體外發(fā)酵條件下牛肉和雞肉蛋白對人糞便微生物的影響

張廣紅，周光宏，徐幸蓮，李春保*

（肉品加工與質(zhì)量控制教育部重點實驗室，江蘇省肉類加工與質(zhì)量控制協(xié)同創(chuàng)新中心，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部肉品加工重點實驗室，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，江蘇 南京 210095）

肉類含有豐富的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)，相比植物蛋白，肉類蛋白中必需氨基酸的組成更加均衡，更易于消化吸收，通常被認(rèn)為是全價蛋白質(zhì)[1]，營養(yǎng)價值高[2]，且肉類蛋白質(zhì)氨基酸組成成分與維持機體細(xì)胞、組織成長所需的氨基酸種類和比例十分相近[3]，在機體生長發(fā)育和物種進(jìn)化中發(fā)揮著重要作用[2]。腸道微生物被認(rèn)為是人體的至關(guān)重要的“第二基因組”[4]，近年來得到廣泛的關(guān)注。人體腸道微生物有上千種[5]，其中厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、變形菌門（Proteobacteria）、放線菌門（Actinobacteria）、梭桿菌門（Fusobacteria）和疣微菌門（Verrucomicrobia）是人體腸道中6 種優(yōu)勢菌門[6]。腸道微生物可以發(fā)酵未消化的食物（膳食纖維、蛋白質(zhì)），生成的代謝產(chǎn)物對人體健康具有重要的影響[4]。

研究發(fā)現(xiàn)，素食愛好者和肉食愛好者的腸道菌群結(jié)構(gòu)有著明顯的差異，素食愛好者體內(nèi)腸道菌群優(yōu)勢菌種為多枝梭菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌，而食肉者腸道優(yōu)勢菌群為普拉氏梭桿菌[7]。Qi Hongwei等[7]用不同來源的蛋白質(zhì)作為唯一膳食蛋白配制飼料喂大鼠，14 d后檢測盲腸內(nèi)容物中微生物的組成，發(fā)現(xiàn)不同種類植物蛋白質(zhì)對大鼠盲腸內(nèi)容物中微生物組成有著顯著的影響。Zhu Yingying等[8]以雞肉蛋白、牛肉蛋白和大豆蛋白喂養(yǎng)大鼠90 d，對微生物組成結(jié)構(gòu)和代謝物進(jìn)行分析，顯示雞肉蛋白組乳酸桿菌豐度較高、乳酸增加、大豆蛋白乳酸桿菌降低，并證實了肉類的適當(dāng)攝入可減少人體炎癥的發(fā)生。實驗動物與人體環(huán)境存在一定的差異，直接用人體開展食肉對腸道微生物影響的研究甚少。

本實驗在體外發(fā)酵的條件下，采集45 名健康成年人（18～28 歲）的糞便微生物與牛肉和雞肉蛋白發(fā)酵，分析2 種肉蛋白對人體腸道微生物組成和結(jié)構(gòu)的影響，旨在為后期開展研究人類健康合理膳食提供一定的理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮牛肉、雞肉購于蘇果超市專營店；培養(yǎng)基基礎(chǔ)母液為實驗室自制；QIAamp DNA Stool Mini Kit 德國Qiagen公司；其他試劑為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

高壓蒸汽滅菌鍋 日本Tomy公司；Precellys均質(zhì)機法國Bertin Technologies公司；微型旋渦混合儀 上海瀘西分析儀器廠；MlX-206微型離心機 美國Crystal公司；電子天平 上海精密科學(xué)儀器公司；制冰機 日本三洋公司；恒溫振蕩金屬浴 上海珂淮儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 肉蛋白粉的制備和體外消化

肉蛋白粉制作和體外消化參考文獻(xiàn)[9]。將牛外脊肉和雞胸肉剔除可見結(jié)締組織和脂肪，絞碎后放入蒸煮袋中，水浴加熱至中心溫度70 ℃。冷卻至室溫后凍結(jié)，進(jìn)一步冷凍干燥處理去除水分。每100 g凍干肉粉加入1.5 L二氯甲烷-甲醇混合液（2∶1，V/V），混合均勻后抽提處理2～3 次，揮干有機溶劑后過35 目篩，肉蛋白粉加入制備好的消化液（胃酶和胰酶）得到產(chǎn)物沉淀，真空冷凍干燥后使用。

