陽離子化熒光金納米簇的合成及siRNA遞送研究

胡獻(xiàn)麗 朱琳嶺 李苓菱 徐志愛 張文

摘?要?基于Small interfering RNA（siRNA）的RNA干擾（RNA interference，RNAi）策略已經(jīng)成為生物醫(yī)學(xué)研究的常規(guī)手段，而通常采用的基于聚陽離子或陽離子磷脂的siRNA遞送系統(tǒng)遞送效率低、細(xì)胞毒性高，而且缺少示蹤功能，嚴(yán)重制約了siRNA藥物臨床轉(zhuǎn)化。為克服傳統(tǒng)siRNA遞送載體的不足，本研究發(fā)展了一種新型siRNA熒光納米遞送系統(tǒng)。首先利用牛血清白蛋白為模板，通過生物礦化策略合成具有近紅外熒光發(fā)射的金納米簇（Gold nanocluster，GN），利用乙二胺（Ethylenediamine，EDA）或N，N-二甲基乙二胺（N，N'-Dimethylethylenediamine，DMA）對GN進(jìn)行共價(jià)修飾，得到陽離子化金納米簇（Cationic gold nanocluster，CGN），同時(shí)實(shí)現(xiàn)siRNA高效遞送和熒光示蹤。然后，以表達(dá)綠色熒光蛋白（Green fluorescence protein，GFP）的肺癌A549細(xì)胞（A549-GFP）為細(xì)胞模型，驗(yàn)證了CGN可實(shí)現(xiàn)siRNA高效遞送，并沉默A549-GFP細(xì)胞的GFP表達(dá);進(jìn)一步利用共聚焦激光掃描顯微鏡實(shí)現(xiàn)了GN細(xì)胞分布的熒光示蹤。本研究結(jié)果表明，CGN有望用作siRNA遞送載體和示蹤探針。

關(guān)鍵詞?siRNA;金納米簇;陽離子化;熒光示蹤;遞送載體

1?引 言

Small interfering RNA（siRNA）是具有21～25個(gè)核苷酸序列的短鏈RNA?；趕iRNA的RNA干擾技術(shù)（RNA interference，RNAi）可特異性降解信使RNA（Messenger RNA，mRNA），沉默目標(biāo)基因的蛋白表達(dá)，已在生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究和疾病治療方面發(fā)揮了重要作用[1～4]，針對RNA干擾機(jī)制的基礎(chǔ)研究獲得了2006年諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎。近年來，針對杜氏肌營養(yǎng)不良癥、脊髓性肌萎縮癥和遺傳性轉(zhuǎn)甲腺素蛋白淀粉樣變性等疾病的siRNA藥物已陸續(xù)獲準(zhǔn)上市[5，6]。盡管siRNA藥物已取得較大進(jìn)展，但由于其具有較大分子量，而且?guī)в胸?fù)電荷，不能主動跨越細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，siRNA藥物的高效遞送仍是制約siRNA藥物臨床轉(zhuǎn)化的主要瓶頸[7，8]。

