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    金納米電極對多巴胺和5-羥色胺的電化學(xué)富集和拉曼光譜檢測

    2020-07-04 02:10楊丹周晶李語靜趙銳馮文南何勁王哲楊國程
    分析化學(xué) 2020年6期
    關(guān)鍵詞:拉曼羥色胺神經(jīng)遞質(zhì)

    楊丹 周晶 李語靜 趙銳 馮文南 何勁 王哲 楊國程

    摘?要?對小分子神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺(Dopamine,DA)和5-羥色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)的同時分析和檢測是生命科學(xué)領(lǐng)域中的研究熱點。單一的電化學(xué)檢測手段難以有效地識別分析物,因此,多模量的同時分析尤為重要。本研究在碳納米電極(Carbon-nanoelectrode nanopipette,CNE-NP)的基礎(chǔ)上,通過電化學(xué)反應(yīng)在其尖端沉積金,構(gòu)建了一種具有電化學(xué)特性和拉曼活性的雙功能金納米電極(Gold-nanoelectrode nanopipette,GNE-NP) 。經(jīng)過交流介電泳(Dielectrophoresis,DEP)富集后,可用于對低濃度的DA和5-HT的檢測分析。研究結(jié)果表明,此電極實現(xiàn)了兩者的電化學(xué)響應(yīng)的增強和區(qū)分。此外,引入的銀納米顆粒(AgNPs)作為拉曼增強因子和捕獲分析物的納米顆粒,同樣地經(jīng)過DEP富集方法,使分析物的拉曼信號增強了2個數(shù)量級,且能對共混物進行特征峰的區(qū)分。將此電極應(yīng)用于血漿樣品分析,可得到富集增強的電化學(xué)響應(yīng),但電化學(xué)響應(yīng)會受到富集次數(shù)的限制。

    關(guān)鍵詞?基于納米孔道的金納米電極;多巴胺;5-羥色胺;介電泳富集;表面增強拉曼光譜

    1?引 言

    在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,多巴胺(DA)和5-羥色胺 (5-HT)是兩種重要的神經(jīng)遞質(zhì)[1]。其中,DA作為重要的兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)分子,參與人體腦部工作和體液循環(huán),是一種興奮神經(jīng)的神經(jīng)遞質(zhì)[2];而5-HT多為抑制興奮的神經(jīng)遞質(zhì)[3]。由于DA和5-HT在生命體系統(tǒng)中是同時存在的,因此,二者的同時檢測并區(qū)分顯得尤其重要。目前,關(guān)于提高DA[4,5]和5-HT[6]檢測的選擇性和靈敏度的研究方法較多,其中,電化學(xué)技術(shù)由于具有簡單操作、高選擇性和高靈敏度等特點而得到廣泛的關(guān)注。

    基于納米孔道(Nanopipette,NP)的納米電極在電分析檢測中具有獨特的優(yōu)勢,近年來備受關(guān)注[7~9]。NP可用于制造成內(nèi)壁/外壁金屬的[10,11]、內(nèi)壁碳填充的[12]或者其它導(dǎo)電材料修飾的[13]等具有不同的功能和構(gòu)造的納米電極,還可以通過電化學(xué)、光化學(xué)或者界面反應(yīng)等進一步修飾[14~16]。盡管NP在環(huán)境檢測和掃描電化學(xué)顯微鏡等[8,17]領(lǐng)域的應(yīng)用都取得了很大的進展,但對準確識別生物小分子,尤其是在人體樣品分析方面仍面臨著巨大的挑戰(zhàn)。近年來,已有許多關(guān)于生物小分子的電化學(xué)檢測的報道[18~20],然而在體內(nèi)和體外傳感中對各種神經(jīng)遞質(zhì)(如DA、5-HT、抗壞血酸、去甲腎上腺素等)的檢測,多集中在提高電化學(xué)信號的靈敏度以及特異性檢測的研究。這是由于神經(jīng)遞質(zhì)的釋放速度快,且在細胞外環(huán)境中的濃度低[1],導(dǎo)致檢測到的電化學(xué)信號弱。雖然有多種方法可以提高這些具有電化學(xué)活性的小分子神經(jīng)遞質(zhì)在納米電極上的電化學(xué)響應(yīng)[21,22],但在同時測定這些神經(jīng)遞質(zhì)分子時,由于性質(zhì)相近,電化學(xué)信號互相之間存在干擾[4],通常需要對電極表面進一步修飾,才可以達到高靈敏度和特異性檢測的要求。同時,考慮到僅依靠單一的電化學(xué)信號無法獲取多種有用信息,而表面增強拉曼光譜(Surface-enhanced Raman scattering,SERS)作為一種精確的、無損傷的光譜技術(shù),可以更好地輔助檢測和區(qū)分,實現(xiàn)無損檢測和分子官能團的確認。