1.3.2 基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基的制備

參考文獻(xiàn)[10]方法，培養(yǎng)基母液由以下7 種溶液組成，配制方法如下：

碳酸氫鹽溶液：準(zhǔn)確稱取65 g NaHCO3加入到1 L燒杯中溶解，持續(xù)通入CO2氣體，現(xiàn)配現(xiàn)用。使用前再次通氣20 min。

微量元素溶液：依次準(zhǔn)確稱量2 5 m g MnCl2·4H2O、20 mg FeSO4·7H2O、25 mg ZnCl2、50 mg CuCl2·2H2O、50 mg CoCl2·6H2O、50 mg SeO2、250 mg NiCl2·6H2O、250 mg Na2MoO4·2H2O、31.3 mg NaVO3和250 mg H3BO3加入到50 mL燒杯中，用20 mL 0.02 mol/L HCl溶液溶解，轉(zhuǎn)移至1 L容量瓶中用超純水定容，再分裝到2 個500 mL棕色瓶中，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

磷酸鹽溶液：準(zhǔn)確稱取54.7 g KH2PO4試劑，溶于1 L超純水中，之后向KH2PO4溶液中加入20.4 mg生物素、20.5 mg葉酸、164 mg泛酸鈣、164 mg煙酰胺、164 mg核黃素、164 mg鹽酸硫胺、164 mg鹽酸吡哆醇、20.4 mg對氨基苯甲酸、20.5 mg鈷胺素。2.2 μm濾膜過濾除菌，濾液置于加蓋的滅菌血清瓶中密封，4 ℃保存，兩周內(nèi)用完。

脂肪酸溶液：準(zhǔn)確稱取8 g NaOH加入到50 mL燒杯中，用少量超純水溶解，之后轉(zhuǎn)移至1 L容量瓶中，加入800 mL以上的水，搖勻后加入6.85 mL 156.64 mmol/L乙酸溶液、3.00 mL 51.78 mmol/L丙酸溶液、1.84 mL 20.26 mmol/L丁酸溶液和0.55 mL 20.99 mmol/L戊酸溶液定容至1 L，再分裝到2 個500 mL棕色瓶中，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

刃天青溶液：作為厭氧指示劑，有游離氧存在時呈紅色，無氧時呈無色。準(zhǔn)確稱取100 mg刃天青，溶于100 mL超純水中，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

氯化血紅素溶液：準(zhǔn)確稱取0.1 g氯高鐵血紅素加入到50 mL燒杯中，燒杯置于沸水中，加入5 mL 0.05 mol/L的NaOH溶液溶解，轉(zhuǎn)移至500 mL容量瓶中持續(xù)通入CO2氣體，沸水定容，定容過程中持續(xù)通入CO2氣體。分裝到3 個血清瓶中，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

還原劑溶液：準(zhǔn)確稱取20.5 g Na2S·9H2O加入到50 mL燒杯中，用少量水溶解后轉(zhuǎn)移到1 L容量瓶中，使用沸水定容，定容過程中持續(xù)通入CO2氣體。2.2 μm濾膜過濾除菌，濾液置于加蓋的滅菌血清瓶中密封，4 ℃保存。

量取920 mL超純水至三角瓶中，依次準(zhǔn)確稱量0.6 g KCl、0.6 g NaCl、0.2 g CaCl2·2H2O、0.5 g MgSO4·7H2O、1.46 g KH2PO4、3.55 g Na2HPO4、4.0 g葡萄糖至三角瓶中，溶解完畢后，依次加入10 mL微量元素溶液、10 mL氯化血紅素溶液、10 mL脂肪酸溶液，放入微波爐中加熱至沸騰，通入CO2至常溫，再加入50 mL碳酸氫鹽溶液，定量分裝9 mL到已經(jīng)添加有蛋白粉的發(fā)酵試管中，用橡皮塞和鋁蓋密封，滅菌。接種前每瓶發(fā)酵瓶中加入1 mL的還原劑和1 mL的磷酸鹽溶液。

1.3.3 志愿者招募

招募本校年齡在18～28 歲男性志愿者200 名，簽署知情同意書、校醫(yī)院體檢、填寫日常生活和飲食調(diào)查問卷。選取相似生活背景和飲食習(xí)慣、健康無遺傳病史和3 個月內(nèi)未使用抗生素45 名男性志愿者。統(tǒng)一時間內(nèi)收集新鮮糞便。

