氧化三甲胺通過(guò)促進(jìn)成年小鼠心肌細(xì)胞T小管重構(gòu)加重心力衰竭

靳 步，紀(jì)方方，左安俊，劉薈婷，祁 琳，何 韻，王慶堯，趙 鵬△

（1青島大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，山東青島266000；2青島大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，山東青島266071；3山東省青島療養(yǎng)院，山東青島266071；4青島大學(xué)附屬醫(yī)院普外科，山東青島266000）

心力衰竭（heart failure，HF；簡(jiǎn)稱心衰）是導(dǎo)致心血管疾病患者死亡的主要原因，絕大部分的心血管疾病最終都會(huì)導(dǎo)致心衰[1-2]，因此心衰病理機(jī)制的研究對(duì)發(fā)現(xiàn)新的臨床診療方法具有重要意義。

近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，腸道微生物群參與了許多疾病的發(fā)病過(guò)程，如肥胖、糖尿病、胃腸疾病、癌癥、心血管疾?。òㄐ乃ィ┑萚3-4]。目前的心衰腸道假說(shuō)認(rèn)為，心衰可導(dǎo)致細(xì)菌移位，增加全身循環(huán)中細(xì)菌的產(chǎn)生，增加炎癥狀態(tài)，從而導(dǎo)致心衰的進(jìn)一步發(fā)展。氧化三甲胺（trimethylamineN-oxide，TMAO）是由腸道微生物群的代謝產(chǎn)物，腸道微生物群組成的改變會(huì)導(dǎo)致TMAO水平升高，產(chǎn)生循環(huán)內(nèi)毒素，進(jìn)而發(fā)展為心衰[5-7]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，在心衰小鼠的心肌細(xì)胞中，微管蛋白（tubulin）上調(diào)、T小管重構(gòu)是一個(gè)重要和常見的現(xiàn)象[8]。微管是由α-和β-微管蛋白二聚體聚合而成的普遍存在的細(xì)胞骨架纖維，而TMAO能夠促進(jìn)微管蛋白聚合[9]，微管聚合可導(dǎo)致連接蛋白家族成員的親聯(lián)蛋白2（junctophilin-2，JPH2）再分布，從而導(dǎo)致心臟T小管與肌質(zhì)網(wǎng)的錯(cuò)位，造成心肌收縮功能減退[10]。在一項(xiàng)有1 020名受試者的研究中，通過(guò)心臟導(dǎo)管檢查發(fā)現(xiàn)在進(jìn)行了冠狀動(dòng)脈疾病血管造影的患者中，TMAO循環(huán)水平顯著升高[11]。此外，在另外一組正在進(jìn)行心導(dǎo)管檢查的受試者中（n=4 007），TMAO水平升高獨(dú)立地預(yù)測(cè)了不良心血管結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)，如心臟病發(fā)作、中風(fēng)和死亡風(fēng)險(xiǎn)[7]。在心衰患者中，TMAO血漿水平升高（n=720），升高的TMAO水平與5年死亡風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)[4]。

目前，腸道微生物群失調(diào)在心衰發(fā)生發(fā)展中的作用有待進(jìn)一步研究，我們推測(cè)TMAO的升高可能導(dǎo)致T小管重構(gòu)和Ca2+處理紊亂，從而損害心臟收縮功能。本研究探討TMAO對(duì)成年小鼠心室肌細(xì)胞微管蛋白和T小管結(jié)構(gòu)的影響，為腸道菌群紊亂在心功能下降及心力衰竭中的作用機(jī)制提供參考資料。

材料和方法

1 成年小鼠心室肌細(xì)胞分離培養(yǎng)