非病毒陽離子載體（主要包括陽離子聚合物和陽離子脂質(zhì)體）可通過靜電相互作用，與負(fù)電性siRNA形成納米級復(fù)合物，實(shí)現(xiàn)siRNA的細(xì)胞及活體高效遞送[9～11]。但是，常規(guī)陽離子載體通常缺乏成像功能，不便于監(jiān)控siRNA在細(xì)胞及體內(nèi)的轉(zhuǎn)染過程。 開發(fā)具有成像功能的siRNA遞送系統(tǒng)備受關(guān)注[12，13]。在各種成像方式中，利用熒光探針的光學(xué)成像方式具有背景干擾小、 空間分辨率高、 可避免電離輻射等優(yōu)點(diǎn)，是生物成像應(yīng)用的優(yōu)先選擇。 通常使用的有機(jī)小分子熒光探針可標(biāo)記遞送載體，但有機(jī)小分子染料光穩(wěn)定性較差，易光漂白，限制了其廣泛應(yīng)用[14～16]。半導(dǎo)體量子點(diǎn)的熒光量子產(chǎn)率高于傳統(tǒng)有機(jī)熒光染料，而且具有更好的光穩(wěn)定性及更窄的熒光發(fā)射光譜，已被用于siRNA胞內(nèi)遞送及熒光成像。然而，量子點(diǎn)因?yàn)樯锝到庑圆疃鴮?dǎo)致的生物安全性問題，嚴(yán)重制約了其生物醫(yī)學(xué)轉(zhuǎn)化[17～20]。隨著量子局限團(tuán)簇技術(shù)的發(fā)展，科研人員開始開發(fā)基于貴金屬的納米團(tuán)簇（Metal nanocluster，MN）。MN具有粒子尺寸小、熒光壽命長、穩(wěn)定性好及毒性低等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛用于生物成像探針方面的研究[21～23]。其中，熒光金納米簇（Gold nanocluster，GN）由于熒光性能獨(dú)特、化學(xué)穩(wěn)定性高、生物相容性好，在疾病標(biāo)志物及特異性信號分子的熒光檢測方面具有良好的應(yīng)用前景[24～26]。在GN的制備方法中，以蛋白質(zhì)為模板材料，利用仿生礦化策略合成的GN既能留了蛋白質(zhì)模板的三維結(jié)構(gòu)，又能在較寬的pH范圍內(nèi)保持穩(wěn)定。目前，基于牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）、胰蛋白酶、胰島素、溶菌酶合成的GN已廣泛用于細(xì)胞核靶向、癌細(xì)胞成像及離子傳感等多個(gè)方面[27～32]，但是，由于以蛋白質(zhì)為模板合成的GN通常帶負(fù)電，難以負(fù)載siRNA，所以GN用于siRNA遞送方面的應(yīng)用鮮見報(bào)道[33]。

本研究以BSA為模板，合成了具有近紅外熒光發(fā)射特性的GN，并通過共價(jià)作用進(jìn)行陽離子修飾，獲得的熒光陽離子化金納米簇（Cationic gold nanocluster，CGN）用于siRNA高效遞送及熒光示蹤。在中性條件下，siRNA帶負(fù)電，可通過靜電相互作用吸附在CGN表面，形成納米復(fù)合物。此納米復(fù)合物經(jīng)細(xì)胞攝取后進(jìn)入酸性內(nèi)涵體，CGN利用“質(zhì)子海綿”效應(yīng)[34～37]使內(nèi)涵體破裂并釋放siRNA，實(shí)現(xiàn)siRNA的胞漿遞送，并高效沉默目標(biāo)基因。以穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白（Green fluorescence protein，GFP）的A549肺癌細(xì)胞（A549-GFP）為細(xì)胞模型，證實(shí)了CGN可將siRNA高效輸送至A549-GFP細(xì)胞中，并有效抑制GFP表達(dá);同時(shí)，利用CGN的熒光成像功能考察了siRNA/CGN納米復(fù)合物在細(xì)胞內(nèi)的分布行為。初步研究結(jié)果表明，CGN有望用于siRNA胞內(nèi)遞送和熒光示蹤。

2?實(shí)驗(yàn)部分

2.1?儀器與試劑

Cary 60紫外-可見光譜儀、Cary Eclipse熒光光譜儀（美國Agilent公司）;Omniflex飛行時(shí)間質(zhì)譜（Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS，德國Bruker公司）;熱重分析儀（Thermal gravimetric analyzer，TGA，日本Shimadzu公司）;NanoSizer動態(tài)光散射儀（Dynamic light scattering，DLS，英國Malvern公司）;Fluoview FV-1000共聚焦激光掃描顯微鏡（Confocal laser scanning microscopy，CLSM，日本Olympus公司）;凝膠成像儀（Chemi Doc MP System，美國Bio-Rad公司）;JEM-2100F透射電子顯微鏡（Transmission electron microscopy，TEM，日本電子株式會社）。