1.3.4 菌液的制備

在超凈工作臺內(nèi)稱量2 g新鮮糞便樣品至無菌鋯珠管（已加入碎珠），加入10 mL經(jīng)過脫氧處理的磷酸緩沖鹽溶液，4 500 r/min均質(zhì)1 min，經(jīng)過三層紗布過濾，制備菌液懸浮液。

1.3.5 腸道微生物的培養(yǎng)

實驗設(shè)置對照組（1-樣品編號，未加蛋白粉）和實驗組，實驗組中2 種蛋白質(zhì)的添加量為0.01 g，共2 組，分別為牛肉蛋白組（N-樣品編號）、雞肉蛋白組（J-樣品編號），每組45 個重復(fù)。在厭氧的條件下用注射器將1.3.2節(jié)制成的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和1.3.4節(jié)制得菌液9∶1（V/V）混合，充分搖勻。置于37 ℃搖床中恒溫培養(yǎng)48 h，之后分裝2 mL凍存管中，-80 ℃保存。

1.3.6 腸道微生物的DNA提取和測序

按照QIAamp DNA Stool Mini Kit試劑盒說明書方法提取發(fā)酵液總DNA[11]，提取后的樣品置于-20 ℃保存。

1.3.7 Illumina PE250測序

將1.3.6節(jié)提取出的DNA送到上海凌恩生物科技公司進(jìn)行測序，步驟如下[12-17]：1）DNA純度檢測：利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測其純度。2）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴(kuò)增：在V4區(qū)富集擴(kuò)增，合成barcode特異引物循環(huán)擴(kuò)增（每個樣本3 個重復(fù)），同一樣本的PCR產(chǎn)物都需2%瓊脂糖凝膠電泳檢測；AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒（AXYGEN公司）回收PCR產(chǎn)物；Tris-HCl洗脫；2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。PCR采用TransGen AP221-02：TransStart FastPfu DNA Polymerase；PCR儀：ABI GeneAmp?9700型。3）熒光定量：PCR產(chǎn)物用QUAN提FluorTM-ST藍(lán)色熒光定量系統(tǒng)（Promega公司）檢測定量。4）文庫構(gòu)建：測序公司根據(jù)文獻(xiàn)和公司方法構(gòu)建。5）測序。

1.4 生物信息學(xué)分析

1.4.1 序列的優(yōu)化

將Illumina PE250測序序列按照標(biāo)簽從所有樣品篩選有效序列。原則和步驟如下[18-19]：1）過濾：設(shè)置50 bp的窗口，如果窗口內(nèi)的平均質(zhì)量值低于20，從窗口開始截去后端堿基，過濾質(zhì)控后50 bp以下的序列。2）拼接：將成對的序列拼接成一條序列，最小重疊長度為10 bp，最大錯配比率為0.2，篩除不符合序列。3）校正：根據(jù)序列首尾兩端的標(biāo)簽和引物區(qū)分樣品，并調(diào)整序列方向，標(biāo)簽允許的錯配數(shù)為0，最大引物錯配數(shù)為2，最后去除嵌合體。

1.4.2 分類學(xué)分析

使用Usearch version 7.1軟件（http://drive5.com/uparse/）對測序的所有序列97%的相似水平下進(jìn)行可操作分類單元（operational taxonomic unit，OTU）[12,19]劃分；采用RDP classifier貝葉斯算法[20]（http://sourceforge.net/projects/rdp-classifier/），在置信度閾值為0.7的條件下，對OTU序列進(jìn)行各個分類水平的分析，參考的比對數(shù)據(jù)庫為Silva Release 119[21]（http://www.arb-silva.de）；LEfSe[22]是分析基因組特征信息的方法；統(tǒng)計學(xué)分析采用SAS 9.2軟件統(tǒng)計，P＜0.05，差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果

135 個樣品在515F-806R（5’-GTGCCAGCMGCCGCGG-3’-5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’）區(qū)域擴(kuò)增至每個樣品濃度都達(dá)到A，如圖1所示，PCR產(chǎn)物目的條帶大小正確，濃度合適，可進(jìn)行后續(xù)實驗。