SPF級(jí)C57BL/6小鼠，雄性，2～3月齡，體重25～35 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)為SCXK（魯）2019-0003。小鼠腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉（100 mg/kg），使用Langendorff法心臟灌流[0.5 g/L的2型膠原酶（Worthington）和0.08 g/L的XVI型蛋白酶（Sigma-Aldrich）]12 min到15 min；實(shí)驗(yàn)采用≥75%Ca2+耐受桿狀肌細(xì)胞。在含1.0 mmol/L Ca2+的臺(tái)氏液[其組成（mmol/L）：137 NaCl，5.4 KCl，10葡萄糖，10 HEPES，0.33 NaH2PO4，1 Mg-Cl2；用氫氧化鈉將pH值調(diào)整至7.35～7.45]中處理10 min，細(xì)胞在含有基本培養(yǎng)液（MEM）與10%胎牛血清的經(jīng)層粘連蛋白（10 mg/L）預(yù)處理的T25瓶中培養(yǎng)[12]。將細(xì)胞置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 2 h，后將培養(yǎng)液改為不含血清的MEM，培養(yǎng)24 h。

2 細(xì)胞處理

細(xì)胞經(jīng)不含血清的MEM培養(yǎng)24 h后，再將細(xì)胞分別置于含有0.3、1、3和 10 μmol/L TMAO（Sigma-Aldrich）的條件下培養(yǎng)24 h，分析TMAO對(duì)心肌細(xì)胞T小管的影響，并選擇一個(gè)合適的濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

3 方法

3.1 T小管成像與分析 采用Di-8-ANEPPS（10 μmol/L；AAT BioQuest）在無(wú)鈣臺(tái)氏液中室溫染色30 min。用LSM 510型共聚焦顯微鏡（Carl Zeiss MicroImaging Inc.）的63倍透鏡觀察T小管結(jié)構(gòu)。采用IDL圖像分析程序?qū)小管完整性進(jìn)行定量分析，使用AutoTT軟件分析T小管功率（T-tubule power，TTpower）的強(qiáng)弱來(lái)反映T小管組織的規(guī)整性[9]。

3.2 Western blot 心肌細(xì)胞用冷PBS沖洗3次，懸浮于裂解液[其組成（mmol/L）：50 Tris-HCl（pH 7.4），150 NaCl，10 NaF，1釩酸鈉，5 EGTA，5 EDTA；還有0.2%Triton X-100，0.5%脫氧膽酸鈉，0.1%SDS]中。將裂解液13 000×g、4℃離心15 min，上清液作為全細(xì)胞蛋白保存。采用BCA法（Pierce）測(cè)定蛋白濃度。全細(xì)胞蛋白樣品在10%的雙三聚體凝膠上電泳。電泳后將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜（Millipore），并在 4℃條件下使用 JPH2（1∶1 000；Santa Cruz）、calpain I（1∶5 000；Cell Signaling Technology）和 GAPDH（1∶5 000；Sigma-Aldrich）的 I抗過(guò)夜。PBS洗滌3次后，用辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的II抗（在PBS溶液中1∶50 000～1∶10 000稀釋）繼續(xù)孵育。免疫反應(yīng)采用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒（Pierce）和LAS-3000科學(xué)成像系統(tǒng)（FujiFilm）進(jìn)行可視化。使用NIH ImageJ 1.43d軟件對(duì)條帶進(jìn)行量化。

3.3 游離和聚合微管蛋白的測(cè)定 使用微管/微管蛋白體內(nèi)檢測(cè)試劑盒（Cytoskeleton Inc.）檢測(cè)游離和聚合的微管蛋白。在細(xì)胞裂解和微管穩(wěn)定緩沖液（含 5 mmol/L MgCl2、1 mmol/L EGTA、0.1 mmol/L GTP、1 mmol/L ATP、100 mmol/L PIPES、30% 甘油、0.1%壬酸酯-p40、0.1%Triton X-100、0.1%吐溫-20、0.1%β-巰基乙醇、0.001%抗泡劑和0.2%蛋白酶抑制劑，pH 7.4）中均質(zhì)化細(xì)胞。勻漿通過(guò)離心機(jī)（37℃、100 000×g離心30 min）產(chǎn)生浮層包含自有的微管蛋白和聚合顆粒微觀沉淀，用200 μmol/L氯化鈣對(duì)聚合微管顆粒進(jìn)行重懸。

