1 ∶ 2 000），室溫孵育1 h，以PBST清洗3次，加入ECL顯色液顯影，利用凝膠成像儀成像、Image J 1.4.8軟件進(jìn)行灰度分析，以目的蛋白與內(nèi)參蛋白條帶的灰度值比值表示目的蛋白的表達(dá)水平。

2.6 各組大鼠尿液中IL-18、KIM-1水平檢測

取“2.2”項下收集的大鼠尿液（每組分別取5份）適量，采用IL-18、KIM-1檢測試劑盒，按照說明書方法檢測尿液中IL-18、KIM-1水平。

2.7 各組大鼠血清中BUN、Scr水平檢測

取“2.2”項下分離的大鼠血清（每組分別取5份）適量，利用全自動生化分析儀檢測血清中BUN、Scr水平。

2.8 各組大鼠腎組織中SOD、MDA、GSH水平檢測

取“2.2”項下分離的大鼠腎組織（每組分別取5份）適量，用4 ℃預(yù)冷的生理鹽水洗去表面血液，濾紙吸干表面水分，按照ELISA試劑盒說明書檢測腎組織中SOD、MDA、GSH水平。

2.9 各組大鼠腎組織病理學(xué)觀察

取“2.2”項下分離的大鼠腎組織（每組分別取5份）適量，在10%中性甲醛中固定24 h后，轉(zhuǎn)移至75%乙醇中，經(jīng)自動組織脫水機脫水、透明處理，在石蠟包埋機中浸蠟、包埋、切片（5 μm）、水浴展開、撈片、瀝干，于恒溫箱中烘干2 h后，進(jìn)行常規(guī)蘇木精-伊紅（HE）染色，并于顯微鏡下進(jìn)行腎組織病理學(xué)觀察。

2.10 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計量資料以x±s表示，組間比較采用單因素方差分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠的瘤質(zhì)量及腫瘤抑制率測定結(jié)果

與模型組比較，順鉑組、白芍總苷組、白芍總苷+順鉑組大鼠瘤質(zhì)量均顯著降低（P<0.05）;與順鉑組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠瘤質(zhì)量均顯著降低，腫瘤抑制率顯著升高（P<0.05）;與白芍總苷組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠瘤質(zhì)量顯著降低，腫瘤抑制率顯著升高（P<0.05）。這提示白芍總苷聯(lián)合順鉑能抑制胃癌模型大鼠腫瘤的增長，且抑制作用顯著優(yōu)于單用順鉑或白芍總苷。各組大鼠的瘤質(zhì)量及腫瘤抑制率測定結(jié)果見表1。

3.2 各組大鼠腫瘤細(xì)胞凋亡率測定結(jié)果

與模型組比較，順鉑組、白芍總苷組、白芍總苷+順鉑組大鼠腫瘤細(xì)胞凋亡率均顯著升高（P<0.05）;與順鉑組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠腫瘤細(xì)胞凋亡率顯著升高（P<0.05）;與白芍總苷組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠腫瘤細(xì)胞凋亡率顯著升高（P<0.05）。這提示白芍總苷聯(lián)合順鉑能促進(jìn)胃癌模型大鼠腫瘤細(xì)胞的凋亡，且效果顯著優(yōu)于單用順鉑或白芍總苷。各組大鼠腫瘤細(xì)胞凋亡的散點圖見圖1，細(xì)胞凋亡率測定結(jié)果見表2。

3.3 各組大鼠腫瘤組織中Bax、Bcl-2水平測定結(jié)果

與模型組比較，順鉑組、白芍總苷組、白芍總苷+順鉑組大鼠腫瘤組織中Bax蛋白表達(dá)水平均顯著升高，Bcl-2蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P<0.05）;與順鉑組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠腫瘤組織中Bax蛋白表達(dá)水平顯著升高，Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.05）;與白芍總苷組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠腫瘤組織中Bax蛋白表達(dá)水平顯著升高，Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.05）。這提示白芍總苷聯(lián)合順鉑能促進(jìn)胃癌模型大鼠腫瘤組織中促凋亡蛋白的表達(dá)，抑制抗凋亡蛋白的表達(dá)，且效果顯著優(yōu)于單用順鉑或白芍總苷。各組大鼠腫瘤組織中Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平測定結(jié)果見表3。