圖1 PCR擴(kuò)增序列結(jié)果圖Fig. 1 Results of PCR amplified DNA fragments

2.2 序列優(yōu)化的結(jié)果

本研究共測定樣品數(shù)135，總序列數(shù)6 048 811，對照組、牛肉蛋白組和雞肉蛋白組篩選后每組平均序列數(shù)分別45 979、44 788和47 793，且3 組間無明顯差異（P＞0.05）?？倝A基對數(shù)為1 547 301 984 bp，平均堿基數(shù)為255.80 bp。而有效序列大多分布在251～300 bp，數(shù)量占比為99.999 7%。

2.3 樣本的多樣性

圖2 稀釋性曲線Fig. 2 Rarefaction curves

稀釋性曲線可以用來比較不同測序量樣本中物種的豐度，反映樣本的測序深度。由圖2可知，隨著測序量的增加，樣本物種的豐度也在增加，測序深度也在增加。Shannon-Wiener曲線是利用各樣本的測序量在不同測序深度時微生物的多樣性指數(shù)，反映不同測序量樣本中微生物的多樣性，Shannon指數(shù)越大，代表樣本微生物多樣性越高。由圖3可知，隨著OTU數(shù)量的增加，Shannon-Wiener曲線趨向平坦，說明測序量已達(dá)到飽和。因此認(rèn)為此測序方法可行，可以反映樣本中微生物大部分的信息。

圖3 Shannon-Wiener曲線Fig. 3 Shannon-Wiener curves

2.4 菌群組成和相對豐度分析

表1 門水平菌落相對豐度Table 1 Abundance of gut microbiota at the phylum level%

由表1可知，在門水平上，實驗組在擬桿菌門、變形菌門和放線菌門相對豐度有顯著變化（P＜0.05）。與對照組相比，牛肉蛋白組變形菌門和放線菌門相對豐度顯著增加；雞肉蛋白組變形菌門和放線菌門相對豐度也顯著增加，但擬桿菌門的相對豐度卻顯著減小。牛肉蛋白組和雞肉蛋白組之間無顯著差異（P＞0.05）。說明在門水平上，肉蛋白組顯著改變?nèi)梭w糞便微生物相對豐度。

2.5 不同組別菌群的聚類分析

聚類樹顯示在組間樣品中微生物相似度的聚類分析，由圖4聚類樹可知，對照組和牛肉蛋白樣本可以明顯區(qū)分。由圖4柱狀圖可知，對照組和牛肉蛋白組優(yōu)勢菌門主要有擬桿菌門、厚壁菌門和變形菌門。且a和b區(qū)域的柱狀圖看出，與對照組相比，牛肉蛋白組變形菌門和放線菌門相對豐度顯著增加（P＜0.05）；擬桿菌門相對豐度整體較高，但無顯著差異（P＞0.05）。

圖4 對照組和牛肉蛋白樣本聚類樹和柱狀圖Fig. 4 Clustering dendrogram and histogram for control versus beef protein groups

圖5 對照組和雞肉蛋白樣本聚類樹和柱狀圖Fig. 5 Clustering dendrogram and histogram for control versus beef protein groups

由圖5可知，對照組和雞肉蛋白組優(yōu)勢菌群也是擬桿菌門、厚壁菌門和變形菌門，且2 組菌門組成差異顯著，樣本聚類明顯區(qū)分。從柱狀圖方框處可以看出，與對照組相比雞肉蛋白組變形菌門、放線菌門相對豐度顯著增加，擬桿菌門相對豐度顯著降低，并且變形菌門變化最明顯。

圖6 牛肉蛋白和雞肉蛋白組樣本聚類樹和柱狀圖Fig. 6 Clustering dendrogram and histogram for beef versus chicken protein groups

如圖6所示，牛肉蛋白和雞肉蛋白2 組樣本微生物分布不均勻。門水平上，牛肉蛋白和雞肉蛋白組腸道微生物組成和相對豐度沒有明顯的差異。由圖6聚類樹可知，a區(qū)域同一樣本在經(jīng)過牛肉蛋白和雞肉蛋白處理后腸道微生物相似度較高，比如NC7和JC7，說明個體差異大于組間差異。同時圖6柱狀圖顯示，b區(qū)域變形菌門相對豐度較高，擬桿菌門相對豐度較低。a區(qū)域也出現(xiàn)和b區(qū)域類似的情況，但變形菌門相對豐度減少，擬桿菌門相對豐度增加。牛肉蛋白和雞肉蛋白組腸道微生物組成和相對豐度沒有顯著差異。

