老年糖尿病足感染病人調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、CD64指數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比的表達(dá)及意義

周燕 高倩 許海洲 王紅萍

DM 是內(nèi)分泌科最常見(jiàn)的病癥之一，隨著人口老齡化的加劇，其發(fā)病人數(shù)逐年增多。目前研究顯示，DM 會(huì)引起全身炎性反應(yīng)，同時(shí)降低病人免疫功能。由于患病者大多為老年人，其免疫功能本身較弱，故DM 病人發(fā)生感染概率較高［1］。此外有研究指出，DM病人全身炎性反應(yīng)可損傷周?chē)窠?jīng)，引起病人四肢感覺(jué)麻木，而病人平時(shí)搔抓等活動(dòng)容易引起皮膚破潰，增加足部感染概率［2］。目前關(guān)于糖尿病足感染（diabetic foot，DF）的相關(guān)研究是內(nèi)分泌科醫(yī)生探究的熱點(diǎn)。本研究選取調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、CD64指數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比（NEU）作為觀察指標(biāo)，探究老年DF 病人上述指標(biāo)的變化情況，為疾病防治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015 年5 月至2018 年4 月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院收治的42例DF病人為DF 組，病人年齡60～88 歲，平均（69.5±12.7）歲；男22例，女20例；DM病程5～15年，平均（10.5±3.2）年；DF 病程6～35 d，平均（23.4±5.2）d。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均符合WHO 的DF 診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］；（2）病人及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并嚴(yán)重全身性感染或嚴(yán)重心、肝、腎等臟器功能障礙者；（2）合并惡性腫瘤者；（3）近1個(gè)月內(nèi)服用抗生素；（4）足部以外的器官或部位存在細(xì)菌感染；（5）中途退出研究。另同期選取50 例單純DM 病人為DM 組，病人年齡62～90 歲，平均（70.2±13.0）歲；男21 例，女21 例；DM 病程6～16 年，平均（11.2±3.5）年。2 組病人一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 檢測(cè)方法 所有病人均于入院時(shí)清晨空腹抽取5 mL 外周靜脈血，肝素抗凝，取25μL 外周血于EP 管中，加入5μL 熒光標(biāo)記抗體及5μL 同型對(duì)照試劑，常溫孵育20 min，而后加入0.5 mL 紅細(xì)胞裂解液，溶血機(jī)溶血，采用細(xì)胞儀（蘇州賽恩斯儀器有限公司）檢測(cè)病人血CD4+、CD4+CD25+比例并計(jì)算CD4+CD25+/CD4+比值。取3 mL外周血，2500 r/min離心20 min，分離血清，取上清液保存于-80℃冷凍箱待測(cè)。采用流式細(xì)胞儀［碧迪醫(yī)療器械（上海）有限公司］檢測(cè)病人CD64水平；采用免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)病人血清降鈣素原（procalcitonin，PCT）水平；采用ELISA 法檢測(cè)病人血清CRP 水平；采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（武漢科爾達(dá)醫(yī)療科技有限公司）檢測(cè)病人WBC、NEU水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2 組血CD4+CD25+比例和CD4+CD25+/CD4+比值比較 DF 組病人血CD4+CD25+比例和CD4+CD25+/CD4+比值顯著高于DM 組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 2組血CD4+CD25+和CD4+CD25+/CD4+比值的比較（±s）

表1 2組血CD4+CD25+和CD4+CD25+/CD4+比值的比較（±s）

注：與DM組比較，**P＜0.01

CD4+CD25+/CD4+5.36±2.23 9.63±3.55**組別DM組（n=50）DF組（n=42）CD4+CD25+（%）1.97±0.77 3.32±1.57**

2.2 2 組炎性指標(biāo)水平比較 DF 組CD64、CRP 及PCT水平均顯著高于DM組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2 2組炎性指標(biāo)水平比較（±s）

表2 2組炎性指標(biāo)水平比較（±s）

注：與DM組比較，**P＜0.01

PCT（ng/mL）0.11±0.04 12.08±3.09**組別DM組（n=50）DF組（n=42）CD64（%）1.05±0.26 2.43±0.74**CRP（mg/L）6.34±1.38 27.81±4.31**

2.3 2 組WBC、NEU%水 平 比 較 DF 組WBC 和NEU%水平均顯著高于DM 組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表3。