3.4 心肌細(xì)胞免疫熒光染色 分離的心肌細(xì)胞在4%多聚甲醛中37℃固定15 min，用PBS沖洗3次，每次10 min，然后在含有0.3%Triton-X 100的PBS中滲透30 min。在室溫下1%BSA封閉30 min后，β-tubulin抗體（1∶100；Sigma）和JPH2抗體（1∶50；Santa Cruz）4℃條件下孵育過(guò)夜。I抗孵育過(guò)后，與熒光標(biāo)記的II抗在室溫下孵育2 h。用63倍透鏡共聚焦顯微鏡觀察。用ImageJ 1.43d軟件定量微管密度，用IDL圖像分析程序分析JPH2結(jié)構(gòu)（JPH2 power）。

3.5 共聚焦Ca2+成像 將心肌細(xì)胞置于含有5 μmol/L Fluo-4 AM（Invitrogen）和1.8 mmol/L Ca2+的臺(tái)氏液中預(yù)處理30 min，然后用無(wú)染料的臺(tái)氏液洗滌細(xì)胞20 min，使其脫酯化，然后成像處理。采用共聚焦顯微鏡沿肌細(xì)胞縱軸進(jìn)行掃描，獲取Ca2+圖像。1 Hz磁場(chǎng)刺激下，在含有1.8 mmol/L Ca2+的臺(tái)氏液中測(cè)量穩(wěn)態(tài)Ca2+瞬態(tài)，停止磁場(chǎng)刺激后5 s左右記錄Ca2+火花。8個(gè)像素中每個(gè)掃描像素的觸發(fā)時(shí)間的平均絕對(duì)偏差為Ca2+瞬變失同步化指數(shù)，用來(lái)評(píng)估Ca2+瞬態(tài)的失同步性[13]。

3.6 小鼠心功能檢測(cè) 將10只雄性SPF級(jí)C57BL/6小鼠分為TMAO組與對(duì)照組，每組各5只。將0.12%TMAO添加到TMAO組小鼠飼料中，6周后與喂養(yǎng)正常鼠糧的對(duì)照組小鼠一同進(jìn)行心功能檢測(cè)。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。多組比較采用單因素方差分析；兩組比較采用t檢驗(yàn)。采用SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 TMAO導(dǎo)致心肌細(xì)胞T小管網(wǎng)絡(luò)損傷

在檢測(cè)濃度（0.3～10 μmol/L）范圍內(nèi)，TMAO對(duì)心肌細(xì)胞T小管組織的損傷呈濃度依賴性，3 μmol/L和10 μmol/L的TMAO更顯著地降低了T小管密度和TTpower（P＜0.01），見圖1?；谝陨辖Y(jié)果，我們選擇3 μmol/L的TMAO用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2 TMAO導(dǎo)致鈣離子處理功能障礙

心肌細(xì)胞經(jīng)TMAO（3 μmol/L）培養(yǎng)24 h后，Ca2+瞬變平均振幅顯著降低，到達(dá)Ca2+瞬變峰值的時(shí)間顯著延長(zhǎng)，失同步化指數(shù)顯著增大（P＜0.01），見圖2。此外，TMAO處理導(dǎo)致自發(fā)Ca2+火花頻率和Ca2+火花振幅顯著增加（P＜0.01），但Ca2+火花平均時(shí)間半高寬和Ca2+火花半峰全寬無(wú)明顯改變，見圖3。

3 TMAO誘導(dǎo)心肌細(xì)胞JPH2從T小管向外周質(zhì)膜再分布

與對(duì)照組相比，TMAO作用24 h后心肌細(xì)胞的JPH2分布發(fā)生改變。主導(dǎo)頻率下JPH2功率的峰值是反映JPH2規(guī)律性的定量指標(biāo)。計(jì)算結(jié)果顯示，TMAO組JPH2功率降低（P＜0.01），見圖4A、B。此外，經(jīng)TMAO處理的心肌細(xì)胞在心肌細(xì)胞邊緣可見明顯的JPH2堆積（P＜0.01），見圖4A、C。與對(duì)照組相比，TMAO組心肌細(xì)胞JPH2蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯變化（P＞0.05），見圖4D、E。