3.4 各組大鼠尿液中IL-18、KIM-1水平測定結(jié)果

與對照組比較，模型組、白芍總苷組、白芍總苷+順鉑組大鼠尿液中IL-18、KIM-1水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），順鉑組大鼠尿液中IL-18、KIM-1水平均顯著升高（P<0.05）;與模型組比較，順鉑組大鼠尿液中IL-18、KIM-1水平均顯著升高（P<0.05）。與順鉑組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠尿液中IL-18、KIM-1水平均顯著降低（P<0.05）;與白芍總苷組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠尿液中IL-18、KIM-1水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。這提示白芍總苷聯(lián)合順鉑能減輕胃癌模型大鼠單用順鉑后引起的腎組織損傷。各組大鼠尿液中IL-18、KIM-1水平測定結(jié)果見表4。

3.5 各組大鼠血清中BUN、Scr水平測定結(jié)果

與對照組比較，模型組、白芍總苷組、白芍總苷+順鉑組大鼠血清中BUN、Scr水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義 （P>0.05），順鉑組大鼠血清中BUN、Scr水平均顯著升高（P<0.05）;與模型組比較，順鉑組大鼠血清中BUN、Scr水平均顯著升高（P<0.05）;與順鉑組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠血清中BUN、Scr水平均顯著降低（P<0.05）;與白芍總苷組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠血清中BUN、Scr水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義 （P>0.05）。這提示白芍總苷聯(lián)合順鉑能減輕胃癌模型大鼠單用順鉑引起的腎功能損傷。各組大鼠血清中BUN、Scr水平測定結(jié)果見表5。

3.6 各組大鼠腎組織中SOD、MDA、GSH水平測定結(jié)果

與對照組比較，模型組、白芍總苷組、白芍總苷+順鉑組大鼠腎組織中SOD、MDA、GSH水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;順鉑組大鼠腎組織中SOD、GSH水平均顯著降低，MDA水平顯著升高（P<0.05）。與順鉑組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠腎組織中SOD、GSH水平均顯著升高，MDA水平均顯著降低（P<0.05）。與白芍總苷組比較，白芍總苷+順鉑組大鼠腎組織中SOD、GSH水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。這提示白芍總苷聯(lián)合順鉑能減輕胃癌模型大鼠單用順鉑后引起的腎組織氧化應(yīng)激損傷。各組大鼠腎組織中SOD、MDA、GSH水平測定結(jié)果見表6。

3.7 各組大鼠腎組織病理學(xué)變化觀察結(jié)果

對照組、模型組和白芍總苷組大鼠腎組織未見明顯病理學(xué)變化。順鉑組大鼠腎組織可見腎小管擴張、基底層上皮細(xì)胞空泡形成及腎小管內(nèi)鑄形成。白芍總苷+順鉑組大鼠腎組織無腎小管擴張，偶見空泡形成，少見腎小管內(nèi)鑄形成。這提示白芍總苷聯(lián)合順鉑能改善單用順鉑引起的腎小管空泡樣病變及腎小管內(nèi)鑄形成，明顯改善大鼠腎組織的病理學(xué)變化。各組大鼠腎組織病理學(xué)觀察結(jié)果見圖2。

4 討論

胃癌是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國各種惡性腫瘤中發(fā)病率居首位，其發(fā)病機制與年齡、性別、地域飲食、幽門螺旋桿菌感染、癌前病變、遺傳因素等相關(guān)[1-2]。目前臨床上胃癌的治療主要采用化療、靶向治療、支持治療等手段，但這些治療手段均存在預(yù)后不良、復(fù)發(fā)率高、有效率低等缺點[2]?；熓桥R床上最常用的胃癌治療方法，而順鉑是目前治療胃癌最常用的化療藥物之一，但其具有肝腎毒性，且易產(chǎn)生耐藥，其中腎損傷是其常見的不良反應(yīng)[1-2]。