BSA、乙二胺（Ethylenediamine，EDA）、N，N-二甲基乙二胺（N，N'-Dimethylethylenediamine，DMA）、1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（1-[3-（Dimethylamino）propyl]-3-ethylcarbodiimide hydrochloride，EDC·HCl）、N-羥基琥珀酰亞胺（N-Hydroxysuccinimide，NHS）、氯金酸（Chloroauric acid，HAuCl4）和3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽（3-（4，5-Dimethyl-2-thiazolyl）-2，5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT，Sigma-Aldrich公司）;Lipo-2000、Hoechst 33342、Lysotracker green和Gibco胎牛血清（Thermo Fisher Scientific公司）;透析袋（截留分子量3.0 kDa，Spectrum Laboratories 公司）;其它化學(xué)試劑均為分析純試劑，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。所有的玻璃儀器使用前均用濃HCl-濃HNO3（3∶1，V/V）洗凈，然后用乙醇和超純水沖洗。siRNA-GFP、siRNA-NC及siRNA-NC-Cy3序列購于Takara生物工程有限公司（大連）。

siRNA序列如下： siRNA-GFP： 5'-GGC TAC GTC CAG GAG CGC ACC-3';siRNA-NC： 5'-CGG UGA GCC AGG CGU GCA AUU-3'。

2.2?GN的合成

參照文獻(xiàn)[27]的方法合成GN，具體過程如下：在37℃恒溫和劇烈攪拌（900～1000 r/min）下，向5 mL BSA溶液（50 mg/mL）中，迅速加入5 mL HAuCl4溶液（10 mmol/L），反應(yīng)2 min后，快速加入0.5 mL NaOH溶液（1.0 mol/L），在37℃下攪拌（900～1000 r/min）12 h，最終得到棕色的GN膠體溶液。

2.3?GN的陽離子化修飾

將EDA（0.65 mL，10 mmol）或DMA（0.65 mL，10 mmol）溶液用6.0 mol/L HCl調(diào)節(jié)至pH 4.8，然后加入新制備的GN，并加入18.1 mg EDC/11.0 mg NHS（94 μmol），室溫?cái)嚢? h。然后，溶液用醋酸緩沖液調(diào)節(jié)至pH 4.75，用5 μm 的濾膜過濾反應(yīng)液，接著用截留分子量為30 kDa的離心超濾管離心（5000 g，30 min，15℃）除去未反應(yīng)物質(zhì)，最后，用去離子水透析純化。純化后的溶液冷凍干燥，得到棕色固體即為DA或DMA共價(jià)修飾的CGN。

2.4?電泳分析

利用瓊脂糖凝膠電泳遷移法檢測CGN負(fù)載siRNA能力。使用TAE緩沖液（40 mmol/L Tris-acetate，1.0 mmol/L EDTA，pH 8.0）制備1.0%（w/V）瓊脂糖膠，300 ng siRNA分別與不同濃度的GN混合，外加80 V電壓作用20 min，然后進(jìn)行凝膠成像。

2.5?細(xì)胞培養(yǎng)

A549非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞從中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫獲得。采用慢病毒載體轉(zhuǎn)染方式構(gòu)建GFP穩(wěn)定表達(dá)的A549穩(wěn)轉(zhuǎn)株（A549-GFP）[38]。A549和A549-GFP細(xì)胞使用含有10%胎牛血清、100 μg/mL硫酸鏈霉素和100 U/mL 青霉素鈉的DMEM高糖細(xì)胞培養(yǎng)基，在37℃恒溫、 5%CO2的濕潤培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.6?體外細(xì)胞毒性評價(jià)

將A549細(xì)胞以3.5 × 103細(xì)胞/孔的密度接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔加100 μL培養(yǎng)基。孵育24 h后，加入不同質(zhì)量濃度的GN或CGN，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，利用MTT法測定細(xì)胞存活率。

2.7?siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)及GN的細(xì)胞分布

將A549-GFP細(xì)胞置于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔內(nèi)的10 mm2 蓋玻片上培養(yǎng)，密度為5.0 × 104細(xì)胞/孔，經(jīng)過24 h預(yù)培育后，加入負(fù)載了siRNA-GFP的CGN（siRNA/CGN質(zhì)量比為1∶20，siRNA濃度為1.0 μg/mL），并以混合相同含量siRNA的商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑Lipo-2000混合物作為對照，Lipo-2000用量參照使用說明。繼續(xù)孵育48 h，培養(yǎng)好的細(xì)胞先用PBS清洗，然后用4%（V/V）多聚甲醛固定。使用共聚焦激光掃描顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞成像，計(jì)算A549-GFP細(xì)胞的GFP沉默效率。