2.6 組間LEfSe分析

LEfSe分析是一種用于發(fā)現(xiàn)高維生物標(biāo)識和揭示基因組特征的方法[23]，用于區(qū)分兩個或以上生物條件下，強調(diào)統(tǒng)計意義和生物相關(guān)性。采用線性判別分析（linear discriminant analysis，LDA）估算每個組分相對豐度對差異影響的大小，并且找出這些微生物。

與對照組相比，牛肉蛋白組影響組間差異的菌共有89 種，其相對豐度和LDA值見圖7。選擇圖7B中影響對照組和牛肉蛋白組差異相對豐度前十（LDA數(shù)值前十，根據(jù)菌門分類），并且對組間差異起重要作用的組分，分別是梭菌屬（Clostridia）、梭菌科（Clostridiales）、毛螺菌科（Lachnospiraceae）、疣微菌科（R u m i n o c o c c a c e a e）、普氏菌屬（Prevotella 9）、Selenomonadales、Negativicutes、韋榮氏菌科（V e i l l o n e l l a c e a e）、腸桿菌科（Enterobacteriaceae）、Proteobacteria。如圖7A所示，將10 組微生物進(jìn)行門水平分類，擬桿菌門：普氏菌屬；變形菌門：腸桿菌科、Proteobacteria，其他都為厚壁菌門。其他水平分類：目水平：Selenomonadales；科水平：梭菌科、毛螺菌科、疣微菌科、韋榮氏菌科、腸桿菌科；屬水平：梭菌屬、Negativicutes、普氏菌屬。

與對照組相比，雞肉蛋白組影響組間差異的菌也有89 種，其相對豐度和LDA值見圖8。選擇圖8B中影響對照組和雞肉蛋白組差異相對豐度前十（LDA數(shù)值前十，根據(jù)菌門分類），并且對組間差異起重要作用的組分，分別是梭菌屬、梭菌科、Selenomonadales、Negativicutes、毛螺菌科、韋榮氏菌科、普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）、疣微菌科（Ruminococcaceae）、普氏菌屬和Proteobacteria。如圖8A所示，將10 組微生物進(jìn)行門水平分類，擬桿菌門：普氏菌屬和普雷沃氏菌科；變形菌門：Proteobacteria；其他都為厚壁菌門。其他水平分類：目水平：Selenomonadales；科水平：梭菌科、毛螺菌科、韋榮氏菌科、普雷沃氏菌科、疣微菌科；屬水平：梭菌屬、Negativicutes、普氏菌屬。

圖7 對照組和牛肉蛋白組LEfSe分析（A）和LDA（B）Fig. 7 LEfSe analysis (A) and LDA (B) between control and beef protein groups

圖8 對照組和雞肉蛋白組LEfSe分析（A）和LDA（B）Fig. 8 LEfSe analysis (A) and LDA (B) between control and chicken protein groups

綜合圖7、8，牛肉蛋白和雞肉蛋白組沒有找到差異菌種。綜上所述：對照組分別和實驗組相比差異結(jié)果的菌群都有89 種。影響差異結(jié)果主要來源于厚壁菌門、變形菌門和擬桿菌門。

2.7 核心菌屬的分析

表2 15 種核心菌屬的相對豐度Table 2 Percent abundance of 15 core species%

圖9 樣品核心菌群在屬水平上分布情況Fig. 9 Distribution of core microbiota at genus level

將3 個組別共135 個樣本，屬水平上相對豐度超過1%定義為優(yōu)勢菌屬[24]，并且選擇共有菌屬為核心菌屬，共發(fā)現(xiàn)15 種核心菌屬（表2和圖9）。菌屬相對豐度排名前五（以2 個實驗組為準(zhǔn)排序）分別為擬桿菌屬（Bacteroides）、大腸桿菌-志賀菌（Escherichia-Shigella）、巨球型菌屬（Megasphaera）、巨單胞菌屬（Megamonas）和普氏菌屬（Prevotella9）。