表3 2組WBC、NEU水平比較（±s）

表3 2組WBC、NEU水平比較（±s）

注：與DM組比較，**P＜0.01

NEU%62.45±3.13 75.63±8.25**組別DM組（n=50）DF組（n=42）WBC（×109/L）7.18±1.25 12.06±3.08**

3 討論

目前研究顯示，DM病人皮膚組織長(zhǎng)期處于高糖狀態(tài)，引起WBC 的吞噬和趨化功能顯著下降，利于細(xì)菌增長(zhǎng)［4］。此外，DM 病人機(jī)體合并代謝功能紊亂、周?chē)窠?jīng)及血管病變，可導(dǎo)致病人皮膚組織營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)較差，易發(fā)生皮膚瘙癢及感覺(jué)遲鈍，病人搔抓容易發(fā)生外傷后感染［5］。同時(shí)，由于DM 為慢性代謝性疾病，酮體生成過(guò)多使乳酸的殺菌能力下降，抗體生成減少、脫水及電解質(zhì)紊亂降低機(jī)體防御功能，而代謝紊亂可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能降低，皮膚及軟組織出現(xiàn)傷口時(shí)更增加發(fā)生感染的概率。DF 是DM 病人發(fā)生肢端壞疽、功能喪失的一種疾病。目前由于缺少檢測(cè)DF 的特異性技術(shù)，大多數(shù)病人就診時(shí)機(jī)已較晚，病人病情一般進(jìn)展至較為嚴(yán)重的程度同時(shí)伴有足部嚴(yán)重感染，預(yù)后較差［6-7］。因此，對(duì)于老年DF病人而言，防治時(shí)仍然以早診斷、早控制為主要原則，對(duì)提高老年DF 病人預(yù)后具有重要意義。

機(jī)體免疫功能的調(diào)控主要通過(guò)細(xì)胞免疫中各個(gè)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的免疫因子來(lái)進(jìn)行，T 淋巴細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞（NK）參與介導(dǎo)機(jī)體炎癥反應(yīng)及免疫功能［8］，對(duì)已損傷組織的修復(fù)、細(xì)胞的生長(zhǎng)及機(jī)體創(chuàng)傷感染等方面具有重要作用，故T 細(xì)胞是評(píng)估機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)之一。此外T 淋巴細(xì)胞亞群在細(xì)胞免疫中發(fā)揮中心調(diào)控作用，當(dāng)病原體進(jìn)入機(jī)體后，機(jī)體識(shí)別系統(tǒng)將其作為外來(lái)抗原進(jìn)行標(biāo)記，并抑制T 淋巴細(xì)胞分化為CD4+細(xì)胞的過(guò)程，導(dǎo)致CD4+細(xì)胞數(shù)量減少，進(jìn)而降低如IL-2 等淋巴因子的表達(dá)水平，影響B(tài) 細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫過(guò)程［9］。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是近年來(lái)關(guān)注度較高的T 細(xì)胞群，既往研究證實(shí)，機(jī)體在細(xì)菌、病毒及細(xì)胞因子的刺激下，在體外或體內(nèi)均能上調(diào)機(jī)體CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)水平，對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制功能具有促進(jìn)作用［10］。而CD64與腫瘤免疫過(guò)程以及自身免疫性疾病具有密切關(guān)系，相關(guān)研究顯示，CD64在機(jī)體抗感染過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，是機(jī)體免疫反應(yīng)過(guò)程中的關(guān)鍵因子［11］。PCT 是一種多功能免疫調(diào)節(jié)蛋白，相比其他炎癥活性因子，其在血液中更為穩(wěn)定，且半衰期較長(zhǎng)，其水平可隨著病情共同改變，具有較高的靈敏度和特異度［12］。正常人體血清中PCT 含量極少，當(dāng)機(jī)體受到細(xì)菌感染刺激時(shí)，可造成PCT 大量釋放入血，且在感染后3～4 h 即可檢出PCT 水平升高。本研究結(jié)果顯示，DF組病人血CD4+CD25+比例和CD4+CD25+/CD4+比值顯著高于DM 組，說(shuō)明老年DF病人存在細(xì)胞免疫功能的缺陷，該結(jié)果與李曉春等［13］的研究結(jié)果相近；此外DF 組CD64、CRP、PCT、WBC 和NEU水平均顯著高于DM組，說(shuō)明老年DF病人存在著程度更重的炎性反應(yīng)，該結(jié)果與蔡春沉等［14］研究結(jié)果一致。

綜上所述，對(duì)于老年DF 病人而言，在積極抗感染治療基礎(chǔ)上對(duì)病人進(jìn)行抗炎治療具有重要意義。目前關(guān)于DM發(fā)病的分子及細(xì)胞研究仍然處于不斷探究之中，而CD4+/CD25+作為免疫反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)因子，其可能作為判斷老年DF病人病情的指標(biāo)。