為了考察GN和siRNA的胞內(nèi)分布行為，將A549細(xì)胞以5.0 × 104細(xì)胞/孔的密度在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔內(nèi)的10 mm2 蓋玻片上培養(yǎng)。經(jīng)過24 h預(yù)培育后，加入負(fù)載Cy3-siRNA-NC的CGN（siRNA/CGN質(zhì)量比為1∶20），siRNA濃度為1.0 μg/mL。繼續(xù)孵育12 h后，用Hoechst-33342和Lysotracker-Green （DND-26，75 nmol）染色30 min。培養(yǎng)好的細(xì)胞先用PBS清洗，然后用4%（V/V）多聚甲醛固定。用共聚焦激光掃描顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞成像。濾光片設(shè)置Hoechst-33342 （Ex=360 nm，Em=450 nm）、Lysotracker-Green （Ex= 488 nm，Em= 515 nm）、CGN （Ex= 360 nm，Em= 675 nm （far-red））和Cy3 （Ex=543 nm，Em= 595 nm）。

3?結(jié)果與討論

3.1?CGN復(fù)合物的合成及siRNA負(fù)載原理

蛋白質(zhì)保護(hù)的GN生物相容性良好，熒光性質(zhì)穩(wěn)定，熒光發(fā)射波長可調(diào)，而且可發(fā)射近紅外熒光[39，40]?；诖?，本研究利用BSA生物礦化合成的GN進(jìn)行陽離子化修飾，并用作siRNA的

遞送載體。陽離子化的GN（DMA/EDA-GN）的制備過程及對siRNA的遞送原理如圖1所示。在堿性條件下，以BSA為模板時(shí)，HAuCl4被還原，合成可發(fā)射近紅外熒光的GN[27]。在EDC/NHS的活化作用下，EDA或DMA能與GN表面BSA上的谷氨酸等殘基反應(yīng)，使BSA-GN陽離子化。siRNA呈負(fù)電性，即可通過靜電作用吸附在CGN表面，從而實(shí)現(xiàn)對siRNA的有效負(fù)載。負(fù)載了siRNA的納米復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)的酸性pH環(huán)境使EDA或DMA上的胺基質(zhì)子化，產(chǎn)生“質(zhì)子海綿”效應(yīng)[34～37]，破環(huán)內(nèi)涵體，釋放siRNA，有效沉默靶基因。

3.2?DMA/EDA-GN復(fù)合物的表征

3.2.1?吸收及熒光光譜表征?首先對合成的GN和CGN進(jìn)行吸收及熒光光譜表征。如圖2A所示，BSA在400～800 nm的波長區(qū)間內(nèi)無明顯吸收峰，并在480 nm光激發(fā)下不發(fā)射熒光。本研究中，BSA同時(shí)作為模板和保護(hù)劑，合成的GN在480 nm附近出現(xiàn)特征吸收峰，且在480 nm光激發(fā)下，650 nm波長附近出現(xiàn)較強(qiáng)的熒光發(fā)射，800 nm附近仍有熒光，證明成功制備出了近紅外GN。而GN經(jīng)陽離子化后，其吸收光譜保持不變，480 nm光激發(fā)時(shí)仍然有較強(qiáng)的熒光，最大熒光發(fā)射波長略有紅移（圖2B）。