與對照組相比，牛肉蛋白組普氏菌屬、Parabacteroides、Faecalibacterium3 種菌屬相對豐度顯著降低；巨球型菌屬、巨單胞菌屬和大腸桿菌-志賀菌顯著增加。雞肉蛋白組普氏菌屬、Parabacteroides、Faecalibacterium相對豐度也出現(xiàn)明顯的降低；巨球型菌屬、巨單胞菌屬和大腸桿菌-志賀菌、薩特氏菌屬（Sutterella）、瘤胃球菌組（[Ruminococcus]torquesgroup）類相對豐度顯著增加。牛肉蛋白組和雞肉蛋白組菌屬相對豐度沒有顯著差異。

有益菌屬雙歧桿菌（Bifidobacterium）和乳酸桿菌（Lactobacillus）的相對豐度卻很低，且在3 個組內(nèi)未出現(xiàn)顯著差異。雖然有益菌含量較低，但是和對照組相比，實驗組的菌群相對豐度是增加的，說明人體適當(dāng)吃肉有益腸道有益菌的生長。

3 討 論

本研究是在體外發(fā)酵條件下，采集45 名相似生活背景、飲食習(xí)慣，身體健康的大學(xué)生的糞便，添加牛肉蛋白和雞肉蛋白與之共培養(yǎng)48 h，利用高通量測序分析糞便微生物的組成和結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果顯示微生物定殖在2 種肉蛋白中，微生物的菌群種類和結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯的變化，但牛肉蛋白組和雞肉蛋白組相比，糞便微生物組無明顯的差異。

45 名志愿者糞便微生物優(yōu)勢菌門擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門、放線菌門和梭桿菌門、疣微菌門，與之前研究結(jié)果一致[25]。本實驗結(jié)果表明肉蛋白影響人糞便微生物的組成和結(jié)構(gòu)，這與Zhu Yingying等[26-28]研究發(fā)現(xiàn)小鼠攝食正常肉蛋白會影響腸道菌群的組成和結(jié)構(gòu)的結(jié)論相似，說明實驗結(jié)果具有一定的可靠性。

與對照組相比，肉蛋白組都顯著增加了變形菌門、放線菌門的相對豐度，雞肉蛋白組還降低了擬桿菌門的相對豐度。腸道微生物利用培養(yǎng)基的唯一氮源肉蛋白改變了自我生長狀況，其組成和結(jié)構(gòu)也發(fā)生明顯的差異。但牛肉蛋白和雞肉蛋白組糞便微生物未發(fā)生明顯的變化，可能由于牛肉蛋白和雞肉蛋白氨基酸種類差異較小、肌纖維蛋白和肌漿蛋白組成相似，使得微生物利用狀況相似，對微生物的相對豐度和種類的影響較小[29-30]。另一種可能是人類個體差異大于組間差異，人體腸道菌群的種類受飲食的影響，宿主基因型、年齡等多個因素的影響[31-33]。

與對照組相比，添加牛肉蛋白和雞肉蛋白組分在微生物屬水平上有一定的差異性。雞肉蛋白組不僅顯著變化跟牛肉蛋白組相同的菌屬，另外還顯著降低了薩特氏菌屬和瘤胃球菌的相對豐度。雞肉蛋白和牛肉蛋白在人體內(nèi)蛋白消化吸收不同[30]。普氏菌屬主要利用的底物是糖類物質(zhì)[34]，當(dāng)添加肉蛋白作為唯一蛋白來源，其相對豐度發(fā)生明顯的變化；Faecalibacterium是人體內(nèi)重要的共生菌，發(fā)酵底物是膳食纖維產(chǎn)生丁酸和短鏈脂肪酸[35]。雙歧桿菌和乳酸桿菌2 種有益菌屬在雞肉蛋白組和牛肉蛋白組相對豐度分別為2.15%、1.64%和2.02%、1.37%，添加肉蛋白后其相對豐度有所增加，說明肉蛋白可以促進(jìn)有益菌屬的生長，為人合理健康膳食提供一定的依據(jù)。

4 結(jié) 論

探討牛肉和雞肉蛋白對人糞便微生物組成和結(jié)構(gòu)影響，對連接膳食和人體健康關(guān)系有著重要的意義和科學(xué)價值。本實驗結(jié)果表明，肉蛋白明顯影響腸道微生物的濃度和組成，雞肉蛋白和牛肉蛋白雖然在組成上相似，但兩者影響也有所差異。臨床上牛肉和雞肉膳食如何對人體健康、組織結(jié)構(gòu)、生長情況產(chǎn)生影響有待進(jìn)一步的研究。