白芍總苷是白芍的主要活性成分，具有抗炎、免疫抑制、抗腫瘤、保護(hù)血管及神經(jīng)修復(fù)等多種藥理作用[3-5]。鮑舒潔等[3]研究表明，白芍總苷能劑量依賴性地誘導(dǎo)胃癌BGC-823細(xì)胞的凋亡，調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。金生源等[11]研究發(fā)現(xiàn)，白芍總苷對慢性腎小球腎炎具有一定的緩解作用。鄒曉榮等[12]研究發(fā)現(xiàn)，白芍總苷對慢性糖尿病腎病也表現(xiàn)出很好的治療效果。安娜等[13]研究發(fā)現(xiàn)，白芍總苷能夠改善柔紅霉素腎病大鼠血清肌酐、尿素氮水平，并改善大鼠腎組織病理學(xué)變化。詹可順等[14]研究發(fā)現(xiàn)，白芍總苷聯(lián)合長春瑞濱、順鉑等化療藥物治療非小細(xì)胞肺癌，可提高患者生存質(zhì)量、改善患者細(xì)胞免疫功能和升高外周血象。由此推測，白芍總苷可能具有改善順鉑所致腎損傷的作用。

Bax為促凋亡相關(guān)基因，Bcl-2為抗凋亡基因，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)Bax蛋白水平升高及Bcl-2蛋白水平降低時，可激活細(xì)胞凋亡基因，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡程序的啟動[15]。尿液中IL-18、KIM-1水平是反映腎功能的間接指標(biāo)，血清中BUN、Scr水平是反映腎功能的直接指標(biāo)[16]，當(dāng)IL-18、KIM-1、BUN及Scr水平升高時，表明腎組織細(xì)胞損傷及腎功能下降。另外，SOD、MDA、GSH水平是反映組織細(xì)胞氧化應(yīng)激狀態(tài)的重要指標(biāo)[17]，當(dāng)SOD、GSH水平下降及MDA水平升高時，可反映腎組織細(xì)胞處于氧化應(yīng)激損傷狀態(tài)。

本課題組研究發(fā)現(xiàn)，白芍總苷聯(lián)合順鉑可顯著降低胃癌模型大鼠瘤質(zhì)量和腫瘤組織中Bcl-2蛋白表達(dá)水平，顯著升高腫瘤抑制率、腫瘤細(xì)胞凋亡率及腫瘤組織中Bax蛋白表達(dá)水平，且效果優(yōu)于單用順鉑或白芍總苷。與對照組比較，模型組和白芍總苷組大鼠尿液中IL-18、KIM-1水平，血清中BUN、Scr水平，以及腎組織中SOD、MDA、GSH水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，表明本實驗造模方法和白芍總苷均未引起大鼠腎損傷;但是使用順鉑后，大鼠尿液中IL-18、KIM-1水平，血清中BUN、Scr水平，腎組織中MDA水平均顯著升高，腎組織中SOD、GSH水平均顯著降低，表明單用順鉑對大鼠存在明顯的腎損傷;但當(dāng)聯(lián)合白芍總苷使用后，上述指標(biāo)均得到明顯改善。病理觀察結(jié)果也顯示，當(dāng)單用順鉑時大鼠腎組織可見腎小管擴張等損傷表現(xiàn)，但當(dāng)聯(lián)合白芍總苷使用后，大鼠腎組織無腎小管擴張，腎損傷明顯改善。

綜上所述，白芍總苷聯(lián)合順鉑能抑制胃癌大鼠腫瘤增長，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，并可改善順鉑引起的腎損傷。

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（收稿日期：2020-02-20 修回日期：2020-04-13）

（編輯：唐曉蓮）