費(fèi)休氏法水分測(cè)定的獸藥檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證

戴青，楊秀玉，趙暉，王軒，韓寧寧

(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

水分是獸用藥品檢驗(yàn)中常見的檢測(cè)項(xiàng)目，在藥品檢測(cè)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行水分測(cè)定的水平可以客觀地、較有代表性地反映出該實(shí)驗(yàn)室的藥品檢測(cè)能力。目前，費(fèi)休氏法是測(cè)定藥物和液體化學(xué)試劑中水分含量最常用的方法[1-2]。藥品中水分測(cè)定的影響因素較多，需要較高的技術(shù)能力[3]。

能力驗(yàn)證是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證體系中的一個(gè)重要組成部分[4]。參加能力驗(yàn)證活動(dòng)是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平，鍛煉人員技術(shù)能力，促進(jìn)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可和國(guó)際交流的重要手段[5-6]。在檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室的國(guó)家認(rèn)可制度中對(duì)實(shí)驗(yàn)室參加能力驗(yàn)證并取得滿意結(jié)果提出了明確要求[7]。本次研究通過組織費(fèi)休氏法水分測(cè)定的能力驗(yàn)證計(jì)劃可以使參加實(shí)驗(yàn)室識(shí)別實(shí)驗(yàn)室間存在的差異，促進(jìn)實(shí)驗(yàn)室共同提高水平。本研究對(duì)中國(guó)50家獸藥檢測(cè)機(jī)構(gòu)的水分測(cè)定能力進(jìn)行測(cè)試，其中省級(jí)獸藥檢測(cè)機(jī)構(gòu)29家，第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)3家，獸藥企業(yè)18家，研究水分測(cè)定能力驗(yàn)證的樣品制備、均勻性與穩(wěn)定性、結(jié)果統(tǒng)計(jì)、能力評(píng)價(jià)等情況，并對(duì)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行討論。

1 材料與方法

1.1 材料 卡氏水分儀(701KF 型， 瑞士萬通公司)；費(fèi)休氏試液(分析純，F(xiàn)luka公司)；無水甲醇(分析純，Honeywell公司)；液體水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(來源/標(biāo)準(zhǔn)值/批號(hào)：中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院/1.000%/201801)。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備 經(jīng)調(diào)研，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院的液體水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是由高純度有機(jī)試劑(包括丁醇和二甲苯等)加入去離子水制成的混合溶液[8]。丁醇和二甲苯沸點(diǎn)均高于100 ℃，性質(zhì)穩(wěn)定，不易揮發(fā)，向其中再定量添加去離子水，配制成本次能力驗(yàn)證的樣品，即可有效保證樣品的均一穩(wěn)定。因此，購(gòu)買了同一批次的液體水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，將去離子水定量添加至上述溶液中，混合均勻，在25±2 ℃、相對(duì)濕度≤50%的環(huán)境下分裝至棕色安瓿，即制得本次能力驗(yàn)證樣品。采用上述方法配制兩批能力驗(yàn)證樣品，其水分值分別為2.41%(低濃度)和3.62%(高濃度)(其水分值為通過計(jì)算精密稱定加入的去離子水重量和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)重量而得的理論計(jì)算值)。提供給各參加單位樣品A和樣品B各一支(每支裝量均約為1.5 mL)，采用棕色安瓿包裝。

1.2.2 樣品均勻性和穩(wěn)定性考察 從兩組能力驗(yàn)證樣品中各隨機(jī)抽取10支進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)，每支測(cè)定兩次。為考察樣品的穩(wěn)定性，在正式制備本次能力驗(yàn)證的樣品前，配制兩份小試樣品(計(jì)算理論值分別為2.57%和3.52%)各10支，分別用于考察樣品在高濕環(huán)境和高溫環(huán)境下的穩(wěn)定性。為考察開封后的樣品對(duì)高濕環(huán)境的耐受性，將小試樣品(計(jì)算理論值為2.57%)開封后，放置于實(shí)驗(yàn)室允許的最大濕度(相對(duì)濕度70%)條件下，分別放置10 min、30 min、60 min后測(cè)定。為考察樣品對(duì)運(yùn)輸過程中高溫的耐受性，將小試樣品(計(jì)算理論值為3.52%)放置于可能接觸到的最高溫度(40 ℃)下，分別放置3 d、5 d、7 d后測(cè)定。