    本研究制備了一種基于NP的金納米電極(Gold nanoelectrode-nanopipette,GNE-NP),通過在納米電極尖端上電化學(xué)沉積金,使得納米電極同時具有電化學(xué)特性和拉曼活性。在本研究組之前的報道中[23,24]已經(jīng)證明了基于NP的碳納米電極可以通過交流介電泳(Dielectrophoresis,DEP)富集方法,在電極尖端附近快速富集帶電荷的分子或納米顆粒,為增強DA和5-HT分子電化學(xué)信號和拉曼信號提供了有效的檢測手段。本研究結(jié)果將有助于更深入研究DA和 5-HT二者之間的電化學(xué)行為,并提供了有效增強電化學(xué)和拉曼光譜檢測信號的方法。

    2?實驗部分

    2.1?儀器與試劑

    CHI 852D電化學(xué)工作站(上海辰華公司);SRS DS345函數(shù)發(fā)生器(美國斯坦福公司);P-2000 CO2激光拉制儀、QF-100-7.5石英玻璃管(美國Sutter公司);JEOL JSM-7610F掃描電鏡(日本電子公司);LabRAM HR Evolution激光拉曼光譜儀(法國Horiba公司);磁力加熱攪拌器(上海精密科學(xué)儀器有限公司);燒制碳電極設(shè)備(自建);500 mL丁烷氣瓶(純度99.9%),Φ 0.25 mm Ag/AgCl絲和Φ 0.5 mm的鉑絲(北京國藥試劑公司)。

    四水合氯金酸(HAuCl4·4H2O,上海麥克林公司);三氯化六氨合釕(Ru(NH3)6Cl3)、鹽酸多巴胺(DA)、鹽酸5-羥色胺(5-HT)(Sigma Aldrich公司);AgNO3、三水合檸檬酸三鈉(北京國藥試劑公司);HCl、H2SO4(98%)、無水乙醇、H2O2(37%)、1×PBS溶液(pH=7.43)等試劑均為分析純;實驗用水均為Milli-Q超純水(18.2 MΩ·cm)。實驗所用血清由當?shù)蒯t(yī)院提供。

    2.2?實驗方法

    2.2.1?金納米電極的制備與表征?(1)拉制納米孔道電極?石英管(長度7.5 cm,內(nèi)徑0.5 mm,外徑1.0 mm)分別用Piranha洗液(H2SO4-H2O2,3∶1,V/V)、水、乙醇清洗,再用氮氣吹干,保持干燥。將石英管置于P2000拉制儀上拉制出兩根對稱的孔徑約100 nm的納米孔道電極,拉制參數(shù)如下:Heat=670;FIL=5;VEL=60;DEL=145;PUL=100。(2)燒制碳電極?參考文獻[23]的方法。在納米管內(nèi)通入~30 kPa的丁烷氣體,并對準尖端進行高溫?zé)?,丁烷氣體通過高溫?zé)峤鈺谑⒐芸椎纼?nèi)壁沉積碳,從而制備得到碳納米電極(Carbon nanoelectrode-nanopipette,CNE-NP)。最后,在碳納米電極的尖端利用電化學(xué)沉積金。Ag/AgCl絲為參比電極,鉑絲為對電極,鍍金溶液為1 mmol/L HAuCl4的PBS溶液,電沉積電位為70 mV,并控制沉積電流達到40 nA時停止電沉積。制備好的GNE-NP用水沖洗干凈,氮氣吹干。NP、CNE-NP及GNE-NP分別采用掃描電鏡進行形貌表征。(3)電化學(xué)檢測?采用循環(huán)伏安法(Cyclic voltammetry,CV)對GNE-NP電極鍍金前后的電化學(xué)性能進行對比。Ag/AgCl為參比電極,鉑絲電極為對電極,1 mmol/L Ru(NH3)6Cl3作為電化學(xué)探針。循環(huán)伏安和差分脈沖伏安(Differential pulse voltammetry,DPV)檢測均在CHI 852D電化學(xué)工作站上進行,電流精度0.01 pA。

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