母犬發(fā)情周期臨床外觀及陰道內(nèi)部形態(tài)變化規(guī)律的研究

熊 前，王春亮，余 盼，吳 衍，李川武

（1.公安部 南昌警犬基地，南昌 330100；2.江西省警犬良種繁育與行為科學(xué)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南昌 330100）

母犬性成熟后，其行為、卵巢、生殖道等會(huì)發(fā)生諸多生理變化，并表現(xiàn)出周期性的變化規(guī)律，即發(fā)情周期。根據(jù)母犬的發(fā)情征候和行為特點(diǎn)，發(fā)情周期一般分為發(fā)情前期（持續(xù)時(shí)間為5～20 d，平均9 d）、發(fā)情期（持續(xù)時(shí)間為5～15 d，平均9 d）、發(fā)情后期（持續(xù)時(shí)間為45～70 d，平均60 d）、休情期（持續(xù)時(shí)間為80～240 d，平均150 d）。犬發(fā)情周期不同階段主要生殖激素水平不同，受生殖激素作用的影響，其陰道上皮細(xì)胞、陰道黏膜及外陰部特征均會(huì)產(chǎn)生變化，并呈現(xiàn)一定的變化規(guī)律［1］。可以通過母犬陰道臨床外觀及陰道內(nèi)部形態(tài)觀察對(duì)發(fā)情階段進(jìn)行有效判斷。試驗(yàn)通過對(duì)母犬不同發(fā)情階段陰道外觀及內(nèi)部形態(tài)進(jìn)行觀察，探討母犬發(fā)情周期規(guī)律性變化，以準(zhǔn)確判斷犬發(fā)情周期的不同階段，為確定母犬最適交配期及提高配種母犬受胎率和窩產(chǎn)仔數(shù)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

3～5歲德國(guó)牧羊犬6頭，公安部南昌警犬基地2019年11月份發(fā)情并經(jīng)同期發(fā)情的健康母犬。犬只嚴(yán)格按照《公安部警犬繁育工作規(guī)則》《警犬飼養(yǎng)管理操作規(guī)程》等要求統(tǒng)一開展飼養(yǎng)管理及疾病防治［2］。

1.2 試驗(yàn)器材

犬用TCI內(nèi)窺鏡系統(tǒng)，購(gòu)自寧波智光機(jī)電科技有限公司；EOS7D相機(jī)，佳能（中國(guó)）公司；Beckman AccessTM全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)，購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司；開膣器、無添加劑一次性使用真空采血管、醫(yī)用棉簽、醫(yī)用超薄乳膠手套等。以上器材由江西省警犬良種繁育與行為科學(xué)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3 測(cè)定項(xiàng)目

1.3.1 臨床外觀觀察 自母犬外陰部出現(xiàn)血樣分泌物開始，每天由飼養(yǎng)員牽犬并使其背向下成半直立狀態(tài)，試驗(yàn)人員用溫濕毛巾對(duì)母犬外陰部周圍進(jìn)行清潔，一只手托住母犬臀部，用拇指和食指將陰門分開，觸摸陰唇，判斷外陰腫脹及陰唇柔軟程度；用食指和拇指將陰門張開，暴露陰道腹側(cè)壁，觀察陰道內(nèi)壁顏色、毛細(xì)血管充血程度，以及陰門分泌物的量、黏稠度及顏色；觸摸外陰部，觀察尾根的偏移情況，同時(shí)由試驗(yàn)助手對(duì)外陰部進(jìn)行拍照。

1.3.2 陰道內(nèi)部形態(tài)觀察 由飼養(yǎng)員牽犬保定，用開膣器將母犬陰門分開，用TCI內(nèi)窺鏡系統(tǒng)探頭與水平方向呈約60°角插入陰道，再水平插入陰道深處，直達(dá)子宮頸口。通過圖像傳感器獲取陰道內(nèi)壁褶皺、黏膜顏色、光滑度及子宮頸口等內(nèi)部形態(tài)圖像。

1.3.3 生殖激素的測(cè)定 以母犬外陰部開始出現(xiàn)血樣分泌物作為第1天，早晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集前肢內(nèi)側(cè)靜脈血5 mL，在37℃水浴鍋內(nèi)靜置20 min，3 600 r／min離心10 min，收集血清，并將其分為兩份，一份用于檢測(cè)雌二醇激素（E2）濃度，另一份于－20℃低溫保存。E2采用Beckman AccessTM全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)，具體操作步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床外觀觀察結(jié)果

通過發(fā)情母犬外陰部拍照（結(jié)果見圖1）進(jìn)行觀察可知，發(fā)情前期母犬外陰部腫脹明顯，觸摸陰唇發(fā)硬，排出血樣分泌物顏色較深，外陰內(nèi)壁充血，觸摸尾根無明顯偏尾現(xiàn)象。進(jìn)入發(fā)情期后，母犬外陰部腫脹程度達(dá)到最大，陰唇柔軟，出現(xiàn)皺橫現(xiàn)象，分泌物顏色逐漸變?yōu)榈S色。將外陰暴露，內(nèi)壁泛白發(fā)亮，尾根出現(xiàn)偏尾現(xiàn)象。此時(shí)采用試情法，母犬愿意接受交配。而進(jìn)入發(fā)情后期，母犬外陰部逐步收縮，陰唇變?nèi)彳?，皺紋變得明顯，外陰偶見少量黑褐色分泌物排出。休情期母犬外陰完全收縮，無充血、腫脹，陰道內(nèi)也無分泌物排出。