1.2.3 評(píng)定方法及標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)CNAS-GL002《能力驗(yàn)證結(jié)果的統(tǒng)計(jì)處理和能力評(píng)價(jià)指南》要求，采用穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)法計(jì)算各參加實(shí)驗(yàn)室的Z值[9]。本次能力驗(yàn)證的樣品為將去離子水定量添加至液體水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中配制而得，具有理論計(jì)算值，為保證指定值具有更小的不確定度，將該理論計(jì)算值作為指定值(X)。采用標(biāo)準(zhǔn)化四分位距(NIQR)作為變動(dòng)性度量值(目標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)偏差)。將各實(shí)驗(yàn)室報(bào)告的兩種樣品的各兩次測(cè)定結(jié)果計(jì)算平均值作為實(shí)驗(yàn)室測(cè)試結(jié)果(x)，根據(jù)以下公式計(jì)算實(shí)驗(yàn)室Z比分?jǐn)?shù)。

Z=(x-X)/NIQR

以Z比分?jǐn)?shù)評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)室結(jié)果，即：若同一實(shí)驗(yàn)室兩份樣品的Z比分?jǐn)?shù)均滿足|Z|≤2，檢測(cè)結(jié)果為滿意結(jié)果；若同一實(shí)驗(yàn)室兩份樣品的Z比分?jǐn)?shù)有1個(gè)或兩個(gè)滿足2<|Z|<3，檢測(cè)結(jié)果為有問題；若同一實(shí)驗(yàn)室兩份樣品的Z比分?jǐn)?shù)有1個(gè)或兩個(gè)滿足|Z|≥3，檢測(cè)結(jié)果為不滿意結(jié)果或離群值。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品均勻性結(jié)果 采用單因子方差分析法計(jì)算統(tǒng)計(jì)量F值(表1)，兩種樣品的F值均小于給定顯著性水平α=0.05時(shí)的臨界值F0.05(9,10)，表明兩種樣品的均勻性均符合要求。

表1 能力驗(yàn)證樣品均勻性考察結(jié)果表Tab 1 Results of homogeneity test of proficiency testing samples

2.2 樣品穩(wěn)定性結(jié)果 采用單一樣本t檢驗(yàn)的方法對(duì)測(cè)定結(jié)果的平均值與計(jì)算理論值(2.57%)進(jìn)行比較(表2-表5)，結(jié)果顯示t值小于查表值，二者無顯著性差異，表明樣品對(duì)高溫和高濕環(huán)境耐受性良好。

表2 小試樣品高濕環(huán)境耐受性測(cè)定結(jié)果Tab 2 Results of high humidity environmental tolerance test of small samples

表3 小試樣品高濕環(huán)境測(cè)定結(jié)果的單一樣本t檢驗(yàn)Tab 3 t-test for determination results of high humidity environment of small samples

表4 小試樣品高溫環(huán)境耐受性測(cè)定結(jié)果Tab 4 Results of high temperature environmental tolerance test of small samples

表5 小試樣品高溫環(huán)境測(cè)定結(jié)果的單一樣本t檢驗(yàn)Tab 5 t-test for determination results of high temperature environment of small samples

2.3 能力驗(yàn)證結(jié)果 以實(shí)驗(yàn)室Z比分?jǐn)?shù)柱狀圖表示各參加實(shí)驗(yàn)室Z值(圖1-圖2)。在Z比分?jǐn)?shù)的統(tǒng)計(jì)中，有39家的結(jié)果為滿意，有4家的結(jié)果有問題，7家的結(jié)果為不滿意或離群值，各占總數(shù)的78.0%、8.0%、14.0%。