4 TMAO促進(jìn)心肌細(xì)胞微管的聚合

與對(duì)照組相比，經(jīng)TMAO處理后的心肌細(xì)胞微管網(wǎng)絡(luò)密度顯著升高（P＜0.01），見圖5A。Western blot結(jié)果顯示，經(jīng)TMAO處理后的小鼠心肌細(xì)胞微管聚集性顯著增強(qiáng)（P＜0.01），見圖5B。

5 TAMO損害小鼠心功能

超聲心動(dòng)圖顯示，TMAO組小鼠心臟收縮功能（左心室射血分?jǐn)?shù)）較正常喂養(yǎng)的對(duì)照組小鼠顯著下降（P＜0.05），見圖6。

討 論

心血管疾?。╟ardiovascular diseases，CVD），包括動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、心力衰竭、房顫、心肌纖維化等，與世界范圍內(nèi)的高死亡率相關(guān)。吸煙、不良的飲食習(xí)慣、肥胖、糖尿病、高膽固醇等是眾所周知的危險(xiǎn)因素[1]。近年來(lái)的研究表明，腸道微生物群及其代謝產(chǎn)物在CVD的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用[14]。動(dòng)物模型證實(shí)了膽堿、腸道微生物群和TMAO加速了動(dòng)脈粥樣硬化、心力衰竭等CVD的發(fā)展，并與疾病嚴(yán)重程度有關(guān)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)TMAO灌胃后的小鼠，心臟體積明顯增大[15]。臨床數(shù)據(jù)也表明，心力衰竭患者血漿中腸道微生物源代謝物TMAO濃度呈現(xiàn)升高趨勢(shì)[4]。心肌興奮-收縮偶聯(lián)功能的關(guān)鍵是T小管和肌質(zhì)網(wǎng)之間的空間關(guān)系，在心臟動(dòng)作電位過(guò)程中，Ca2+通過(guò)L型Ca2+通道激活鄰近肌質(zhì)網(wǎng)膜上的雷諾丁受體（ryanodine receptors，RyRs），從肌質(zhì)網(wǎng)釋放更多的Ca2+[16]。T小管存在于正常成年哺乳動(dòng)物的心肌細(xì)胞中，與細(xì)胞外空間連續(xù)，并深入到哺乳動(dòng)物心室肌細(xì)胞的內(nèi)部[17]。在各種心臟疾病，包括不同類型的心力衰竭和心肌病等情況下，T小管會(huì)發(fā)生顯著的重塑或丟失。

Figure 1.Effects of TMAO on T-tubule structure in adult mouse cardiomyocytes（Di-8-ANNEPS staining，×63）.Isolated adult mouse cardiomyocytes were exposed to increasing concentrations of TMAO for 24 h.The global T-tubule density and T-tubule power（TTpower）were determined.Mean±SD.There were 25～30 cells in each group.*P＜0.05 vs control group.圖1 TMAO對(duì)成年小鼠心肌細(xì)胞T小管結(jié)構(gòu)的影響