3.2.2?MALDI-TOF 質(zhì)譜及熱重（TGA）分析

采用MALDI-TOF質(zhì)譜分析了DMA/EDA-GN納米復(fù)合物的組成。由圖3A可知，BSA的分子量為65.0 kDa。經(jīng)過生物礦化合成GN后，GN的分子量變?yōu)?7955 Da，數(shù)值增加了2955 Da，根據(jù)文獻(xiàn)[27，41]的方法計(jì)算可得BSA包裹金原子的數(shù)量為15。共價(jià)修飾DMA后，納米復(fù)合物質(zhì)量增加至70500 Da，由此計(jì)算得GN上DMA的連接數(shù)量為37，同樣地，可分析出EDA的連接數(shù)為38。進(jìn)一步利用熱TGA法分析DMA/EDA-GN納米復(fù)合物的組成。金原子化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，耐高溫，因此，當(dāng)DMA/EDA-GN納米復(fù)合物經(jīng)600℃高溫處理后，有機(jī)組分DMA、EDA和BSA均被高溫分解，最終剩余物質(zhì)為金。熱重分析結(jié)果（圖3B）顯示，GN的熱降解率為90%，DMA/EDA-GN的熱降解率約為95%，與質(zhì)譜分析結(jié)果一致。

3.2.3?DLS和TEM表征?本研究合成的GN為穩(wěn)定的淡棕色溶液，通過DLS考察了其陽離子化前后納米復(fù)合物的尺寸。如圖4A所示，溶液條件下的GN粒徑約為8 nm，分散較為均勻，經(jīng)過DMA/EDA修飾的CGN粒徑略微增大，約為10 nm，沒有發(fā)生明顯團(tuán)聚。從TEM圖（圖4B）可知，修飾后的GN仍為均勻分散的球形，表明陽離子化過程不影響GN的形貌。3種GN長時(shí)間放置后仍保持穩(wěn)定。

3.2.4?Zeta電位及電泳分析?進(jìn)一步利用Zeta電位分析儀考察了DMA/EDA-GN納米

復(fù)合物修飾前后的電位變化。由于BSA在中性條件下帶負(fù)電，BSA合成的GN表面也呈負(fù)電性，測得Zeta電位值為（19.8 ± 1.7） mV。經(jīng)過DMA/EDA修飾后，表面電位發(fā)生了很大變化：由負(fù)電性反轉(zhuǎn)為正電性，分別變?yōu)椋?0.9 ± 1.5） mV和（28.9 ± 0.9） mV，復(fù)合物表面帶正電，說明DMA和EDA的成功修飾。因此，帶正電的納米復(fù)合物表面可成功負(fù)載帶負(fù)電的siRNA。通過凝膠電泳考察了CGN負(fù)載siRNA的能力。

由圖5可知，帶負(fù)電的GN難以負(fù)載siRNA，即使將GN與siRNA的質(zhì)量比增加至60∶1，也無法負(fù)載siRNA，阻止siRNA遷移。然而，將GN陽離子化修飾后，基于正負(fù)電荷的較強(qiáng)靜電作用，CGN和siRNA在質(zhì)量比為10∶1時(shí)，便可有效負(fù)載siRNA，當(dāng)CGN/siRNA的質(zhì)量比增加至60∶1時(shí)，CGN可完全阻止siRNA遷移。電泳實(shí)驗(yàn)表明，DMA/EDA-GN可有效負(fù)載siRNA，有望用于siRNA遞送。

3.2.5?細(xì)胞毒性分析?siRNA遞送載體的細(xì)胞毒性對其臨床應(yīng)用至關(guān)重要。將A549肺癌細(xì)胞分別與GN、EDA-GN和DMA-GN孵育24 h，采用MTT法評價(jià)GN的細(xì)胞毒性，結(jié)果如圖6所示。GN具有良好的生物相容性，在濃度為250 g/mL時(shí)，細(xì)胞仍然保持80%的代謝活力。修飾EDA/DMA后，EDA-GN和DMA-GN組的細(xì)胞存活率約下降10%，陽離子化修飾并未顯著增大GN的細(xì)胞毒性。