對(duì)參加能力驗(yàn)證的省級(jí)獸藥檢測(cè)機(jī)構(gòu)、獸藥企業(yè)及第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)的結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比(圖3)，發(fā)現(xiàn)省級(jí)獸藥檢測(cè)機(jī)構(gòu)的滿意率(93.1%)高于獸藥企業(yè)(61.1%)。這表明省級(jí)獸藥檢測(cè)機(jī)構(gòu)整體具有較高水平的檢測(cè)能力，同時(shí)應(yīng)注意加強(qiáng)對(duì)企業(yè)進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目的培訓(xùn)與指導(dǎo)。

圖1 低濃度組(2.41%)各實(shí)驗(yàn)室Z比分?jǐn)?shù)分布圖Fig 1 Distribution of Z-score of laboratories in 2.41% sample groups

圖2 高濃度組(3.62%)各實(shí)驗(yàn)室Z比分?jǐn)?shù)分布圖Fig 2 Distribution of Z-score of laboratories in 3.62% sample groups

圖3 各檢測(cè)機(jī)構(gòu)滿意率對(duì)比Fig 3 Comparisons of satisfaction rates among testing institutions

3 討論與結(jié)論

《中國(guó)獸藥典》一部附錄0832第一法A規(guī)定[10]：精密稱定純化水后用水分測(cè)定儀進(jìn)行標(biāo)定，標(biāo)定過程應(yīng)精密稱取純化水10 mg～30 mg。水分標(biāo)定所得F值的相對(duì)平均偏差越小，表明儀器狀態(tài)越穩(wěn)定[11]。實(shí)驗(yàn)室在日常檢驗(yàn)過程中應(yīng)對(duì)水分標(biāo)定這一關(guān)鍵步驟加強(qiáng)重視。藥典凡例中明確規(guī)定：“精密稱定”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。由此可推算而得：精密稱取純化水的操作應(yīng)使用感量為十萬分之一的天平，即讀數(shù)至0.01 mg。有16家實(shí)驗(yàn)室使用了感量為萬分之一的天平，未達(dá)到精密稱定的要求，有3家實(shí)驗(yàn)室未按照作業(yè)指導(dǎo)書要求操作，稱取水分重量小于10 mg。上述兩種操作均會(huì)導(dǎo)致純化水取樣量不準(zhǔn)確，從而使測(cè)定結(jié)果的不準(zhǔn)確性增大[12]。

費(fèi)休氏試液滴定度太低或太高對(duì)滴定的準(zhǔn)確性也有一定的影響[13]。當(dāng)?shù)味ǘ容^低時(shí)，需要消耗大量的滴定液，使滴定時(shí)間延長(zhǎng)，在滴定過程中也可能更多地引入空氣中的水分，從而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性；滴定度太高有可能使消耗的滴定液過少，滴定體積的微量變化就可能影響結(jié)果，造成偏差。

本研究首次對(duì)中國(guó)50家獸藥檢測(cè)機(jī)構(gòu)的水分測(cè)定能力進(jìn)行了測(cè)試，為了能更真實(shí)、更全面地反映出各單位的實(shí)際檢測(cè)能力，本次能力驗(yàn)證采用當(dāng)前國(guó)際上主要實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可機(jī)構(gòu)最常用的實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)能力驗(yàn)證方法——分割水平檢測(cè)樣品進(jìn)行，既能客觀地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)誤差，也能客觀地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室隨機(jī)誤差，更有利于分析查找結(jié)果異常產(chǎn)生的原因。通過穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)法計(jì)算各參加實(shí)驗(yàn)室的Z值，測(cè)試結(jié)果的滿意率為78.0%，表明國(guó)內(nèi)大部分獸藥檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室具備水分檢測(cè)能力，并客觀地反映出各參加實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)水平，推動(dòng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)室管理水平等方面的進(jìn)一步提高，對(duì)促進(jìn)行業(yè)檢驗(yàn)檢測(cè)工作高質(zhì)量發(fā)展具有重要意義。