TMAO和心衰之間的機(jī)制是否與心肌細(xì)胞T小管重構(gòu)有關(guān)，目前尚不清楚。因此，在我們的研究中，我們將分離的成年小鼠心肌細(xì)胞利用TMAO處理，來(lái)確定TMAO是否會(huì)破壞T小管結(jié)構(gòu)以及T小管丟失或（和）紊亂的程度。結(jié)果顯示，暴露于TMAO條件下24 h的小鼠心肌細(xì)胞T小管結(jié)構(gòu)紊亂，經(jīng)TMAO處理后的小鼠心肌細(xì)胞T小管密度及TTpower顯著下降。由于Ca2+從肌質(zhì)網(wǎng)釋放是由Ca2+通過(guò)細(xì)胞膜內(nèi)流觸發(fā)的，而T小管重構(gòu)破壞了位于T小管膜上的電壓門控L型Ca2+通道與肌質(zhì)網(wǎng)上的Ca2+釋放通道（RyR2）之間的精確通信，從而干擾肌質(zhì)網(wǎng)Ca2+釋放的快速電激發(fā)、啟動(dòng)和同步觸發(fā)[18-19]。因此，我們研究了TMAO是否能誘導(dǎo)分離的心肌細(xì)胞Ca2+處理紊亂。結(jié)果顯示，經(jīng)TMAO培養(yǎng)的小鼠心肌細(xì)胞到達(dá)Ca2+瞬變峰值的時(shí)間顯著延長(zhǎng)，Ca2+瞬變同步化減少，自發(fā)Ca2+火花頻率和Ca2+火花振幅也明顯增加。這些數(shù)據(jù)表明，TMAO能夠破壞心肌細(xì)胞Ca2+處理和干擾Ca2+再利用。Ca2+釋放的同步化保證了心室內(nèi)的細(xì)胞收縮是協(xié)調(diào)一致的，隨著心室壓力的增加和體積的減小，心肌的收縮會(huì)把血液擠出心臟。哺乳動(dòng)物的心室肌細(xì)胞幾乎同步從肌質(zhì)網(wǎng)觸發(fā)釋放Ca2+，引起心肌細(xì)胞去極化，而主要負(fù)責(zé)每個(gè)細(xì)胞內(nèi)局部Ca2+釋放同步化的就是T小管系統(tǒng)。Ca2+非同步化釋放常以Ca2+觸發(fā)釋放的傳播延遲為特征，心肌細(xì)胞到達(dá)Ca2+瞬變峰值的時(shí)間延長(zhǎng)，導(dǎo)致細(xì)胞收縮和（或）Ca2+瞬變功能障礙。

Figure 2.TMAO impaired Ca2+handling in the cardiomyocytes.Mean±SD.There were 25～30 cells in each group.**P＜0.01 vs control group.圖2 TMAO抑制心肌細(xì)胞Ca2+處理

Figure 3.Cardiomyocytes treated with TMAO displayed more Ca2+sparks（Fluo-4 AM staining，×63）.FDHM：full duration at half maximum；FWHM：full width at half maximum.Mean±SD.There were 15～30 cells in each group.**P＜0.01 vs DMSO group.圖3 經(jīng)TMAO處理的心肌細(xì)胞產(chǎn)生更多的Ca2+火花

T小管重構(gòu)是在不同病因的晚期心力衰竭中一個(gè)重要和常見的現(xiàn)象，T小管重構(gòu)導(dǎo)致的Ca2+釋放不同步使心肌收縮力降低[8]。隨著T小管完整性的喪失，收縮期Ca2+瞬時(shí)變化的“鈣觸發(fā)鈣釋放”模式發(fā)生干擾。T小管斷裂，L型Ca2+通道與RyR2發(fā)生錯(cuò)位，導(dǎo)致“孤立的”RyR簇，從而增加了Ca2+火花誘導(dǎo)Ca2+火花發(fā)生的機(jī)會(huì)[20-21]。Na+-Ca2+交換器的缺失以及因此而導(dǎo)致的更廣泛的Ca2+細(xì)胞分布可能使大型哺乳動(dòng)物的心室或心房易于發(fā)生Ca2+依賴的延遲去極化，這可能是大型哺乳動(dòng)物心室肌細(xì)胞Ca2+超載機(jī)制的基礎(chǔ)[22-23]。局部的Ca2+超載可能導(dǎo)致異常Ca2+釋放，這可能是導(dǎo)致心肌收縮功能障礙的原因。

Figure 4.TMAO aggravated JPH2 translocation in the cardiomyocytes.A：representative images of isolated cardiomyocytes stained with anti-JPH2 antibody after treatment with or without TMAO for 24 h（×63）；B：JPH2 power；C：semi-quantitative analysis of JPH2 distribution between T-tubule and peripheral sarcolemma；D：representative image of Western blot；E：densitometric data of Western blot.Mean±SD.There were 15～30 cells in each group.**P＜0.01 vs DMSO group.圖4 TMAO加重了心肌細(xì)胞中JPH2的易位