2.2 陰道內(nèi)部形態(tài)觀察結(jié)果

見圖2。

母犬陰道內(nèi)部形態(tài)觀察結(jié)果表明，發(fā)情前期母犬陰道內(nèi)壁有圓形褶皺，褶皺黏膜水腫，表面光滑但無光澤，呈粉紅色，子宮頸口微張，有明顯血樣分泌物排出。進(jìn)入發(fā)情期后，陰道內(nèi)壁圓形褶皺萎縮變小，褶皺頂部形成尖銳角度，褶皺黏膜水腫，表面光滑，有強(qiáng)光澤和滑潤(rùn)感，呈粉紅色；子宮頸口松弛、開張，分泌物顏色變淡，為淡黃色。而進(jìn)入發(fā)情后期，陰道褶皺為扁平、不光滑狀態(tài)，黏膜呈紅色，色澤變淡，子宮頸口開始閉合，偶見無色、黏稠分泌物排出。休情期母犬陰道內(nèi)壁褶皺呈不光滑的平扁狀態(tài)，無光澤，子宮頸口閉合，無分泌物排出。

2.3 生殖激素檢測(cè)結(jié)果

見圖3。

由圖3可以看出：發(fā)情期間E2濃度呈上升趨勢(shì)，從剛開始的較低水平（53.63±11.75）pmol／L增加到最高峰值（220.42±15.35）pmol／L，此時(shí)為第9天；之后迅速下降，直到第14天后降至儀器可檢測(cè)的最低臨界值（18.35 pmol／L）。

3 分析與討論

1）犬生殖激素主要包括E2、孕酮（P4）和促黃體素（LH），變化較復(fù)雜，但仍有一定的規(guī)律性，可為犬的繁殖計(jì)劃提供理論參考。P.N.Olson等［3］、王新蕾等［4］的研究表明，E2是母犬發(fā)情周期分泌的重要生殖激素，其變化伴隨母犬發(fā)情的臨床癥狀（陰道壁、外陰的腫脹及血性分泌物的發(fā)生）。P.W.Concannon等［5］研究發(fā)現(xiàn)，E2在母犬發(fā)情前期會(huì)持續(xù)升高，由18.35～36.70 pmol／L升高到最高值（165.15～440.40 pmol／L），其峰值一般出現(xiàn)在LH峰值前的1～3 d，即在LH脈沖式波動(dòng)出現(xiàn)前的0.5～2.0 d。本試驗(yàn)結(jié)果也表明，母犬發(fā)情前期E2濃度在第9天達(dá)到峰值，其后迅速下降至儀器可檢測(cè)的最低臨界值；母犬E2濃度變化伴隨外陰部及陰道內(nèi)部結(jié)構(gòu)均發(fā)生一定的變化，E2濃度變化規(guī)律與前人研究結(jié)果基本一致，但個(gè)體之間存在較大差異。因此對(duì)母犬的生殖激素進(jìn)行監(jiān)測(cè)，可為提高無明顯發(fā)情癥狀母犬的發(fā)情鑒定準(zhǔn)確率提供參考。

2）正常母犬在進(jìn)入發(fā)情前期時(shí)，E2濃度上升導(dǎo)致母犬外陰漸腫脹、變大，并伴有血樣分泌物排出。分泌物組成包括由子宮中滲出的完整或溶解的紅細(xì)胞漿液及血紅蛋白［6］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，母犬發(fā)情前期陰道外部充血、腫脹，陰唇逐漸增大、變硬；進(jìn)入發(fā)情期后外陰腫脹程度達(dá)到最大，陰唇變軟；到發(fā)情后期外陰腫脹逐漸消退，陰唇仍然柔軟，皺紋現(xiàn)象明顯；直到休情期外陰完全收縮、無腫脹。外陰流出的分泌物顏色由發(fā)情前期暗紅色逐漸變淺，進(jìn)入發(fā)情期逐漸變?yōu)榈S色，甚至明亮無色，發(fā)情后期、休情期基本無分泌物排出。分泌物的量在發(fā)情前期先增多后減少，進(jìn)入發(fā)情期繼續(xù)逐漸減少，直到發(fā)情后期、休情期基本無分泌物流出。這與范泉水等［7］的研究結(jié)果基本一致，說明德國(guó)牧羊犬品種與其他品種在發(fā)情周期中的臨床癥狀一致，發(fā)情周期中不同階段具有不同的臨床癥狀特征變化，可以根據(jù)這些變化規(guī)律來判斷母犬所處的發(fā)情階段。

3）本試驗(yàn)通過內(nèi)窺鏡系統(tǒng)對(duì)母犬陰道內(nèi)部形態(tài)進(jìn)行觀察，揭示了不同發(fā)情階段陰道內(nèi)部形態(tài)的變化規(guī)律，為犬的人工授精及陰道檢查提供了有效依據(jù)。研究表明，母犬生殖激素的變化與行為及生理活動(dòng)之間存在一定的關(guān)系［8］，但對(duì)生殖道內(nèi)部形態(tài)的變化機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

4）在實(shí)際工作中，母犬發(fā)情鑒定更多的是依據(jù)外陰部的變化來判斷；生殖激素檢測(cè)和陰道內(nèi)部形態(tài)觀察法主要用于輔助發(fā)情鑒定。由于品種和個(gè)體差異較大，特別對(duì)于發(fā)情異常或外陰部觀察難以準(zhǔn)確判斷的犬，采取與生殖激素檢測(cè)及陰道內(nèi)部形態(tài)觀察法相結(jié)合的方法進(jìn)行綜合判斷具有很好的效果。