綿馬貫眾藥材的快速多信息薄層鑒別方法研究

趙麗麗，繆雪榮，蘭新財，安麗娜

(浙江金大康動物保健品有限公司，浙江金華 301016)

綿馬貫眾為中國藥典歷版所收載品種，為鱗毛蕨科植物粗莖鱗毛蕨的干燥根莖和葉柄殘基，具有清熱解毒、驅(qū)蟲之功效。現(xiàn)代研究表明：綿馬貫眾還具有抗腸蟲[1]、抗菌、抗病毒[2]、抗腫瘤[3]、抗生育[4]、止血等作用，臨床常用于蟲積腹痛和瘡瘍[5]。其主要成分包括綿馬酸類、黃綿馬酸類、綿馬三萜、鞣質(zhì)等，其中綿馬酸類化合物為間苯三酚或二元間苯三酚的衍生物，從結(jié)構(gòu)分析既有脂溶性又有中極性、水溶性成分。目前，綿馬貫眾藥材收載于中國藥典2015年版一部，其薄層鑒別方法繁瑣、費時，需要特制的薄層板，薄層操作步驟限制條件多，顯色劑極少應(yīng)用，在薄層鑒別的普及應(yīng)用方面受到了很大限制，普及檢測率降低，耗時3 h多，不利于簡便、快捷、多信息的質(zhì)量監(jiān)督。

本文對綿馬貫眾藥材進行了專題多信息快速薄層鑒別研究，以期為綿馬貫眾藥材及其不同工藝制備的復(fù)方制劑提供簡便、快捷、低成本、高效率的多信息鑒別方法。

1 儀器、藥品與試劑

1.1 儀器 ZF-1型三用紫外分析儀，上海寶山顧村電光儀器廠；YQ-520型超聲波清洗器，上海易凈超聲波儀器有限公司；AB135-S系列天平，梅特勒托利多儀器有限公司；DHG-9070型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海精宏實驗設(shè)備有限公司。

1.2 藥品及試劑 綿馬貫眾藥材由浙江金大康動物保健品有限公司提供；綿馬貫眾對照藥材(批號：121034-200302)購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇、三氯甲烷、乙酸乙酯等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液配制 對照藥材溶液的制備：取綿馬貫眾對照藥材0.2 g，研細，加甲醇2 mL，超聲處理20 min，上清液作為對照藥材溶液。供試品溶液的制備：取綿馬貫眾藥材0.2 g，研細，加甲醇2 mL，超聲處理20 min，上清液作為供試品溶液。

2.2 綿馬貫眾藥材脂溶性成分薄層鑒別(1) 吸取供試品溶液和對照藥材溶液各6 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-濃氨試液(10 ∶1 ∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365 nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光主斑點(圖1A)；再噴以10 %硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈365 nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光主斑點(圖1B)；再置暗室內(nèi)透過燈光檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(圖1C)。

A:365 nm下薄層色譜圖；B:顯色后365 nm下薄層色譜圖；C:顯色后燈光下薄層色譜圖；1:綿馬貫眾對照藥材；2-6:綿馬貫眾藥材 A:the TLC under 365 nm；B:the colour reaction of TLC under 365 nm；C:the colour reaction of TLC under daylight lamp 1:the reference of Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizome；2-6:Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizome圖1 綿馬貫眾藥材脂溶性成分(1)薄層色譜圖Fig 1 The TLC on liposoluble component of Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizome

2.3 綿馬貫眾藥材脂溶性成分薄層鑒別(2) 吸取2.1項下的供試品溶液和對照藥材溶液各6 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(12 ∶2 ∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254 nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色主斑點(圖2A)；再噴以10 %硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈365 nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光主斑點(圖2B)；再置暗室內(nèi)透過燈光檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(圖2C)。

A:254 nm下薄層色譜圖；B:顯色后365 nm下薄層色譜圖；C:顯色后燈光下薄層色譜圖；1:綿馬貫眾對照藥材；2-5:綿馬貫眾藥材 A:the TLC under 365 nm；B:the colour reaction of TLC under 365 nm；C:the colour reaction of TLC under daylight lamp 1:the reference of Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizome；2-5:Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizome圖2 綿馬貫眾藥材脂溶性成分(2)薄層色譜圖Fig 2 The TLC on liposoluble component of Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizome

2.4 綿馬貫眾藥材中極性成分的薄層鑒別 吸取2.1項下的供試品溶液和對照藥材溶液各6 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(4 ∶2 ∶4 ∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254 nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色主斑點(圖3A)；再噴以10 %硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈365 nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光主斑點(圖3B)；再置暗室內(nèi)透過燈光檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(圖3C)。

A: 254 nm下薄層色譜圖；B: 顯色后365 nm下薄層色譜圖；C: 顯色后燈光下薄層色譜圖；1.綿馬貫眾對照藥材；2～5.綿馬貫眾藥材 A: the TLC under 365 nm；B: the colour reaction of TLC under 365 nm；C: the colour reaction of TLC under daylight lamp 1. the reference of Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizome；2-5 Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizome圖3 綿馬貫眾藥材中極性成分薄層色譜圖Fig 3 The TLC on intermediate polar component of Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizome

2.5 綿馬貫眾藥材水溶性成分的薄層鑒別 吸取2.1項下的供試品溶液和對照藥材溶液各6 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(1 ∶2 ∶4 ∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365 nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同熒光主斑點(圖4A)；再噴以10 %硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(圖4B)。

A:365 nm下薄層色譜圖；B:顯色后燈光下薄層色譜圖 1:綿馬貫眾對照藥材；2-5:綿馬貫眾藥材 A:the TLC under 365 nm；B:the colour reaction of TLC under daylight lamp；1:the reference of Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizome; 2-5: Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizome圖4 綿馬貫眾藥材水溶性成分薄層色譜圖Fig 4 The TLC on water-soluble component of Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizome

3 討論與結(jié)論

本文通過對70%甲醇、甲醇和乙酸乙酯作為提取溶劑時各薄層圖譜進行比較，發(fā)現(xiàn)當用甲醇作提取溶劑時，對綿馬貫眾藥材中脂溶性成分和水溶性成分均有較好的溶解效果，排除水溶性薄層背景干擾的同時獲得了清晰的薄層色譜圖。

本方法克服了《中國藥典》中綿馬貫眾藥材薄層鑒別方法需要特制薄層板，且制備薄層板、展開和檢視時間過長、斑點擴散、集聚性差等問題，建立了只需藥材和對照藥材各0.2 g、提取溶劑4 mL、展開劑40 mL，整個過程時間不足1 h，操作簡單的多信息薄層鑒別方法。

本文建立的綿馬貫眾藥材薄層鑒別方法，大大提高了檢測效率，節(jié)省了檢測時間，降低了檢測成本，同時減少了環(huán)境污染。多個信息斑點的獲得，為快速鑒別綿馬貫眾藥材的真?zhèn)翁峁┝藬?shù)據(jù)支撐，為有效控制綿馬貫眾藥材質(zhì)量提供了依據(jù)。