Figure 5.More rearrangement and densification of microtubules in the cardiomyocytes with TMAO treatment.A：β-tubulin immunofluorescence staining in cells treated with or without TMAO（×63）；B ：Western blot of free（F）and polymerized（P）β-tubulin.Mean±SD.There were 20～25 cells in each group.**P＜0.01 vs DMSO group.圖5 在TMAO處理下，心肌細(xì)胞的微管發(fā)生更多重排和致密化

Figure 6.TMAO undermined mouse cardiac function.A：the protocol showed how to treat mice with TMAO and assay the left ventricular ejection fraction（LVEF）；B：representative short-axis echocardiographic images of left ventricle M-mode recordings from chow-and TMAO-treated mice；C：quantitative evaluation of LVEF.Mean±SD.n=4～5.*P＜0.05 vs chow group.圖6 TMAO破壞小鼠心臟功能

維持T小管組織的關(guān)鍵是JPH2，它將T小管連接在肌質(zhì)網(wǎng)上，保障心臟二聯(lián)體的結(jié)構(gòu)[24]。JPH2在興奮細(xì)胞中連接細(xì)胞膜和肌質(zhì)網(wǎng)的物理間隙，維持正常心室肌細(xì)胞的連接膜復(fù)合體[25]。JPH2基因敲除對(duì)胚胎是致命的；而敲減JPH2基因的胚胎，其肌細(xì)胞存在缺陷的心臟二聯(lián)體，包括更多沒有JPH2的肌質(zhì)網(wǎng)片段[26]。研究還表明，JPH2在心力衰竭動(dòng)物模型中呈現(xiàn)重新分布和減少[16]。因此，我們推測(cè)JPH2易位和（或）下調(diào)可能在TMAO處理下引起的T小管重構(gòu)中發(fā)揮重要作用。我們的結(jié)果表明，TMAO作用小鼠心肌細(xì)胞24 h后，JPH2分布發(fā)生改變，在心肌細(xì)胞邊緣可見明顯的JPH2堆積，提示TMAO處理后JPH2蛋白分布發(fā)生易位；此外，TMAO組的JPH2功率也降低。以上結(jié)果提示了JPH2蛋白易位可能是TMAO誘導(dǎo)的T小管紊亂的主要潛在機(jī)制。

由于微管表達(dá)的增加和穩(wěn)定微管的形成，微管在代償期和失代償期積累并致密化。通過(guò)JPH2的再分布，微管致密化可導(dǎo)致心臟疾病和心肌細(xì)胞T小管重構(gòu)。在一些研究中，TAMO的增加已成為預(yù)測(cè)心力衰竭嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)之一。數(shù)據(jù)表明，TMAO確實(shí)促進(jìn)了微管蛋白聚合，并穩(wěn)定了微管，使微管不受失穩(wěn)擾動(dòng)[9]。因此，我們研究了TMAO是否參與導(dǎo)致微管積聚和興奮-收縮偶聯(lián)功能障礙，結(jié)果顯示，小鼠心肌細(xì)胞經(jīng)TMAO處理后，與對(duì)照組相比，微管網(wǎng)絡(luò)的致密化和聚集性顯著增強(qiáng)。先前的研究表明，微管蛋白致密化介導(dǎo)了JPH2在心臟應(yīng)激反應(yīng)中的易位現(xiàn)象[16]，這與我們的研究結(jié)果一致，即由于微管蛋白聚合增加，JPH2在TMAO處理中發(fā)生錯(cuò)位。JPH2在維持成年心臟心肌細(xì)胞T小管結(jié)構(gòu)完整性和維持 Ca2+處理方面是必需的[10，21]。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TMAO誘導(dǎo)的JPH2易位促進(jìn)了T小管重塑，并且動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也表明TMAO能夠使小鼠心功能下降。

總之，本研究為TMAO如何通過(guò)促進(jìn)小管蛋白的形成和隨后JPH2的易位而損害心功能提供了證據(jù)。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，減少TMAO的產(chǎn)生，如改善腸道菌群的質(zhì)量或防止腸道菌群失調(diào)，可能在一定程度上能夠保護(hù)心功能和延緩心衰的發(fā)展。