3.3?細(xì)胞對siRNA/CGN復(fù)合物的攝取及分布研究

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，選取野生型A549細(xì)胞為模型，使用共聚焦激光掃描顯微鏡（CLSM）研究siRNA/CGN納米復(fù)合物的細(xì)胞攝取及分布行為。采用Cy3標(biāo)記的siRNA-NC對siRNA進(jìn)行定位，使用細(xì)胞核染色劑Hoechst 33342對細(xì)胞核進(jìn)行定位。首先考察siRNA和GN在細(xì)胞內(nèi)的分布，如圖7A所示，在A549細(xì)胞中可同時(shí)發(fā)現(xiàn)Cy3的熒光信號和DMA-GN的熒光信號，且兩者存在共定位，表明細(xì)胞成功攝取了siRNA/CGN納米復(fù)合物。為了證實(shí)細(xì)胞對siRNA的攝取，使用Hoechst 33342對細(xì)胞核進(jìn)行定位。如圖7B所示，Cy3-siRNA和CGN分布在細(xì)胞核周圍，進(jìn)一步表明CGN可實(shí)現(xiàn)對siRNA的有效胞內(nèi)遞送。另外，研究表明，非病毒載體成功遞送siRNA的瓶頸在于能否實(shí)現(xiàn)內(nèi)涵體逃逸。如負(fù)載的siRNA不能從內(nèi)涵體中及時(shí)釋放，將被轉(zhuǎn)運(yùn)到溶酶體，并被溶酶體內(nèi)的酶降解，失去活性[42，43]。為了證實(shí)CGN載送的siRNA可實(shí)現(xiàn)內(nèi)涵體逃逸，進(jìn)一步利用Lysotracker green對溶酶體進(jìn)行定位。游離Cy3-siRNA和A549細(xì)胞共孵育后，細(xì)胞內(nèi)未觀察到Cy3紅色熒光，表明游離siRNA無法進(jìn)入細(xì)胞。相反，DMA-GN可將siRNA高效遞送到細(xì)胞內(nèi)。特別是DMA-GN組的Cy3和Lysotracker green的熒光信號呈分離狀態(tài)，表明siRNA可從內(nèi)涵體逃逸到胞漿，避免溶酶體降解（圖7C和7D）。

3.4?GFP基因沉默研究

以A549-GFP細(xì)胞為細(xì)胞模型，考察了DMA-GN和 EDA-GN的基因轉(zhuǎn)染效率。siRNA-GFP可有效抑制GFP基因表達(dá)，將siRNA-GFP/CGN納米復(fù)合物與A549-GFP 肺癌細(xì)胞共孵育，通過GFP基因表達(dá)研究其基因沉默效率。如圖8所示，未處理細(xì)胞組中的所有細(xì)胞均可觀察到綠色熒光表達(dá)。商品化轉(zhuǎn)染試劑Lipo-2000組可高效遞送siRNA，使得GFP陽性率約下降50%。但是，Lipo-2000處理組細(xì)胞數(shù)量顯著減少，且細(xì)胞呈圓球狀，表明Lipo-2000對細(xì)胞有毒副作用。使用與Lipo-2000組同等劑量的siRNA，siRNA-GFP/EDA-GN或siRNA-GFP/DMA-GN組的GFP蛋白陽性率分別下降到42.0%±5.0%和28.7%±2.5%。DMA-GN組的GFP沉默效率約為Lipo-2000陽性對照組的2倍，但細(xì)胞數(shù)目較多，而且狀態(tài)與未處理組相近，表明CGN不僅細(xì)胞毒性比Lipo-2000小，且對siRNA-GFP的轉(zhuǎn)染效率高，有望用于siRNA高效遞送。同時(shí)，DMA-GN的siRNA轉(zhuǎn)染能力顯著高于EDA-GN，可能與二甲基胺的質(zhì)子緩沖能力和內(nèi)涵體逃逸能力相關(guān)[44]。

4?結(jié) 論

基于GN的易合成、生物相容性好以及具有穩(wěn)定的近紅外熒光發(fā)射等特性，利用胺類化合物對其進(jìn)行陽離子化修飾，制備CGN，成功實(shí)現(xiàn)了siRNA的有效載送和熒光示蹤。將siRNA/CGN作用于A549-GFP肺癌細(xì)胞后，可有效沉默GFP基因表達(dá)，使GFP基因表達(dá)率降至28.7%，其抑制效果接近商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑Lipo-2000。相比于Lipo-2000，siRNA/CGN復(fù)合物的細(xì)胞毒性較低，A549細(xì)胞受到的影響較少。因此，此siRNA遞送體系具有制備簡單、生物相容性好、載送效率高等優(yōu)點(diǎn)，為siRNA基因遞送及疾病治療提供了更多的可能。

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